里氏木霉产纤维素酶研究进展

木质纤维素类生物质被认为是重要且可持续的可再生能源,其主要组成部分是纤维素。纤维素酶是一种能将纤维素分解为葡萄糖的复合酶,能有效地降解木质纤维素生物质。真菌、细菌、放线菌、酵母等多种微生物均可以产生纤维素酶,其中里氏木霉具有完整的纤维素酶系结构,常作为生物技术领域中一个重要菌株,广泛应用于纤维素酶的商业生产。介绍了纤维素酶的作用机理,综述了里氏木霉产纤维素酶的发展现状和研究进展,讨论了生产工艺(如培养条件及产酶诱导物等)对纤维素酶生产的影响,阐述了通过化学诱变及基因改造构建高产纤维素酶的里氏木霉的研究进展以及纤维素酶生产的主要瓶颈,以提供更经济的生产方案,将纤维素酶广泛应用于工业生产。     

里氏木霉几丁质酶基因的克隆及其同源转化研究

丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei)外切几丁质酶具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性.根据里氏木霉基因组数据库获得了一个编号为21725的外切几丁质酶nag1基因序列,根据检索结果,从里氏木霉QM9414基因组DNA中克隆获得1.9kb的基因片段.构建了以cbh1为启动子和终止子的重组质粒pCbhNag,与含有pyr4基因的质粒pSKpyr4共转化里氏木霉pyr4缺陷株RutC30ΔU3.共得到99个转化子,初筛得到5株乙酰氨基葡萄糖苷酶酶活较高的转化子,其中N3菌株的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶酶活可达26.65 U/mL,而出发菌株的胞外几丁质酶几乎无酶活.成功实现了里氏木霉几丁质酶的克隆及同源表达.     

基因组改组选育磷脂酶A1生产菌

以蜡样芽胞杆菌W22为出发菌株,通过紫外诱变和等离子体诱变得到若干株酶活力提高的突变株。以紫外诱变突变菌株W22-a、W22-g和等离子诱变菌株W22-5为基因组改组的亲本,考察了原生质体的制备、灭活条件。原生质体的最佳制备条件是:溶菌酶浓度0.5mg/ml,酶解时间90min,反应温度25℃,预处理甘氨酸浓度为20mg/ml。选择紫外灭活160秒、热灭活16分钟的剂量来完成亲本原生质体的灭活。从众多融合子中筛得一株突变株WR2-2,发酵酶活为17.78U/ml,相对于出发菌株W22(9.22U/ml)提高酶活达92.8%。     

α-单月桂酸甘油酯对致病菌的抑制作用

试验旨在通过牛津杯抑菌实验和摇瓶实验探究α-单月桂酸甘油酯对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。结果显示,浓度≤40 mg·mL~(-1)的α-单月桂酸甘油酯对大肠杆菌无明显抑菌作用,浓度≥0.156 mg·mL~(-1)的α-单月桂酸甘油酯对沙门氏菌有抑制作用,浓度≥0.078 mg·mL~(-1)的α-单月桂酸甘油酯对金黄色葡萄球菌有抑制作用。浓度为1 mg·mL~(-1)的α-单月桂酸甘油酯对金黄色葡萄球菌的抑制作用在培养4 h出现,对沙门氏菌的抑制作用在培养12 h出现。     

三菌混合固态发酵产纤维素酶

以稻草粉和麸皮为主要原料,对白腐菌(White-rot fungi)NS75、黑曲霉(Aspergillus niger)NS83和絮凝酵母(Saccharomyces cerevisiae)SP5混合菌固态发酵产纤维素酶进行研究。实验结果显示,在白腐菌和黑曲霉双菌混合培养2d后接入絮凝酵母,培养到第7d产酶达到峰值;三菌混合发酵产纤维素酶酶活明显高于白腐菌和黑曲霉双菌混合培养,其β-葡萄糖苷酶(β-G)和羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活比白腐菌(White-rot fungi)NS75和黑曲霉(Aspergillus niger)NS83双菌发酵产酶分别提高了143.3%和68.2%。单因素实验和正交实验结果表明,当稻草粉麸皮质量比为8∶2,料水比为1∶2,白腐菌NS75、黑曲霉NS83和絮凝酵母SP5的接种比例为1∶2∶1.5(v/v/v)时,于30℃培养7d,固态发酵基中β-G和CMCase酶活分别达到62305U/g和30241U/g。     

天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖机制研究

目的:探讨天马颗粒剂抑制人结肠癌细胞株SW480增殖的作用,并对其增殖抑制作用机制进行初步探讨。方法:采用不同质量浓度的天马颗粒剂(10~(-1)g·mL~(-1)、10~(-2)g·mL~(-1)、10~(-3)g·mL~(-1)及10~(-4)g·mL~(-1))处理人结肠癌细胞株SW480,同时设立空白对照组(RPMI 1640培养液处理)及阳性对照组(以5-氟尿嘧啶处理)。观察SW480细胞的形态学动态变化,以MTT法检测各组SW480细胞的增殖情况,另以速率法检测各组SW480细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)比活性的变化情况。建立人结肠癌细胞株SW480免疫抑制小鼠肾包膜下移植瘤模型,同时设立天马颗粒剂组(天马颗粒剂灌胃),空白对照组(生理盐水灌胃)及阳性对照组(5-氟尿嘧啶腹腔注射),8 d后采集肿瘤组织,以免疫组织化学法及图像分析技术定量检测各组移植瘤SW480细胞中Ki-67及PCNA基因的表达情况。结果:随着天马颗粒剂质量浓度的增加,SW480细胞逐渐稀疏,散在生长,细胞变大,透明度差,颗粒增多;当天马颗粒剂质量浓度为10~(-4)g·mL~(-1)时,SW480细胞颜色加深,且部分细胞从瓶壁脱落,甚至部分细胞可见坏死崩解的碎片;实验组10~(-1)g·mL~(-1)、10~(-2)g·mL~(-1)、10~(-3)g·mL~(-1)及10~(-4)g·mL~(-1)的天马颗粒剂均可显著抑制SW480细胞增殖,且随天马颗粒剂作用时间延长及质量浓度增大,SW480活细胞计数逐渐降低(P<0.05);随着质量浓度的增加OD值逐渐降低,增殖抑制率逐渐升高(P<0.05);10~(-1)g·mL~(-1)、10~(-2)g·mL~(-1)、10~(-3)g·mL~(-1)及10~(-4)g·mL~(-1)的天马颗粒剂均会使SW480细胞的AKP比活性升高,且以10~(-2)g·mL~(-1)时的AKP比活性最高,且显著高于其他各组(P<0.05或P<0.01)。阳性对照组AKP比活性与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ki-67及PCNA基因主要表达于SW480细胞的细胞核,天马颗粒剂组及阳性对照组Ki-67及PCNA基因阳性着色较空白对照组明显减少,其表达的面积均值及积分光密度均显著降低(P<0.01)。结论:天马颗粒剂可显著抑制人结肠癌细胞株SW480增殖,原因可能与其诱导SW480细胞成熟分化或抑制SW480细胞Ki-67及PCNA基因表达相关。     

绿原酸和三羟基黄酮对奇异变形杆菌抑菌效果研究

试验旨在研究绿原酸和三羟基黄酮对奇异变形杆菌的抑菌效果,采用牛津杯法和微量肉汤稀释法,探讨绿原酸和三羟基黄酮对奇异变形杆菌的抑菌活性。结果表明,绿原酸和三羟基黄酮对奇异变形杆菌均具有较强的抑菌活性,在本试验浓度梯度中,浓度为200 mg·mL~(-1)时抑菌效果最好,绿原酸的抑菌圈直径约为16.74 mm,最低抑菌浓度为0.2 mg·mL~(-1),三羟基黄酮的抑菌圈直径约为23.53 mm,最低抑菌浓度为0.125 mg·mL~(-1)。结果表明,两种样品均对奇异变形杆菌有较好的抑菌效果。     

重组大肠杆菌产Streptomyces sp.FA1来源木聚糖酶的摇瓶发酵优化

为了实现来源于Streptomyces sp.FA1的木聚糖酶的高效胞外分泌表达,对E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)/coe/xynA基因工程菌的发酵产酶诱导条件进行优化,获得最优的诱导条件为25℃发酵6 h后添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。在此基础上对发酵培养基进一步优化,得到最优培养基成分为:甘油11 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨8 g/L,磷酸盐浓度89 mmol/L,镁离子4mmol/L。最终酶活达到780.2 U/ml,为未优化前的2.2倍,是目前大肠杆菌摇瓶发酵产木聚糖酶的最高表达水平,为实现该酶的工业化生产奠定基础。     

出芽短梗霉A5产胞外多糖发酵条件的优化及产物结构鉴定

基于筛选获得能够生产分子量较高且无色素的普鲁兰多糖酵母菌株,对其进行菌株鉴定、产多糖发酵条件优化和多糖产物鉴定,旨在为工业上普鲁兰多糖发酵提供新的菌株来源。以YPD固体培养基为筛选培养基,氯霉素为筛选压力,曲利苯蓝为筛选指示剂;通过形态学,ITS间隔序列分析对筛选出的A5菌株进行鉴定。采用单因子优化A5菌株的最佳发酵条件;利用普鲁兰酶酶解并结合薄层层析法、红外光谱以及凝胶渗透色谱进行结构鉴定和分子量的测定。A5菌株鉴定为出芽短梗霉属,并被命名为出芽短梗霉A5。最优的发酵条件8%(w/v)麦芽糖,1%(w/v)酵母粉,2%(w/v)蛋白胨,0.5%(w/v)K_2HPO_4,0.06%(w/v)(NH_4)_2SO_4,0.03%(w/v)CaCl_2,pH6,7%(v/v)接种量;经过结构鉴定得知:该菌株的胞外产物是普鲁兰多糖,分子量为63.84 kDa。由此获得了一株生产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株A5,产物无色素且分子量较高。经过初步的发酵条件优化,在最佳发酵条件下发酵培养后,获得普鲁兰多糖的产量为22.9 g/L。综合上述结果可知,菌株A5能够作为工业上生产普鲁兰多糖的重要候选菌株。     

木耳菌糠发酵饲料的研究

以木耳菌糠为原料,采用微生物固体发酵技术及微生物种子扩大培养技术,用发酵种子(大球盖菇、产朊假丝酵母、乳酸菌)降解木耳菌糠中的纤维素、半纤维素和木质素来增加菌糠作为饲料的营养价值和适口性。试验通过单因素试验和正交实验,确定种子固体培养基组成和培养条件对木耳菌糠纤维素含量以及营养价值和适口性的影响。结果表明,最佳培养条件是大球盖菇时添加CaSO_4 0.04 g·kg~(-1),尿素0.4 g·kg~(-1),玉米粉30 g·kg~(-1),发酵24 d;培养产朊假丝酵母时初始pH为5.5,尿素添加量10 g·kg~(-1),摇床转数为140 r·min~(-1)。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

住宅的多样性——日本集合住宅的借鉴

以西安目前住宅市场发展的现状及其存在的弊端为例 ,说明我国目前住宅需求的多样化和设计手法的单一化之间的矛盾 ,论述了与我国有着相似文化背景的日本在解决不同住宅需求时采用形式多样、功能各异的集合住宅的理念 .试图以此借鉴 ,使我国建筑设计界了解日本集合住宅的发展演变过程 ,吸取他们的经验 ,为我们在住宅多样化研究和设计时提供一种不同的思路和方法 .     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。