青蒿琥酯对急性单核细胞白血病SHI-1细胞株血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的 研究青蒿琥酯对急性单核细胞白血病SHI-1细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体( VEGFR)的影响。方法酶联免疫吸附法检测非细胞毒性浓度(5、10、20 ng/ml)青蒿琥酯作用SHI-1细胞后培养上清液VEGF浓度,流式细胞术检测有或无青蒿琥酯作用时,SHI-1细胞表面VEGFR-1及VEGFR-2阳性表达率。结果培养24、48 h后,无青蒿琥酯作用的SHI-1细胞培养上清液VEGF质量浓度分别为( 980.3±2.2)、(982.4±2.3) pg/ml,VEGFR-1表达率分别为(5.40±3.11)％和(4.45±2.85)％,VEGFR-2表达率分别为(13.90.± 2.26)％和（13.95±1.96）％。5、10、20 ng/ml青蒿琥酯作用24h后,SHI-1细胞培养上清液VEGF质量浓度分别为(234.6±1.8)、(114.9±1.6)、(108.8±1.5) pg/ml,作用48 h后分别为(62.3±1.7)、(60.9±1.6)、(32.7±1.7) pg/ml,与培养相同时间无青蒿琥酯组相比,VEGF浓度明显下降（均P＜ 0.05）,且相同浓度青蒿琥酯作用24 h与48 h间差异亦有统计学意义(均P＜ 0.05)。5、10、20 ng/ml青蒿琥酯作用24 h,VEGFR-1阳性率分别为(4.30±2.21)％、(4.20±1.37)％和(3.90±1.86)％,作用48 h后分别为(3.80±2.87)％、(3.60±1.73)％和(3.00±1.82)％,相同作用时间不同浓度青蒿琥酯组间及相同浓度作用不同时间组间VEGFR-1阳性率差异均无统计学意义(均P＞ 0.05);作用24h后,SHI-1细胞VEGFR-2阳性率分别为(4.40±1.15)％、(3.10±0.68)％和(1.10±0.72)％,作用48 h后分别为(3.00±1.68)％、(2.20±0.93)％和(0.60±0.92)％,3个不同浓度青蒿琥酯作用相同时间后VEGFR-2表达率降低（均P＜ 0.05）,相同浓度作用24与48 h间差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）。结论SHI-1细胞株高分泌VEGF,青蒿琥酯可下调VEGF分泌及VEGFR-2的表达,而对VEGFR-1表达的调节作用不显著。     

三氧化二砷抑制淋巴瘤细胞株血管内皮生长因子表达的研究

目的 探讨三氧化二砷(ATO)对人类淋巴瘤细胞株内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用实时荧光定量聚合酶链(Real-time PCR)技术及酶联免疫吸附(ELISA)法检测ATO作用前后淋巴瘤细胞株Raji及Jurkat内VEGF基因及其蛋白表达量的变化.结果 在ATO诱导淋巴瘤细胞株凋亡过程中,两种细胞未经ATO处理前均高表达VEGF mRNA(Raji加药2 μmol/L 12 h △△ Ct值0.75±0.15,Jurkat加药3.5 μmol/L 72 h △△ Ct值1.67±0.13)及VEGF蛋白(加药12 h,Raji198.38±4.37;Jurkat 563.11±3.81),且Jurkat细胞较Raji细胞的VEGF蛋白的表达量高;经ATO作用24、48、72 h后VEGF的mRNA表达量均较加药前明显减少(加药72 h △△Ct值,Raji:8.95±0.38;Jurkat:9.09±0.16),差异有统计学意义(t=3.54,P<0.01;t=3.65,P<0.01);同时蛋白表达量也较加药前明显减少(加药72 h,Raji:23.55±2.06;Jurkat:57.11±3.88),差异有统计学意义(t=2.48,P<0.05;t=2.59,P<0.05),且两者与药物作用时间明显相关,各时间点之间蛋白表达量差异均有统计学意义(F=2.47,P<0.05;F=2.50,P<0.05).结论 ATO通过阻断淋巴瘤细胞生长所需的血管条件,从而抑制淋巴瘤细胞的增殖.     

多发性骨髓瘤患者基质细胞衍生因子-1α、CD44v6表达的研究

目的 探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CD44v6(一种变异的CD44受体)在多发性骨髓瘤(MM)中的表达水平及其与病情进展的关系.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测24例MM患者[14例初发和复发MM患者(初发和复发MM组),10例病情稳定MM患者(病情稳定MM组)]和15位健康骨髓移植供者或非肿瘤良性贫血患者(对照组)的骨髓单个核细胞(MNC)和骨髓基质细胞(BMSC)培养上清的SDF-1 α、CD44v6水平.结果 初发和复发MM组MNC培养上清的SDF-1α、CD44v6表达水平[(7232.41±2644.97)pg/ml和(34.34±13.20)ng/ml]显著高于病情稳定MM组[(2315.49±748.29)pg/ml和(15.69±5.28)ng/m1](t=6.25、t=7.82;均P＜0.05)和对照组[(1149.52±636.06)pg/ml和(4.85±3.62)ng/ml](t=4.60、t=7.61;均P＜0.05).病情稳定MM组SDF-1α、CD44v6水平显著高于对照绀(t=2.99、t=4.87;均P＜0.05).9例初发和复发MM组的BMSC与人类骨髓瘤细胞系细胞U266加入rhIL-6进行混合培养后,SDF-1 α水平[(6180.25±5925.38)pg/ml]显著高于5例对照组BMSC[(1021.13±358.65)pg/ml]和9例初发和复发MM组[(1004.07±727.36)pg/ml](t=2.66、t=2.42;均P＜0.05).而其他BMSC各组问的SDF-1α水平差异无统计学意义(P＞0.05).SDF-1 α与CD44v6两者表达水平呈正相关(r=0.51,P=0.03).结论 SDF-1 α、CD44v6水平升高与MM的病情进展或发病有关,也可能与MM的肿瘤浸润过程有关;而这些体内过程可能需骨髓瘤细胞和BMSC与IL-6、SDF-1α和CD44v6等因素协同完成.     

PDCD5蛋白在恶性淋巴瘤患者血清中的异常表达

目的 研究恶性淋巴瘤患者血清中凋亡促进蛋白PDCD5的表达,以探讨PDCD5蛋白在恶性淋巴瘤发病及疾病进展中的作用.方法 利用酶联免疫吸附法检测恶性淋巴瘤患者及健康人血清中PDCD5蛋白的水平.结果 41例未治及复发恶性淋巴瘤患者血清中PDCD5蛋白的表达明显低于37例健康人,分别为(10.227±3.595)ng/ml和(15.597±6.432)ng/ml(t=-4.609,P＜0.01),其中临床分期为Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期患者血清PDCD5蛋白表达分别为(11.297±3.584)ng/ml和(9.543±3.502)ng/ml,差异无统计学意义(t=1.550,P＞0.05);原发部位于结内与结外患者血清PDCD5蛋白表达分别为(10.758±3.301)ng/ml和(9.613±3.907)ng/ml,差异无统计学意义(t=1.018,P＞0.05).结论 未治及复发淋巴瘤患者与健康人相比血清中PDCD5蛋白表达降低,PDCD5蛋白的表达水平在不同临床分期及不同原发部位病变的淋巴瘤患者中无明显差异.PDCD5的异常表达可能在淋巴瘤发病机制中起一定作用.     

复方参鹿颗粒干预肾阳虚型骨髓增生异常综合征造血调控的临床观察

目的 评判复方参鹿颗粒对肾阳虚型骨髓增生异常综合征(MDS)(难治性贫血/难治性血细胞减少伴多系造血异常)(RA/RCMD)造血调控情况.方法 30例MDS-RA/RCMD患者随机分成复方参鹿颗粒组(简称参鹿组)(15例)和十一酸睾酮组(15例),测评治疗前后外周血象、T细胞亚群+自然杀伤(NK)细胞、骨髓细胞免疫表型.结果 参鹿组与治疗前相比,红细胞、血色素、血小板有明显上升,治疗前分别为(2.39±0.99)×1012/L、(84.47±28.68)g/L、(81.13±96.85)×109/L,治疗后分别为(2.80±0.98)×1012/L、(94.87±25.63)g/L、(98.67±107.9)×109/L,差异均有统计学意义(t=4.0359、t=2.7009、t=2.2573,均P<0.05),十一酸睾酮组仅有血红蛋白数量上升,治疗前为(71.93±27.53)g/L,治疗后为(80.07±26.03)g/L,差异有统计学意义(t=2.3125,P=0.0365);参鹿组治疗后CD+4、CD+8、CD+4/CD+8、NK细胞均达到或接近正常值,分别为(37.9±5.9)%、(24.0±5.8)%、1.75±0.83、(13.0±6.9)%,与治疗前的(29.3±11.7)%、(29.6±5.8)%、1.12±0.59、(8.8±5.7)%相比差异有统计学意义(t=2.6194、t=2.6595、t=2.6581、t=2.2288,均P<0.05),十一酸睾酮组治疗后仅CD+8、CD+4/CD+8接近正常值,分别为(22.1±7.5)%、1.50±0.74,与治疗前(26.6±7.5)%、1.18±0.55相比差异有统计学意义(t=2.2377,P=0.0420;t=2.9352,P=0.0109),治疗后,参鹿组CD+4表达率为(37.9±5.9)%,十一酸睾酮组为(30.5±12.6)%,差异有统计学意义(t=2.1738,P=0.0474);参鹿组对骨髓细胞CD+13、CD+33、CD+34、CD+64、CD+117的异常阳性表达调控能力强于安雄组(前三者u=2.76、u=3.39、u=2.85,均P<0.01,后两者u=2.17、u=2.46,均P<0.05).结论 复方参鹿颗粒能有效调控肾阳虚型MDS-RA/RCMD正常造血功能.     

护理干预对提高癫痫患儿生活质量的效果研究

目的 探讨护理干预对癫痫患儿生活质量的影响.方法 采用癫痫儿童生活质量量表(QOLCE)对在本院确诊的80例癫痫儿童及40例同龄健康儿童生活质量进行比较;按患儿家属自愿原则将患儿分成对照组与干预组各40例,对照组在门诊采用常规的抗癫痫治疗,发放健康教育处方;干预组在常规抗癫痫治疗的基础上进行护理干预.在治疗后3月、6月分别再次对2组患儿生活质量进行比较.结果 癫痫儿童与健康儿童生活质量得分分别为(56.4±7.5)分,(78.8±7.2)分,差异有统计学意义(P＜0.001);患儿治疗3个月后,对照组与干预组得分分别为(61.5±7.0)分,(64.4±6.8)分,2者比较差异无统计学意义(P＞0.05);6月后,对照组与干预组得分分别为(65.6±5.9)分,(73.8±6.3)分,干预组生活质量显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 癫痫儿童生活质量明显低于正常儿童;通过长期的护理干预可以显著改善癫痫患儿的生活质量,提高治疗依从性和治疗效果.     

慢性粒细胞白血病患者血浆伊马替尼浓度检测与临床疗效分析

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者服用伊马替尼治疗后,伊马替尼血浆浓度在个体间的差异以及与临床疗效的关系.方法 2005年7月至2008年2月开始服用伊马替尼治疗的CML患者共51例纳入研究,其中男34例,女17例,服用剂量300 mg/d 9例、400 mg/d 37例,600 mg/d5例;采用高效液相色谱法(HPLC)测定患者空腹伊马替尼血浆谷浓度;SPSS13.0软件进行统计分析.结果 伊马替尼血浆谷浓度与服用剂量有关,且个体之间差异较大,为(342～4688)ng/ml;300mg/d剂量组的伊马替尼血浆谷浓度为(1037±514)ng/ml,低于400mg/d剂量组的(2123±1016)ng/ml(t=2.34,P=0.032);300 mg/d剂量组的治疗有效率为66.67%(6/9),低于400 mg/d剂量组的89.19%(33/37)(χ2=7.14,P=0.008);在300、400mg/d剂量组中,39例治疗有效,伊马替尼血浆谷浓度高于治疗效果不理想患者,差异有统计学意义(t=2.25,P=0.037);受试者工作特征曲线(ROC曲线)结果提示伊马替尼血浆谷浓度低于1050 ng/ml者,其临床疗效可能较差,敏感度为84.6%,特异度为71.1%.结论 CML患者服用伊马替尼治疗后药物血浆浓度与服用剂量有关,不同个体间差异较大,血浆谷浓度低于1050 ng/ml提示其临床疗效可能较差.     

恶性淋巴瘤患者凝血纤溶指标变化的意义

目的 探讨恶性淋巴瘤患者凝血纤溶指标的变化,提高对恶性淋巴瘤患者合并血栓的认识方法应用全自动血凝分析仪对20名健康对照及71例恶性淋巴瘤患者的血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原定量(FIB)及凝血酶时间(TT)进行检测,用免疫散射比浊法测定两组血浆D-二聚体(D-DI)的含量.结果 71例恶性淋巴瘤患者APTT(30.44±1.43)s、FIB(3.28±0.20)g/L、D-DI(297.05±56.59)μg/L均高于健康对照组的(23.72±0.76)s、(2.57±0.22)g/L、(94.50±26.07)μg/L,差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ期淋巴瘤患者各项凝血纤溶指标较健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05).Ⅲ、Ⅳ期淋巴瘤患者APTT延长,FIB增高,与健康对照组及Ⅰ、Ⅱ期组比较差异有统计学意义(P＜0.05).合并静脉血栓患者7例,该组与Ⅰ、Ⅱ期患者相比FIB及D-DI均高,与Ⅲ、Ⅳ期患者相比D-DI明显升高.结论 恶性淋巴瘤患者存在凝血纤溶指标的异常,需定期动态检测,化疗后易发生静脉血栓,需及早预防,延长患者生存期.     

难治性淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞活性的检测及其临床意义

目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞活性水平与难治性淋巴瘤的相关性.方法 采用流式细胞术(FCM)检测60例初治淋巴瘤患者化疗前外周血T淋巴细胞亚群水平与NK细胞的活性,化疗后随访分为难治组30例、有效组30例,以20名健康者为健康对照组.结果 淋巴瘤患者组化疗前外周血CD+4、CD+4/CD+8、NK细胞数比健康对照组低(30.17±8.63与46.52±1.39,t=12.218,P＜0.05;0.86±0.45与1.64±0.05,t=11.225,P＜0.05;12.39±7.08与19.29±0.84,t=6.365,P＜0.05),CD+3、CD+8细胞数比健康对照组高(76.14±10.71与70.48±1.44,t=-3.439,P＜0.05;40.28±14.03与28.35±0.73,t=-5.625,P＜0.05).难治组化疗前外周血CD+4、CD+4/CD+8、NK细胞数比有效组低(27.70±7.81与33.13±8.82,t=2.163,P=0.036;0.67±0.27与1.10±0.52,t=3.272,P=0.003;9.87±6.60与15.40±6.58,t=2.771,P=0.008),而CD+3、CD+8细胞数比有效组高(79.67±8.18与71.91±12.00,t=-2.540,P=0.015;44.70±13.99与34.98±12.41,t=-2.416,P=0.020).结论 淋巴瘤初治患者化疗前外周血T淋巴细胞亚群水平及NK细胞活性的检测,对判断、预测容易转归为难治的患者可能有一定的参考价值.     

急性白血病患者造血干细胞P-选择素表达的研究

目的 研究急性白血病(AL)患者骨髓白血病干细胞表面分子P-选择素(CD62P)的表达情况及其临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测56例初治AL患者骨髓CD62P的表达情况,以15例健康成年人骨髓标本为对照.结果 38例急性髓系白血病(AML)患者干细胞(CD+45CD+34CD-38)中CD62P平均表达水平为(6.72±7.64)%,12例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者干细胞(CD+45CD+34CD+19)为(3.46±2.51)%,6例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者干细胞(CD+45 CD+34CD+7)为(6.23±4.95)%,均明显高于健康对照组[(1.04±1.23)%](t值分别为2.847、3.284、3.091,P＜0.01).经过正规方案治疗后,完全缓解组患者CD62P表达与健康对照差异无统计学意义(t=0.397,P＞0.05).另外CD+62P的AML及T-ALL患者白细胞计数、血红蛋白及血小板计数均明显高于CD-62P患者(t值分别为4.153、8.095、8.289、7.235、8.692、9.832,P＜0.05);而CD+62P与CD-62P的B-ALL患者无明显差异(t值分别为0.340、1.142、0.019,P＞0.05).结论 CD62P是血小板活化的标志物之一,在不同类型的AL中有不同程度的表达.AL骨髓造血干细胞中CD62P可能作为白血病造血干细胞的标志,以及临床疗效观察预后判断的指标之一.     

健康人外周血树突状细胞的体外诱导及其功能分析

目的 分析以健康人AB血清与rhCD40L体外诱导健康人外周血树突状细胞(DC)的功能.方法 对健康人外周血单个核细胞进行体外培养,在以健康人AB血清为基础的培养体系中加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素(rhIL)-4、rhCD40L等细胞因子,诱导单个核细胞分化形成DC,采用倒置显微镜及瑞特-吉姆萨染色观察,流式细胞术行DC表型鉴定,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法进行混合淋巴细胞反应(MLR),检测其抗原刺激能力,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC培养上清IL-12的分泌.结果 培养7 d后的细胞具有典型的DC形态,并上调表达DC特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86,第0、1、3、5、7天,5个时间点间CD83、CD40、CD80、CD86、CD14表达差异有统计学意义(F值分别为50.253、243.769、248.181、191.267、226.339,均P＜0.05).培养后的DC可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖,GM-CSF加rhIL-4、rhCD40L组较GM-CSF加rhIL-4组刺激反应能力强.培养的DC自培养第5天始即有IL-12分泌,未加CD40L组IL-12 p40分泌量为(42.92±1.54)pg/ml,加CD40L组为(136.18±5.27)pg/ml;培养第7天,IL-12 p40分泌明显增多,两组分别为(60.09±2.27)pg/ml及(322.30±30.60)pg/ml,差异有统计学意义(t=-44.941、-22.611,均P＜0.05).结论 健康人外周血单个核细胞可在以健康人AB血清与rhCD40L为主的培养体系中诱导成DC.     

淋巴细胞功能相关抗原-1/细胞间黏附分子-1介导的细胞因子诱导的杀伤细胞体外抑瘤机制

目的 探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)/细胞间黏附分子-1(ICAM-1)介导的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)的体外抑瘤机制.方法 从白血病患儿外周血分离淋巴细胞,经过干扰素-γ(IFN-γ)、抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)、白细胞介素-2(IL-2)诱导并与树突状细胞(DC)共培养,获得大量的DC-CIK.在经10、20μg/ml等不同质量浓度小鼠抗人LFA-1单克隆抗体处理后,采用MTT法研究DC-CIK细胞对多种白血病细胞株的杀伤活性,RT-PCR与Western blotting方法检测GATA-3和T-bet基因表达水平的变化.ELISA方法测定DC-CIK细胞释放细胞因子IL-12、IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果 诱导后的DC-CIK细胞形态规则,经不同浓度的LFA-1单克隆抗体处理后,MTT结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭组DC-CIK细胞对B95细胞杀伤作用下降最为明显(t=10.138,P＜0.05);RT-PCR与Western blotting结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭的B95细胞组,GATA-3基因mRNA水平和蛋白水平表达增加最为明显(t=16.386,P＜0.05;t=22.652,P＜0.05);同时T-bet基因mRNA水平和蛋白水平表达降低最为明显(t=17.728,P＜0.05;t=17.452,P＜0.05);ELISA结果:20μg/ml LFA-1单克隆抗体封闭的B95细胞组中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α分泌水平下降最为明显(t=21.621,P＜0.05;t=13.739,P＜0.05;t=15.278,P＜0.05).结论 GATA-3和T-bet基因参与了LFA-1/ICAM-1介导的DC-CIK抑瘤途径,并且通过分泌Th1型细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α等发挥抑瘤作用.     

局部热疗联合腔内化疗对恶性胸腔积液的疗效观察

Objective: The aim of our study was to assess the efficacy of regional hyperthermia combined with intrapleural chemotherapy and to evaluate the effect on the immunologic cells and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with malignant pleural effusion. Methods: The 102 patients with malignant pleural effusion were included in this study: 52patients undergoing regional hyperthermia with intrapleural chemotherapy (HICT), and 50 patients treated with intrapleural chemotherapy (ICT). Chemotherapy was administered into the thoracic cavity weekly through a tube with CDDP (dose = 40mg/m2), and hyperthermia was performed twice a week for 60 minutes following the ICT. We evaluated the response rates and side-effects after 4 weeks. Before and after the treatment, T cell subsets and NK cells were detected by flow cytometry and VEGF was measured with ELISA kits. Results: Compared HICT to ICT, the overall response rates of the whole group,breast cancers and lung cancers were 80.8% vs 54% (P ＜ 0.01), 86.7% vs 56.3% (P ＞ 0.05) and 78.4% vs 52.9% (P ＜ 0.05)respectively. The ratios of CD4+, CD4+/CD8+ and NK cells increased and the concentration of VEGF decreased more significantly after HICT. Conclusion: We concluded that combined regional hyperthermia with intrapleural chemotherapy could control the malignant pleural effusion effectively with mild toxicity. The levels of the T cell subset, NK cells and VEGF in both blood and effusion changed obviously.     

DLL4、HES1、VEGF-C及VEGFR-2在白血病患者骨髓中的表达及其临床意义

目的 探讨白血病患者骨髓中DLL4、HES1、VEGF-C及VEGFR-2的mRNA表达水平检测的临床意义,为白血病的诊治提供新的思路。方法选取白血病患者59例作为病例组,均根据临床表现、血象、骨髓象、细胞化学染色、细胞遗传学及流式细胞术检查确诊;对照组20例为营养性贫血患者。采用半定量反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法测定DLL4、HES1、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的含量。结果各组初发急性和慢性白血病患者骨髓中DLL4、HES1、VEGF-C、VEGFR-2mRNA的表达与对照组相比均显著升高(P＜0.05)。急性白血病缓解后DLL4、HES1、VEGFR-2的mRNA表达高于对照组( P= 0.041、0.016、0.047)。急性髓系白血病(AML)组DLL4与VEGFR-2、HES1与VEGF-C表达呈正相关(r= 0.424、0.472;P=0.030、0.014);慢性淋巴细胞白血病(CLL)组HES1与VEGF-C表达呈正相关(r= 0.997,P=0.042)。急性白血病伴髓外浸润者VEGF-CmRNA的表达高于不伴髓外浸润者(P=0.022)。AML组VEGF-C mRNA的表达与原始细胞数呈正相关(r=0.315,P=0.024)。结论DLL4、HES1、VEGF-C及VEGFR-2在白血病发病中相互作用,促进白血病发展、转移及浸润,且这些因子在不同类型白血病及髓外浸润中的作用存在差异。