猪骨免疫活性肽的分离纯化

为了从猪骨中分离纯化出免疫活性肽,使用超滤、sephadex G-25凝胶层析、SP-sephadex C-25离子交换层析等手段对鲜猪骨的Alcalase碱性蛋白酶的酶解液进行分离纯化,采用MTT法测定各分离产物对小鼠脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示:猪骨酶解液经超滤分离获得的分子质量小于2 ku的组分对小鼠脾淋巴细胞增殖率最高;对分子质量小于2 ku的组分采用凝胶过滤层析,对层析后活性最高的组分再进行离子交换层析,最终得到的组分质量浓度为100μg/m L时,对小鼠脾淋巴细胞的增殖率为114.30%。     

蟹抗氧化肽的分离纯化及活性研究

酶解梭子蟹下脚料获得抗氧化肽粗品。采用葡聚糖凝胶G-50 与G-25 进行分离纯化,对纯化样品的相对分子质量分布、抗氧化特性和氨基酸组成进行测定。结果表明：经分离得到的组分3 抗氧化性较强,其相对分子质量在1096.5 左右,经HPLC 分析其已基本达到纯化;经氨基酸分析其由11 种氨基酸组成,其中具有抗氧化能力的酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸所占比例很高。     

食源性活性肽制备与分离纯化的研究进展

近年来,食源性生物活性肽在功能食品中的应用越来越广,从而使其成为食品领域研究的热点问题。本文对酶解法、微生物发酵法及人工合成法制备食源性性生物活性肽进行简单介绍,根据食源性活性肽分子量及其所带电荷,对食源性活性肽的分离纯化进行重点概述。      

食源性活性肽制备与分离纯化的研究进展

近年来,食源性生物活性肽在功能食品中的应用越来越广,从而使其成为食品领域研究的热点问题。本文对酶解法、微生物发酵法及人工合成法制备食源性性生物活性肽进行简单介绍,根据食源性活性肽分子量及其所带电荷,对食源性活性肽的分离纯化进行重点概述。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

魔芋ACE抑制肽的分离纯化及活性检测

利用碱溶酸沉法从魔芋飞粉中提取魔芋蛋白,以魔芋蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽粗品;其粗品通过超滤法除去大分子杂质,再经过Sephadex G-15柱层析分离,最后经过RP-HPLC纯化后得到纯度较高的魔芋ACE抑制肽,并且对超滤膜进行选择、Sephadex G-15柱层析分离进行条件优化;以马尿酸含量为指标,紫外分光光度法测其活性。实验结果表明:选择规格为1 kDa超滤膜;Sephadex G-15最佳分离条件为浓度为120 mg/mL、流速为0.8 mL/min、上样量为1.0 mL;经过RP-HPLC纯化后得到魔芋ACE抑制肽抑制率可达到92.85%。空白液中Hip含量为22.50 mg,反应液中Hip含量为9.22 mg,说明魔芋ACE抑制肽抑制活性较好。     

榛仁免疫活性肽分离纯化及结构鉴定

以榛仁分离蛋白水解肽经超滤获得的分子质量小于3 kDa的组分为研究对象,采用凝胶色谱及反相高效 液相色谱对其进行分离纯化,并对所得组分进行结构鉴定和验证。结果显示：经Sephadex G-15分离得到的组分B1 能极显著降低小鼠RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子和白介素-6水平（P＜0.01）;经质谱解析筛选出的肽段Pro-Glu- Asp-Glu-Phe-Arg（PEDEFR）对细胞无毒性作用,高浓度PEDEFR（＞50 μmol/L）能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞吞噬能 力;当浓度达到100.0 μmol/L时,促进脾淋巴细胞增殖率达到44.21%,在伴刀豆蛋白A共同作用下,增殖率达到53.22%。 PEDEFR对小鼠RAW264.7巨噬细胞具有较好的免疫调节能力,本研究为榛仁免疫活性肽的开发提供了理论依据。     

鲜马奶乳清蛋白抗氧化肽分离纯化及其活性研究

分离纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性。以胰蛋白酶为酶源酶解鲜马奶乳清蛋白,采用3KDa、10KDa、30KDa不同分子量范围超滤膜对水解液进行分离,分子量在3~10KDa段的酶解液还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力,超氧阴离子清除能力均较高,分别为0.8949、63.19%、77.13%、70.08%。用SephadexG-50葡聚糖凝胶色谱纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性,得到A、B两个组分,B组分的还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力均高于A,分别为0.9814、55.28%、74.25%、56.67%。说明鲜马奶乳清蛋白酶解液具有一定的抗氧化活性,为鲜马奶抗氧化肽进一步纯化、结构鉴定及其生物活性研究提供基础。     

玉米活性肽的分离纯化及抑制体外脂质过氧化作用研究

以玉米醇溶蛋白为底物,利用碱性蛋白酶进行水解反应获得了玉米活性肽组分,经离子交换和葡聚糖凝胶等方法对产物进一步分离纯化。以H2O2及Fe2+诱导的小鼠体外脂质过氧化反应为靶点,研究了玉米活性肽及其分离纯化组分对脂质过氧化的抑制作用。结果表明:活性肽及其分离纯化组分均具有抗脂质过氧化作用,其对小鼠肝组织体外脂质化抑制率达到30.65%。其中组分Ⅰ的抑制活性最强,分子量主要分布在400~1000u。     

活性玉米醇溶蛋白肽的分离纯化及其还原活性研究

碱性蛋白酶水解玉米醇溶蛋白,精制后的水解产物为玉米醇溶蛋白肽。根据玉米醇溶蛋白肽对邻苯三酚自氧化的抑制活性,采用葡聚糖凝胶层析法及高效液相层析(HPLC)法分离纯化得到活性蛋白肽的几种组分,探讨了几种组分对超氧阴离子自由基的清除活性。同时,以α-生育酚为阳性对照,探讨了活性蛋白肽及其各组分的还原力。结果表明,经SephedaxG-10葡聚糖凝胶层析分离所得组分4的抗氧化活性最强,具有较高的还原力;组分4富含谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、组氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸。     

海洋胶原低聚肽的分离纯化及其抗氧化活性研究

通过总抗氧化能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力及还原能力实验,对海洋胶原低聚肽的体外抗氧化活性进行考察,然后采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,测定收集得到的11个组分的总抗氧化能力。结果表明,海洋胶原低聚肽具有一定的总抗氧化能力、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除能力,并且具有一定的还原能力;RP-HPLC分离纯化后,5个组分的抗氧化活性显著提高,对总肽整体的抗氧化活性起到了重要的作用,并且疏水性肽组分对抗氧化活性的贡献大于亲水性肽组分。      

多维液相色谱及其在活性肽分离纯化研究中的应用进展

多维液相色谱分离技术以其高峰容量和高通量等优势成为活性肽分离纯化研究的重要技术,本文主要介绍了多维液相色谱分离技术的组合模式及其在混合物活性肽分离纯化中的应用,并对多维液相色谱技术在活性肽中的应用前景进行展望,旨在为从复杂体系中高效分离目标活性肽提供参考。      

金属螯合肽分离纯化及其抗氧化活性的研究进展

综述了金属螯合肽的来源、分离纯化及构效关系,分析了金属螯合肽抗氧化活性的相关研究进展,并展望了金属螯合肽的发展前景。     

酶法制备大豆蛋白活性肽的工艺优化、分离纯化及抗氧化活性研究

以大豆蛋白粉为原料,水解度为考核指标,在单因素试验的基础上,利用正交试验对碱性蛋白酶制备大豆蛋白活性肽工艺进行优化.结果 表明:最佳水解工艺为水解pH 11、水解温度55℃、加酶量0.6g,在此条件下水解度为24.8％.利用Sephadex G-25凝胶柱对产物进行分离纯化,产物和对比标准物的洗脱图谱分析表明,绝大部分...     

黄粉虫抗氧化活性肽的分离纯化研究

为制备具有抗氧化活性的黄粉虫生物活性肽,采用双酶水解黄粉虫蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25 凝胶柱层析和阳阴离子交换柱层析分离纯化,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,纯化得到的抗氧化多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有很强的清除作用,清除率可分别达到74.20% 和87.32%。     

榛仁降脂活性肽分离纯化及结构鉴定

采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15、反相高效液相色谱及质谱对榛仁分离蛋白降脂活性肽进行分离纯化及结构鉴定,并通过测定3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中脂质积累、总胆固醇及甘油三酯水平,筛选出具有较高降脂活性的肽段。结果表明,经Sephadex G-15分离得到的C3组分的胰脂肪酶抑制、胆固醇胶束吸附及细胞降脂活性均显著高于其他组分。进一步经质谱解析筛选出的肽段Phe-Leu-Leu-Pro-His（FLLPH）与模型组相比,可抑制26.31%的总脂形成,降低32.67%胆固醇和23.87%甘油三酯水平。FLLPH具有较好的降脂活性,本研究可为榛仁降脂活性肽的开发提供理论参考。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

米糠抗氧化肽的提取和纯化工艺研究

研究了米糠抗氧化肽的提取、分离纯化工艺及氨基酸组成。研究结果显示,米糠抗氧化肽的最佳提取工艺条件为:在pH7.0、温度为55℃、[E]/[S]=12%、底物浓度为8%时,米糠蛋白经AS1.398中性蛋白酶酶解6 h,可获得对超氧阴离子氧化作用的抑制率最高的混合肽;经分子筛层析和离子交换层析,获得含3个肽段的米糠抗氧化混合肽;通过氨基酸组成和含量分析可知该米糠抗氧化混合肽由16种氨基酸组成,人体必需氨基酸含量丰富。     

MAR和GPC方法分离纯化大豆活性肽的研究

采用大孔吸附树脂（MAR）和凝胶过滤色谱法（GPC）从微生物发酵豆粕生产的粗肽制品中分离纯化大豆活性肽。实验结果表明:选用DA021-CⅡ型大孔吸附树脂作为填料,径高比为1:30,活性肽液pH为3.0,浓度为45mg/mL,上样量为40mL,吸附流速为0.5mL/min,解析流速为1.0mL/min,水解析体积为2BV,经梯度乙醇洗脱可以得到4个组分;经凝胶过滤色谱纯化后共得到6个组分aⅠ、bⅠ、bⅡ、cⅠ、dⅠ、dⅡ,经凝胶渗透色谱（GPC）法分析,其分子量分别为:aⅠ:1845Da、209Da;bⅠ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;cⅠ:2314Da、197Da;dⅠ:1318Da、180Da;dⅡ:2719Da、209Da。可见,本实验所应用的活性肽在200、1000、2000、3000、4000Da左右均有分布,是分子量范围分布比较广泛的活性肽。      

MAR和GPC方法分离纯化大豆活性肽的研究

采用大孔吸附树脂(MAR)和凝胶过滤色谱法(GPC)从微生物发酵豆粕生产的粗肽制品中分离纯化大豆活性肽.实验结果表明:选用DA021-CⅡ型大孔吸附树脂作为填料,径高比为1:30,活性肽液pH为3.0,浓度为45mg/mL,上样量为40mL,吸附流速为0.5mL/min,解析流速为1.0mL/min,水解析体积为2BV,经梯度乙醇洗脱可以得到4个组分;经凝胶过滤色谱纯化后共得到6个组分a Ⅰ、b Ⅰ、bⅡ、cⅠ、d Ⅰ、dⅡ,经凝胶渗透色谱(GPC)法分析,其分子量分别为:a Ⅰ:1845Da、209Da;b Ⅰ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;c Ⅰ:2314Da、197Da;d Ⅰ:1318Da、180Da;dⅡ:2719Da、209Da.可见,本实验所应用的活性肽在200、1000、2000、3000、4000Da左右均有分布,是分子量范围分布比较广泛的活性肽.