军团菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立一种特异、快速、敏感,同时能区分嗜肺和非嗜肺军团菌的荧光定量PCR方法,用于检测临床和环境样品。方法利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种mip基因的保守序列,设计引物和TaqMan探针。提取嗜肺军团菌标准菌株(LP1)DNA,分别构建2个含有目的基因的标准质粒作为阳性模板。优化荧光PCR反应条件和反应体系,对方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。并对环境水样及80份临床痰样进行检测。结果该方法检测灵敏度达10标准质粒拷贝数/反应,具有高度特异性、稳定性。整个过程约需2 h。对35份环境水样进行检测,检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌,所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对临床80份随机痰液标本进行检测,2份嗜肺军团菌阳性。结论 TaqMan探针荧光定量PCR双管检测是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌的特异、敏感、稳定的方法,可用于基层医院对环境标本及临床痰样的检测。     

黄病毒检测工程细胞系的构建及功能鉴定

目的:构建黄病毒检测工程细胞系并对其功能进行鉴定。方法:以含有登革4型病毒814669株全长感染性克隆的质粒P4质粒为基础,缺失pr M-E基因1 945bp,构建含有红色荧光蛋白m Cherry报告基因的登革病毒复制子载体P4-△pr ME-m Cherry。以P4-△pr ME-m Cherry为基础,通过融合PCR方法,以真核表达载体p CDNA3.1+为骨架,构建用于黄病毒检测细胞筛选的缺陷型真核表达质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry。脂质体转染法将质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry转染BHK-21细胞,G418进行筛选,获得的阳性细胞克隆经96孔板系列稀释筛选、纯化克隆细胞BHKFlavivirus。结果:BHK-Flavivirus细胞感染登革病毒60h后,能够在荧光显微镜下检测到红色荧光蛋白m Cherry的表达,说明BHK-Flavivirus能够用于外源黄病毒的检测。BHK-Flavivirus细胞分别感染黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4),可以检测到红色荧光;而辛德毕斯病毒(XJ-160)、和基孔肯雅病毒(SD08Pan)、盖塔病毒(HB0234)等正链RNA病毒感染后则不出现红色荧光。结论:以上结果表明BHK-Alphavirus细胞可用于未知蚊媒黄病毒检测,该方法通过报告基因表达与否,能够高效、特异的甄别主要蚊媒甲病毒和黄病毒,同时该方法有利于稀缺病毒的分离、保存,操作方法简单、直观,有望应用于临床检测及病毒性生物战剂的早期甄别。     

大熊猫粪便样品中犬瘟热病毒的检测

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒(CDV)N基因序列,设计合成1对特异性引物,以犬瘟热病毒疫苗中提取的RNA为阳性模板建立了快速检测CDV的RT-PCR方法,结果显示,所建立的CDV RT-PCR扩增得到与理论设计值大小一致的456 bp的特异性片段,对犬细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、大肠杆菌(E.coli)和新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性;最低可检出约1.53×10~2拷贝/μL的核酸;重复性试验结果表明,该方法检测重复性好.此方法对成都大熊猫繁育研究基地的37份眼观正常的大熊猫粪便样品检测,未检测出犬瘟热病毒,与胶体金试纸卡检测结果一致.     

兔瘟的综合防治措施

<正>兔瘟是兔病毒性出血症的俗称,由兔瘟出血症病毒引起的一种高度接触性、烈性传染病,传播迅速,发病率极高,病期较短。一年四季均易发生,以春、秋和冬季发病较多。各品种的家兔均易发生,但是长毛兔发病最为敏感。主要发于2月龄以上的青、壮年兔,3月龄以上的成年兔发病率和死亡率>95%,幼兔发病率较低,对养兔业可造成毁灭性的经济损失,需要引起高度的重视。     

一起兔瘟病的诊断与防治

<正>兔病毒性出血症俗称兔瘟,是由兔出血症病毒引起的一种急性、高度致死性传染病。热性、败血性的传染病。其主要特点是潜伏期短,发病急,传播速度快,呈爆发性流行;病理变化为呼吸系统出血,实质器官肿大出血。该病一年四季均发,多发于健壮青年兔,给养兔业造成很大经济损失。1基本情况该兔场始建于2017年5月。该户主由于自己喜爱,资金雄厚,养殖目标不明确,所以饲养兔的品种杂乱,有日本大耳兔、青紫蓝、公羊兔、獭兔等多个品种。养殖场存栏为453只,其中母兔312只,仔兔120,另外是公兔、断乳和育成兔21只。由于场主外行,兔场管理混乱。通过从周边乡镇收购成年母兔,多以青年兔     

斑点叉尾鮰肠败血症PCR诊断方法的建立

为了建立快速、敏感的聚合酶链式反应(PCR)诊断斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus的肠败血症技术,作者根据NCB I公布的鮰爱德华氏细菌序列,设计了一对特异性诊断引物CM3/CM4,对鮰爱德华氏细菌特异基因片段进行PCR扩增试验,PCR反应条件的优化以及不同检测材料的比较,同时测试了该方法的特异性和敏感性,并对广西4个市县临床样品进行了检测。结果表明:用该引物可以扩增到与预计大小相符的276 bp鮰爱德华氏菌特异性片段;PCR反应与Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河弧菌、迟缓爱德华氏菌及海豚链球菌无交叉反应;用该PCR法可以检测出病鱼脑、肝、肾及脾中的病原菌,检测的最低细菌数为12个,且病鱼内脏组织、菌落及菌液均可直接用于该PCR扩增;临床菌株检测结果与基于菌株16S rRNA基因序列系统进化分析和生化鉴定结果一致。因此,本试验中所建立的PCR检测方法在斑点叉尾鮰肠败血症的诊断和防治方面具有较好的应用前景。     

儿童肺炎支原体感染三种实验诊断方法评价

目的:探讨儿童肺炎支原体感染的快速、简便、有效的临床实验室诊断方法。方法:对2016年12月收集的200例临床呼吸道感染患儿的咽拭子和静脉血样本进行肺炎支原体快速鉴定培养镜检、抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR(Polymerase chain reaction)分析。以快速培养鉴定镜检法为诊断肺炎支原体感染金标准,比较抗体检测、抗原检测及荧光定量PCR三种诊断方法的灵敏度、特异度和Youden指数(正确诊断指数)。结果:抗体检测的灵敏度、特异度和Youden指数分别为76.3%、77.9%、54.2%;抗原检测为37.7%、89.5%、27.2%;荧光定量PCR为93.0%、96.5%、89.5%。荧光定量PCR法的灵敏度、特异度和Youden指数均高于抗体检测和抗原检测法(P<0.05),三者Youden指数两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:荧光定量PCR具有较高的灵敏度、特异度和Youden指数,可以在未来替代快速鉴定培养镜检、抗体检测和抗原检测法,作为临床诊断儿童肺炎支原体感染的快速、简便而有效的实验室诊断方法。     

一株鸡源新城疫病毒的分离鉴定

从湖北某养殖厂一只死亡鸡只中分离出一株病毒,通过血凝实验、血凝抑制实验和PCR方法对其进行了分离鉴定。结果表明,该病毒能与1%鸡红细胞发生凝集反应,并且该病毒液能被新城疫标准阳性血清所抑制,而不能被禽流感标准阳性血清所抑制,新城疫病毒的F基因PCR引物扩增出特异性条带,证明分离株为新城疫病毒,命名为HB1910。分离毒的血凝价为1:512,EID_(50)为10~(7.83)∕0.1 mL用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测,结果分离毒株在约350 bp处均可见到清晰的目的条带,而禽流感引物扩增无条带,证明分离毒为鸡新城疫病毒。     

兔瘟及兔肠炎的诊断及防治方法

<正>近年来,养兔作为广大贫困地区百姓脱贫的首选项目悄然兴起,养兔业如雨后春笋快速发展,在看到效益的同时,也要充分考虑兔养殖的难度,可以说决定成败的关键就在于兔只的疾病控制,若方法得当,防治及时养兔业的确是一个投资少、见效快的好项目。为此,笔者就兔只常见的两种疾病的确诊和治疗提出建议供养殖户参考。1兔瘟1.1兔瘟的临床表现兔瘟,又叫病毒性出血症,是由病毒引起的一种急性败血性传染病,主要感染青年兔和成年兔,2月龄以下幼兔发病率     

二重PCR快速检测中蜂囊状幼虫病病毒与东方蜜蜂微孢子虫方法的建立

中蜂囊状幼虫病和东方蜜蜂微孢子虫病是中蜂中常见的病害,对中蜂生产造成巨大危害,病原的早期快速检测是病害防控的重要手段。建立1种基于RNA提取的,快速、准确鉴定中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae,Nc)2种病原的二重PCR检测法。该方法同时检测CSBV和Nc的灵敏度可分别低至6与3个拷贝,且准确可靠;与两病原的单一PCR检测法灵敏度和精度一致,而二重PCR方法更加简便快速,为中蜂囊状幼虫病和东方蜜蜂微孢子虫病的早期快速诊断提供了重要的手段。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

住宅的多样性——日本集合住宅的借鉴

以西安目前住宅市场发展的现状及其存在的弊端为例 ,说明我国目前住宅需求的多样化和设计手法的单一化之间的矛盾 ,论述了与我国有着相似文化背景的日本在解决不同住宅需求时采用形式多样、功能各异的集合住宅的理念 .试图以此借鉴 ,使我国建筑设计界了解日本集合住宅的发展演变过程 ,吸取他们的经验 ,为我们在住宅多样化研究和设计时提供一种不同的思路和方法 .     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。