枯草芽孢杆菌产芽孢发酵培养基的优化研究

在三角瓶培养条件下,采用单因素实验对枯草芽孢杆菌B53发酵培养基碳源、氮源进行了优化。在此基础上进行了正交实验,确定了菌株B53最佳的产孢发酵培养基为葡萄糖25g/L、大豆蛋白胨14g/L、玉米浆17g/L、NaCl 3g/L,MgSO_4 0.2g/L。在最优条件下发酵培养,芽孢浓度为9.6×10~9个/mL。     

苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基的优化

采用正交实验法,对苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基进行优化,将发酵产品干燥粉碎后制成菌悬液,通过测量其吸光度来确定不同农副产品培养基成分对苏云金芽孢杆菌发酵的影响.实验结果表明,不同培养基成分配比对发酵效果影响差别很大,确定最佳培养基组分为:麦麸63.9%、豆饼粉16.0%、玉米粉8.0%、酵母粉1.6%、米糠8.0%、KH2PO4 0.5%、FeSO4 0.3%、(NH4)2SO4 1.1%和MgSO4 0.6%.     

解淀粉芽孢杆菌ZM9液体发酵伊枯草菌素A培养基优化

运用单因子实验法和正交实验法,得到解淀粉芽孢杆菌ZM9液体发酵伊枯草菌素A的优化培养基为:豆粕80 g/L,玉米淀粉30 g/L(液化处理),KH2PO41 g/L,Mg SO40.5 g/L,Fe SO40.15 g/L,Mn SO40.05 g/L,伊枯草菌素A的产量为3.37 g/L,较出发培养基产量2.19 g/L提高了53.88%。     

解淀粉芽孢杆菌ZM9液体发酵伊枯草菌素A培养基优化

运用单因子实验法和正交实验法,得到解淀粉芽孢杆菌ZM9液体发酵伊枯草菌素A的优化培养基为:豆粕80 g/L,玉米淀粉30 g/L(液化处理),KH2PO41 g/L,Mg SO40.5 g/L,Fe SO40.15 g/L,Mn SO40.05 g/L,伊枯草菌素A的产量为3.37 g/L,较出发培养基产量2.19 g/L提高了53.88%。     

枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂条件的优化

探讨了不同碳源、氮源、培养时间、温度、初始pH和谷氨酸钠添加量对枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂条件的研究,并通过数据拟合,创建了相应的数学模型,通过求解得出最佳的培养条件。枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂的最佳培养条件为:以蔗糖为碳源,添加量为2.25%;酵母膏为氮源,添加量为0.64%;谷氨酸钠4.50%、初始pH7.1、培养温度33℃。以此条件培养枯草芽孢杆菌AS1-296产絮凝剂的絮凝率为75%以上。     

枯草芽孢杆菌BSD-2菌株喷雾干燥工艺优化

为研制生物农药新剂型,利用喷雾干燥法制备浓缩枯草芽孢杆菌BSD-2菌粉。以集粉率和抑菌活性为指标,确定最佳喷雾干燥工艺条件。在发酵液中加入15%β-环糊精作为填料,最佳入口温度为170℃,料液温度为30℃,热风量为20 m3/h,入料流量为15 m L/min。此条件下喷雾集粉率达到25.4%,效价保留率为66%,BSD-2菌体存活率为75%。     

苏云金芽孢杆菌高浓度液体发酵培养基的优化研究

以葡萄糖和甘油作碳源进行苏云金芽孢杆菌液体发酵,其发酵效果明显优于原实验室优化培养基,680 nm处的吸光度增加了5～6倍,得到的高浓度培养基成分为:胰蛋白胨5.0g·L-1、酵母膏5.0 g·L-1、葡萄糖(或甘油)20 g·L-1、KH2PO4 0.3 g·L-1、Na2 HPO4 1.1 g·L-1、MgSO4·7H2O 1.0 g·L-1、FeCl2·6 H2O 0.02 g·L-1、CaCl20.02 g·L-1、EDTA 0.2g·L-1、微液1 mL·L-1,pH值7.2.用葡萄糖作碳源进行8 L发酵罐小试,发酵过程中菌体生长正常,工业发酵采用此培养基可以大大降低发酵成本.     

巨大芽孢杆菌产青霉素酰化酶培养基的优化

通过正交实验考察了苯乙酸、酶水解酪蛋白和溶氧对产青霉素G酰化酶的影响,实验中苯乙酸作为诱导剂和碳源起作用,其消耗与溶氧具有交互作用,正交实验表采用L9（3^4）。结果表明,苯乙酸含量与溶氧浓度是最主要的因素,最优发酵培养基组成为：酶水解酪蛋白含量为10 g/L,苯乙酸含量为20 g/L,MgCl2·6H2O含量为0.5 g/L,FeCl3·6H2O含量为0.002 g/L,250 mL三角瓶装液量为30 mL。     

木醋杆菌的培养基优化研究

采用六因素三水平正交实验对木醋杆菌Acetobacter xylinum HN001的培养基进行了优化,确定了最佳培养基组成为:葡萄糖30 g/L,蛋白胨7.5 g/L,酵母粉10 g/L,磷酸氢二钠7.5 g/L,柠檬酸0.5 g/L,pH 5.0,30℃。采用优化的培养基制备细菌纤维素,应用傅立叶红外光谱、热重分析和扫描电子显微镜对其结构和性能进行表征。红外光谱测试显示含有纤维素的特征吸收峰。热重分析结果表明细菌纤维素最大失重温度为319.06℃,热稳定性较好。扫描电镜观察到细菌纤维素的纳米网状结构。     

一株采油枯草芽孢杆菌发酵条件优化

对一株适用于采油的枯草芽孢杆菌发酵培养基组成和发酵条件进行了优化。通过实验室内的摇床发酵,得到优化后培养基为:蔗糖50 g/L,NaNO_3 3.4 g/L,NH_4Cl 1.1 g, KH_2PO_4 2.5 g/L,12H_2O·Na_2HPO_4 30 g/L,7H_2O·MgSO_4 0.8 g/L,脂肽平均产量为4.2 g/L,表面张力可降低至25.15 mN/m;同时,因为在采油工业中,每吨NH_4Cl比每吨NaNO_3的成本低30%左右,所以通过NH_4Cl的加入,减少了NaNO_3的用量,大大降低了发酵成本;最佳培养条件为:温度37℃,装液量150 mL/250 mL,发酵时间100 h。     

玉米水解糖液体发酵灵芝培养基的优化

采用摇瓶液体发酵的方法,以灵芝多糖为指标,对赤芝G22菌株液体发酵培养基进行了研究.通过对培养基中碳源和氮源种类及其含量的选择优化,得到多糖高产的培养基配方为:玉米粉水解糖(以葡萄糖计)6%,蛋白胨(以可溶性蛋白质计)0.15%,KH2PO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.075%,pH值6.0.采用优化的培养基液体发酵赤芝G22菌株,多糖产量由1.526 g·L-1提高到2.169 g·L-1,提高了42.13%.     

亚心形扁藻培养基的优化及光合特性

以均匀实验设计方法优化亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)培养基,采用U10*(108)均匀设计实验考察NO3--N, PO43--P, 缓冲体系(Tris-HAc)三因素对亚心形扁藻生长的影响,同时也考察了与其光合作用相关的PSII光化学活性、藻液pH、集光色素3个指标的变化. 结果表明,在NO3--N 9.5 mmol/L, PO43--P 0.34 mmol/L, Tris-HAc 6.7 mmol/L的优化条件下,亚心形扁藻生长迅速,15 d藻细胞密度增殖到(8.28±0.51)×106 mL-1. Tris-HAc体系能够维系藻细胞在最优pH条件下增殖,高浓度氮源利于PSII光化学活性保持恒定和集光色素的积累,从而提高了光能利用效率,促进藻细胞生长.     

利用响应面分析法优化鸟苷发酵培养基

目的利用响应面分析法对鸟苷发酵培养基进行优化,提高鸟苷产量。方法采用响应面分析法对鸟苷发酵培养基的3种主要成分葡萄糖、酵母粉和豆饼水解液进行优化。用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种因素与鸟苷产量之间的函数关系。用最终优化的配方进行3次验证试验。结果通过岭脊分析,获得培养基中3因素最佳浓度为:葡萄糖12.0%,酵母粉1.4%,豆饼水解液4.0%,发酵液鸟苷最高产量可达28.3g/L。3次验证试验所测得的鸟苷产量分别为28.14、28.32和27.86g/L,平均值为28.10g/L,与预测结果基本一致。结论利用响应面分析法可优化鸟苷发酵培养基,显著提高鸟苷的产量。     

培养条件及培养基组分对粘质沙雷氏菌生长及产D-乳酸的影响

通过摇瓶实验,确定粘质沙雷氏菌发酵生产I）-乳酸的培养条件为：温度34℃,pH值6．5,种子液接种量5％,载液量为150mL／500mL,采用前期通气有氧培养至菌体对数生长后期、而后厌氧发酵产酸的两阶段培养工艺。考察培养基各组分对菌体生长及乳酸产量的影响,确定葡萄糖及酵母粉作为碳、氮源,并补充添加适量的无机氮。培养基各组分如下（g·L^-1）：葡萄糖15,酵母粉15,KH2P041．5,K2HP04·3H2O2．0,MgSO4·7H2O1．0,FeSO4·7H2O0．03,MnSO4·H2O0．005,以此培养条件及培养基配方进行摇瓶发酵,D-乳酸产量由（13．5±1．29）g·L^-1提高至（29．0±1．42）g·L^-1,提高一倍以上,光学纯度大于97％。     

Evaluation of a Serum-Free Medium for Human Epithelial and Stromal Cell Culture

Over the past decade, growing demand from many domains (research, cosmetics, pharmaceutical industries, etc.) has given rise to significant expansion of the number of in vitro cell cultures. Despite the widespread use of fetal bovine serum, many issues remain. Among them, the whole constitution of most serums remains unknown and is subject to significant variations. Furthermore, the presence of potential contamination and xenogeny elements is challenging for clinical applications, while limited production is an obstacle to the growing demand. To circumvent these issues, a Serum-Free Medium (SFM) has been developed to culture dermal and vesical fibroblasts and their corresponding epithelial cells, namely, keratinocytes and urothelial cells. To assess the impact of SFM on these cells, proliferation, clonogenic and metabolic assays have been compared over three passages to conditions associated with the use of a classic Fetal Bovine Serum-Containing Medium (FBSCM). The results showed that the SFM enabled fibroblast and epithelial cell proliferation while maintaining a morphology, cell size and metabolism similar to those of FBSCM. SFM has repeatedly been found to be better suited for epithelial cell proliferation and clonogenicity. Fibroblasts and epithelial cells also showed more significant mitochondrial metabolism in the SFM compared to the FBSCM condition. However, the SFM may need further optimization to improve fibroblast proliferation.     

螺旋藻回用培养液组成对藻细胞生长的影响

将螺旋藻回用培养液补齐营养盐用于培养螺旋藻,考察了螺旋藻生物量、培养液中硝酸盐和磷酸盐及培养末期螺旋藻胞内生化成分含量对藻细胞生长的影响;用超滤膜对回用培养液中物质进行分子量分级,分析各级组分对螺旋藻的抑制效应,确定抑制物的分子量分布范围,并分析其成分. 结果表明,回用培养液中的螺旋藻胞外分泌物对藻细胞生长有明显抑制作用,比生长速率比新鲜培养基中低23%,且会抑制藻细胞对营养盐的吸收及胞内蛋白和叶绿素合成,对硝酸盐、磷酸盐的吸收分别低36%和37%,胞内蛋白及叶绿素含量分别为新鲜培养基中的0.85和0.65倍. 抑制物为分子量大于100 kDa的螺旋藻胞外多糖.     

C50株抗CEA杂交瘤细胞抗体生成动力学及体外培养条件的优化

目的　研究C5 0株抗CEA杂交瘤细胞的抗体生成动力学 ,确定优化体外培养条件。方法　体外静态培养C5 0细胞 ,采用ELISA和细胞计数的方法检测培养上清抗体浓度和细胞数量 ,分析细胞生长与抗体分泌的关联性。采用体内复壮和添加新型免疫增强剂CpGODN的方法 ,尝试恢复长期体外培养的C5 0细胞的抗体生成能力。结果　C5 0细胞的抗体生成动力学为非生长关联型 ,经过体内复壮 ,C5 0细胞体外培养上清中抗体浓度显著提高 ,但活细胞密度或细胞活力均未发生明显变化。在培养基中添加一定浓度的CpGODN ,可以恢复长期体外培养的C5 0细胞的抗体生成能力。结论　根据细胞的抗体生成动力学特征 ,通过调节细胞的生长状态 ,可提高上清抗体浓度。根据抗体基因的组织特异性表达的机制 ,通过优化杂交瘤细胞的体外培养条件 ,能保持细胞正常的抗体生成能力 ,维持细胞高且稳定的上清抗体浓度     

阿维菌素产生菌培养条件的优化

对阿维链霉菌（Streptomyces Avermitilis）3～6的培养条件进行优化。结果表明：斜面培养基成分中酵母粉的产地、斜面种子的培养周期及棉塞的重量对斜面种子的质量及发酵结果的影响程度较大,经分析,得到最适酵母粉为湖北产,最佳培养周期为8d,最适棉塞重量为7g。通过正交实验优化了发酵培养基配方,发酵产量可提高7.35%。此外,还研究了前体物质丙酸钠的添加对发酵结果的影响,结果表明发酵过程中在培养基内加入一定浓度的前体物质丙酸钠,可以显著提高发酵产量,其中发酵24h时在培养基中加入2.5mmol/L的前体物质丙酸钠,发酵产量可提高9.89%。     

低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化

目的优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础。方法分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响。结果用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72h收获的病毒血凝效价最高。结论已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件。