生鲜猪肉中沙门氏菌的分离、鉴定及耐药性检测

调查本地区生鲜猪肉中沙门氏菌的污染情况及耐药性情况,为进一步对肉及肉制品中耐药性沙门氏菌的风险评估奠定基础。采集超市和集贸市场的生鲜猪肉,采用实时荧光定量PCR对生鲜猪肉中沙门氏菌污染进行初筛,然后根据沙门氏菌检验国家标准进行分离鉴定,并对分离到的沙门氏菌进行耐药性检测。结果从83份肉样中分离到21株沙门氏菌,沙门氏菌检出率为25.3%。21株沙门氏菌中有7株对11种抗生素中的至少一种产生耐药性,耐药率33.3%。结果表明本地区生鲜猪肉微生物污染较为严重,沙门氏菌检出率较高且四环素耐药严重;另外在菌落总数和沙门氏菌检出率方面冷却肉的质量好于热鲜肉,超市和集贸出售的肉的质量无显著差异。     

四川省猪肉源大肠杆菌和沙门氏菌的分离与耐药性分析

采集四川省鲜猪肉126份,选择性培养基分离大肠杆菌、沙门氏菌,划线纯化后,通过形态特性及16S rDNA序列对菌株进行鉴定,利用K-B法(CLSI)药敏试验检测大肠杆菌和沙门氏菌对17种抗生素的耐药性。结果表明：共获得大肠杆菌105株,沙门氏菌18株,检出率分别为83.33%和14.28%。大肠杆菌对各种抗生素的耐药率在0%～55.3%,对四环素、氨苄西林耐药率最高,分别为55.3%、52.3%,对其他抗菌药物的耐药率依次为卡那霉素(26.7%)＞链霉素(19.1%)＞环丙沙星(17.1%)＞诺氟沙星(14.3%)＞头孢噻吩(11.5%)＞氨苄西林/舒巴坦(4.8%)＞头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南、庆大霉素(2.9%)＞头孢他啶(1.9%)>阿莫西林/克拉维酸(0.8%)＞丁胺卡那霉素(0.1%)＞亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦(0%),共产生28种耐药谱,氨苄西林、四环素及氨苄西林/四环素谱型占优势。沙门氏菌对各种抗生素的耐药率在0%～55.5%,其中对四环素、氨苄西林、链霉素的耐药率最高,依次是55.5%、38.9%、27.8%,对其他抗菌药物的耐药率依次是：氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸(11.1%)＞头孢噻肟、卡那霉素、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星(5.6%)＞头孢曲松、头孢他啶、亚胺培南、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、丁胺卡那霉素(0%),共产生13种耐药谱。四川省肉源大肠杆菌、沙门氏菌对各类抗生素已表现出一定的耐药性,虽耐药率相对较低,但多重耐药已经成为普遍现象,应引起足够重视,并加强对其监测。     

食品动物源沙门氏菌血清型及对β-内酰胺类耐药性调查

为了解我国食品动物源沙门氏菌血清型分布和对β-内酰胺类药物耐药情况。采用玻片凝集法和微量肉汤稀释法,对710株分离自食品动物源沙门氏菌进行了血清型鉴定和10种β-内酰胺类药物的敏感性实验。结果表明:710株沙门氏菌有15种血清型,主要血清型为鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)、德尔卑沙门氏菌(S.derby)、吉韦沙门氏菌(S.give)和菲利斯河沙门氏菌(S.fyris);菌株对10种β-内酰胺类药物呈不同程度的耐药性(耐药率13.66%~58.03%),66.19%菌株对3种及以上药物同时耐药,耐药谱型复杂;菌株分离年代与耐药率无明显相关性,但整体上菌株对该类药物耐药率随时间延长呈上升趋势;耐药现象广泛存在于各种血清型,其中鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、沙拉姆沙门氏菌和默尔斯沙门氏菌耐药菌株所占比例高达100%。以上结果说明,我国食品动物源沙门氏菌血清型呈多样性,对β-内酰胺类药物耐药现象严重,临床应谨慎使用该类药物,各动物中非致病性血清型菌株耐药现象严重,值得关注。     

沙门氏菌的血清分型及分子鉴定研究进展

沙门氏菌(Salmonella)是常见的食源性致病菌,该菌属型别繁多。沙门氏菌血清型的划分对菌株的分类与鉴定有着重要的意义。本文主要介绍了沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的特性及结构特征,阐述了多种分子鉴定方法在血清分型检测中应用的进展情况,这些方法大多是以PCR为基础建立的,如多重PCR、基因芯片、高分辨率熔解曲线技术等,使用的引物是根据沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的编码基因设计的。此外,本文还介绍了两种高通量鉴定方法,通用探针沙门氏菌血清分型法和PremiTest沙门氏菌分型法,但是这两种方法的探针设计比较复杂,使用的设备较为特殊,不易推广。环介导等温扩增(LAMP)方法是等温扩增方法之一,虽然简单、快速、灵敏,但是只适合于单一血清组或血清型的检测。     

新疆库尔勒市鸡肉源沙门氏菌的分离鉴定及 耐药性分析

目的了解新疆库尔勒市鸡肉沙门氏菌污染状况和沙门氏菌分离株对常用抗菌药物的耐药性。方法参考食品安全国家标准GB 4789.4-2010,利用生化反应与普通PCR方法结合进行沙门氏菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法进行常见抗菌药物敏感试验。结果 180份鸡肉样品共检出沙门氏菌阳性样品27份,分离鉴定到阳性沙门氏菌28株,污染率为15.00%;10种抗生素药物敏感试验表明:沙门氏菌分离菌株对甲氧苄啶的耐药率高达100%,氯霉素为89.30%、磺胺异噁唑为85.70%,四环素为78.60%、氨苄西林为71.40%、阿莫西林为71.40%、链霉素为64.30%、环丙沙星为53.60%,对诺氟沙星和氟苯尼考的耐药率低于50%,分别为32.10%和25.00%。结论新疆库尔勒市鸡肉中沙门氏菌存在一定程度的污染,耐药状况比较严重。     

肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性分析及ERIC-PCR分型

目的：了解肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性情况以及各生产环节菌株间亲缘关系,为临床用药及菌株追踪溯源提供依据。方法：采用微量肉汤稀释法对171 株肠炎沙门氏菌进行13 种抗菌药物药敏实验;采用肠杆菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR）法对33 株不同生产环节耐药菌株进行分子分型;采用SPSS 20.0软件、Gel-Pro Analyer 4.0和NTSYS pc 2.1软件进行分析。结果：171 株肠炎沙门氏菌对13 种药物耐药情况不同,其中对氨苄西林耐药情况最严重,耐药率高达90.06%,对恩诺沙星、氧氟沙星最为敏感,耐药率均仅为5.26%;不同环节间耐药性差异极显著（P＜0.01）;多重耐药率高达95.32%,共有26 种耐药谱型。不同环节的33 株肠炎沙门氏菌分为4 种（Ⅰ～Ⅳ）基因型,遗传相似性在66%～100%,Ⅰ型为优势基因型;基因型相同的菌株耐药谱不一定相同,反之,耐药谱相同的菌株基因型不一定相同。结论：肉鸡生产链条中沙门氏菌对多种抗菌药物产生耐药性,且耐药谱种类繁多;沙门氏菌能够沿着生产链进行水平传播,肉鸡场环节菌株基因型相对复杂,菌株基因型与耐药表型之间无明显相关性。     

内蒙古呼和浩特地区鸡源沙门氏菌分离鉴定、血清学鉴定及耐药性研究

目的 了解内蒙古呼和浩特地区市售整鸡的沙门氏菌污染状况,为建立食物污染及公共卫生安全提供数据支持。方法 2011～2012年仍呼和浩特地区采集冷冻、冷藏和现宰杀整鸡样品,迚行沙门氏菌的定性检测、血清分型及耐药性研究。结果 不同状态整鸡样品的沙门氏菌携带率明显不同,冷藏整鸡沙门氏菌检出率显著高于冷冻和现宰杀整鸡。血清型主要为肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。36株沙门氏菌均对头孢替坦、亚胺培南最为敏感,对氨苄西林、哌拉西林、呋喃妥因、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林等表现出不同程度的耐药性,多重耐药菌株中五耐最为严重(25%)。结论 内蒙古呼和浩特地区鸡肉中的沙门氏菌多重耐药现象比较严重。     

DiversiLab系统沙门氏菌分子分型评价

目的：评价DiversiLab(DVL)系统对沙门氏菌(SA)的分型能力。方法：用rep-PCR技术为原理的DVL系统对进出口食品中分离的44株SA进行分子分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果比较,探讨DVL对SA的种群分类能力和分辨率。结果：44株SA经rep-PCR分型分成22个群,分离自不同国家、不同食品中的相同血清型SA分布在同一个群,而且菌株之间相似性非常高。在rep-PCR结果中分在同一个群中的SA,在PFGE结果中除SA2和SA15外,其他菌株之间相关性较低。结论：DVL在SA的种群的分类能力上优于PFGE,但分辨率低于PFGE。     

应用PCR技术检测猪肉中沙门氏菌的研究

用聚合酶链式反应(PCR)技术检测猪肉中沙门氏菌,对已知和未知被沙门氏菌污染的猪肉的培养物均能准确检测;取不同稀释度的样品进行PCR扩增,当DNA含量只有0.01pg时,还能扩增出条带,说明本方法对检测猪肉中沙门氏菌具有特异性高且灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测猪肉中沙门氏菌的需要。     

肠炎沙门氏菌和哈瓦那沙门氏菌的耐药性及耐药基因分析

为了保障食品安全,更好的了解耐药性的产生及传播的途径,研究了新疆乌鲁木齐市部分农贸市场内检出的17株肠炎沙门氏菌和11株哈瓦那沙门氏菌的药敏性及相关耐药基因。用琼脂稀释法测定沙门氏菌的药敏性,用聚合酶链式反应和测定基因序列的方法确定耐药沙门氏菌中与喹诺酮类药物相关的抗性决定区突变基因以及质粒携带的耐药基因。17株肠炎沙门氏菌对环丙沙星和头孢西丁表现为100%敏感,对萘定酮酸的耐药率为94.1%,头孢曲松的耐药率为17.6%,qnr B检出率为64.7%,17株肠炎沙门氏菌发生Gyr A基因突变,主要突变类型为Asp87Tyr;11株哈瓦那沙门氏菌对甲氧芐啶、氯霉素、磺胺二甲异唑、磺胺甲基异恶唑/甲氧苄啶、萘啶酮酸、头孢西丁的耐药率为100%、63.6%、36.4%、18.2%、9.1%和9.1%,氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸敏感率为100%,qnr B,qnr S的检出率均为9.1%,11株哈瓦那沙门氏菌Par C基因突变类型为Thr57ser。新疆乌鲁木齐肠炎沙门氏菌和哈瓦那沙门氏菌耐药情况比较严重,对抗生素的耐药状况应当予以关注,其喹诺酮类药物耐药决定区突变基因及质粒携带的耐药基因在一定程度上会影响肠炎沙门氏菌和哈瓦那沙门氏菌的耐药机制。     

市售婴幼儿米粉中克罗诺杆菌的分子分型和耐药分析

为了解婴幼儿配方米粉中克罗诺杆菌的污染情况、分子分型特征及耐药性情况,采集广西区内市售6个厂家和品牌不同配方的婴幼儿米粉进行克罗诺杆菌分离及fusA基因的扩增、测序和MLST数据库比对分析。并应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分型鉴定及微量肉汤稀释法测定分离株对8种常见抗生素的最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentrations,MICs）。采集的268份婴幼儿米粉共分离到32株克罗诺杆菌,检出率为11.94%,菌株鉴定结果显示32株分离株包括22株C.sakazakii、6株C.malonaticus、3株C.dublinensis和1株C.muytjensii。不同添加成分的婴幼儿配方米粉污染情况差异明显,其中添加淮莲和果蔬的米粉污染率最高为17.78%和15.38%。PFGE分析显示32个菌株共分成32种不同的分子型,相似度为61.20%~92.30%,所有分离株对环丙沙星、庆大霉素和头孢噻肟都敏感,部分菌株（6.25%~43.75%）对氯霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲基异恶唑、头孢西丁和萘啶酸表现为中等敏感,有2个菌株对氯霉素表现为抗性。结果表明市售婴幼儿配方米粉中存在一定的克罗诺杆菌污染,尤其是添加营养成分的米粉。婴幼儿配方米粉中克罗诺杆菌污染来源广泛,部分菌株对一些抗菌药表现为中等敏感甚至是抗性,提示克罗诺杆菌对抗菌药的敏感性呈现减弱的趋势。     

荧光酶免疫分析仪-微生物鉴定仪在水产品沙门氏菌检测中的应用

采用全自动荧光酶免疫分析仪进行初筛,全自动微生物鉴定仪进行阳性菌株的生化性状鉴定,建立了水产品沙门氏菌的快速检测方法。经过48h增菌之后,VIDAS法可在45min之内出具结果,阳性菌株经选择性培养基分离及纯化后根据VITEK检测结果判定是否属于沙门氏菌。联用法的灵敏度为菌悬液浓度≥103cfu/mL,一般染菌样品经48h增菌之后菌悬液浓度均能达到106cfu/mL以上。采用联用法与国标法对参考菌株和124种水产品进行检测,结果完全一致。联用法快捷、有效,适用于水产品沙门氏菌的检测。     

猪肉源大肠杆菌对抗生素及消毒剂的耐药性

从四川省各市县收集猪肉样品130 份,选择性培养基分离大肠杆菌后VITEK进行鉴定,采用K-B法药敏实验测试大肠杆菌对10 种药敏纸片的耐药性。琼脂稀释法测定大肠杆菌对3 种季铵盐消毒剂的MIC值,PCR扩增10 种季铵盐类消毒剂耐药基因。结果表明：130 份猪肉样品中分离大肠杆菌96 株,分离率为73.85%,其中73株对抗生素产生耐药性,耐药率分别为：TET（64.58%）、AMP（37.50%）、S（32.29%）、K（21.88%）、KF（20.83%）、CIP（18.75%）、CN（9.38%）、SAM（6.25%）、CAZ（2.08%）、CRO（2.08%）,共产生了28 种耐药谱,TET是最主要的谱型;96 株大肠杆菌对季铵盐消毒剂BC、DDAC、CTAB的MIC分别为：16～64 μg/mL、8～32 μg/mL、64～256 μg/mL;QACs耐药基因检出率分别为ydgE/F（81.25%）、mdfA（50%）、sugE（c）（45.83%）、emrE（36.46%）、 qacEΔ1（19.79%）、qacF（17.71%）、qacE（14.58%）、sugE（p）（3.13%）,qacG－未检出。共检出42 种消毒剂耐药基因组合（1.04%～12.50%）。sugE（c）、qacF基因与氨基糖苷类及AMP耐药相关,qacEΔ1基因与AMP耐药相关。四川省肉源大肠杆菌污染情况较严重,菌株对抗生素的耐药率及多重耐药相对较低,对季铵盐类消毒剂MIC较高,消毒剂耐药基因检出率较高,应引起足够重视,加强对其检测。     

Multiplex PCR for the simultaneous detection of Salmonella spp. and Salmonella Enteritidis in food

Multiplex PCR assay (mPCR) for the detection of Salmonella spp. and S. Enteritidis was developed in this study using artificially contaminated chicken carcasses. The assay showed 100% specificity to detect approximately 1 CFU of Salmonella in 10 g of chicken skin after non‐selective enrichment. The mPCR was evaluated in Minas cheese, fresh pork sausage and chicken carcasses commercially available. Salmonella spp. was detected in nine of sixty‐six chicken carcasses, five of fifty‐two cheese samples, and five of fifty‐two sausage samples. The serovar Enteritidis was detected in two samples of contaminated sausage. The mPCR results were confirmed by conventional culture and biochemical identification of the isolates. Serotyping confirmed the presence of S. Enteritidis in sausage samples and showed contamination by serovars Schwarzengrund and Montevideo in chicken carcasses.     

冷却猪肉中气单胞菌的定量暴露评估

开展某市冷却猪肉中气单胞菌的风险评估中最主要的暴露评估,包含气单胞菌从冷却猪肉原料的销售、运输以及贮藏3个环节。冷却猪肉的初始污染水平通过大量市场调研数据来确定,前期构建的气单胞菌生长模型用来估计消费者食用冷却猪肉时的有害菌摄入量。结果表明：大约有22.1%的冷却猪肉含有高于5(lg(CFU/g))的气单胞菌量,由此带来消费者的食用风险。进一步的敏感性分析结果表明,初始污染水平和家庭贮藏时间与气单胞菌量的相关性最高,分别为0.884和0.209,为消费者和食品监管者需要重视的主要风险因素。再结合猪肉烹饪阶段的评估和剂量反应关系研究,可为构建完整气单胞菌风险评估体系提供理论参考。     

我国鸡肉产品中沙门氏菌风险评估的研究进展

本文综述了国内外鸡肉相关产品中沙门氏菌的风险评估研究现状,包括沙门氏菌预测微生物学、评估模型、剂量反应模型及风险评估软件的使用,指出了目前我国鸡肉产品中沙门氏菌风险评估研究中存在的问题,并提出下一步鸡肉中沙门氏菌风险评估工作的研究方向及重点,为政府食品安全监管和理性决策提供科学的理论参考,同时也为消费者日常饮食选择提供风险预警的理论借鉴。     

动物性食品源大肠杆菌耐药性研究

目的:近年食源致病菌及指示菌的耐药性已引起有关人员的重视,本文旨在了解动物性食品源大肠杆菌(E coli)的耐药情况,为其耐药性的安全评价提供依据.方法:采用NCCLS推荐的肉汤微量稀释法,对源自动物性食品中的319株大肠杆菌做25种抗生素(组合)的敏感性实验.结果:319株大肠杆菌对喹诺酮类(93.00％～100％)、利福平(98.75％)、多黏菌素E(75.20％)和链霉素(75.60％)的耐药率较高,共产生87种耐药谱,多重耐药率为100％.其中个别菌株耐药物高达20种.结论:动物性食品中大肠杆菌耐药情况严重,应加强其耐药性监测与控制.     

江苏省沙门氏菌全基因组序列中外排泵耐药基因分布及其特征研究

目的 了解江苏省沙门氏菌的耐药及其耐药相关基因的分布状况。方法 根据美国实验室标准化临床协会的操作规范推荐的肉汤稀释法测定沙门氏菌的药物敏感性,应用在线数据库分析基于多个位点序列型、耐药基因的种类和数量。结果 至少一半以上的沙门氏菌对链霉素、氨苄西林、复方磺胺甲恶唑、四环素、大观霉素、利福平耐药。尤其是对大观霉素和利福平的耐药率高达90%以上。D群沙门氏菌是主要的血清群。ST11型为主要的序列型。与外排泵耐药相关的9种MFS耐药基因均可以检出,最多的沙门氏菌携带8种基因。结论 江苏沙门氏菌的耐药问题比较严重,在临床用药和畜牧业养殖中,应加强抗生素合理使用。