酶联免疫双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒抗体试剂的质量评价

目的评价酶联免疫双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体试剂的质量。方法采用3个厂家间接酶联免疫法的HCV抗体试剂各1批(A-1、A-2、A-3)和酶联免疫双抗原夹心法的HCV抗体试剂各1批(B-1、B-2、B-3),分别检测经Ortho和Dia Sorin公司抗HCV EIA试剂、CHIRON公司RIBA HCV 3.0 SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测的304份血浆样本(抗-HCV阳性139份及抗-HCV阴性165份);并经HCV BLOT 3.0确证试剂检测HCV假阴性样本的抗体谱。结果试剂A-1、A-2、A-3的阳性检出率分别为95.0%、97.8%、97.1%,阴性检出率分别为98.2%、92.7%、95.2%;试剂B-1、B-2、B-3的阳性检出率分别为98.6%、98.6%、99.3%,阴性检出率分别为95.8%、95.8%、96.4%,总符合率分别为96.7%∶97%、95.1∶97%、96.1%∶97.7%,不同厂家酶联免疫双抗原夹心法的HCV抗体试剂灵敏度均有提高,两种酶联免疫法的6种HCV抗体试剂检测均有不同份数的假阳性样本出现,该6种HCV抗体试剂的特异性无显著差异(P0.05)。HCV假阴性样本抗体谱分析结果表明,各HCV抗体试剂均有漏检现象。结论酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体试剂具有较高的灵敏度和特异性,可在献血源筛查中推广应用。     

不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒抗体检测试剂性能评估

目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。     

丙型肝炎抗体确证试剂检测结果的分析

目的分析丙型肝炎抗体确证试剂的检测结果。方法用两种国外抗HCV确证试剂(RIBA和MP)分别对89份抗HCVEIA试剂(Ortho)检测为高值阴性或弱阳性样品进行检测,按试剂说明判定结果。并对两种确证试剂对4种丙肝分片段抗体的检出率进行比较。结果两种确证试剂RIBA和MP与Ortho试剂的总符合率分别为43.8%和47.2%,均出现了较多的不确定样品。两种试剂对丙肝NS3抗体和NS5抗体的检出率基本一致,MP试剂对丙肝核心抗体和NS4抗体的检出率显著高于RIBA试剂。结论对于不确定样品,最好结合临床症状及病人追踪检测进一步确诊。     

2种不同方法检测HIV抗体结果比较

目的 研究使用不同检测方法对HIV抗体进行初筛检测,结果有无显著性差异。方法 通过使用酶联免疫法和化学发光法对2794份相同的艾滋病高危人群人员的血清样品进行HIV抗体初筛检测,对2种检测方法的检测结果进行比较。结果 酶联免疫法检测结果为阳性47份,阴性2747份,阳性率为1.682%,化学发光法检测结果为阳性55份,阴性2739份,阳性率为1.968%,酶联免疫法检测结果阳性而化学发光法检测结果阴性的样品有11份,酶联免疫法检测结果阴性而化学发光法检测结果阳性的样品有19份,经配对χ2检验,酶联免疫法和化学发光法初筛检测HIV抗体的阳性率无显著性差异。酶联免疫法和化学发光法2种检测方法初筛检测结果共同阳性有36份,共同阴性有2728份,总符合率为98.93%。结论 提示初筛检测HIV抗体时,酶联免疫法和化学发光法可互相参考,也可互相替代。     

3种丙型肝炎病毒抗体确证试剂检测结果的比较

目的比较不同丙型肝炎病毒(HCV)抗体确证试剂的质量差异。方法应用3种HCV抗体确证试剂(分别命名为确证试剂1、2、3,包括两种进口试剂和一种国产试剂),检测经HCV抗体酶联免疫试剂检测为HCV抗体阳性的45份人血浆样本。结果 45份样本中,确证试剂1、2和3检测阳性的样本分别为31、28和33份,3种确证试剂共同阳性样本28份,共同阴性样本9份,检测结果不一致样本8份;不同确证试剂由于包被的片段不同,检测HCV不同片段的能力不同,确证试剂1对NS3片段的阳性检出率最高,为33份;确证试剂2对NS5片段的阳性检出率最高,为19份;确证试剂3对NS4片段和Core片段的阳性检出率最高,分别为31和34份。结论选择HCV确证试剂,既要考虑不同试剂总体检出情况的灵敏度和特异性,又要考虑每种试剂对每个HCV片段的侧重性,这样才可以兼顾灵敏度和特异性之间的矛盾,使确证试剂真正发挥其在HCV感染诊断的确证作用。     

2种不同试剂筛查无偿献血者HIV抗体结果分析

目的 了解不同试剂对无偿献血者HIV抗体进行初筛检测有无差异,以评价其质量及实用性,确保血液质量。方法 通过使用国产和进口试剂酶联免疫吸附试验对30125份相同献血者样本进行HIV抗体初筛检测,对2种试剂的筛查结果进行比较。结果 2种试剂初筛检测结果阳性47例,其中国产单种试剂初筛检测阳性25例,进口单种试剂阳性18例,国产与进口双试剂阳性4例,经送检CDC确认实验室确认有3例样本为抗-HIV抗体阳性。这3例样本均为国产与进口双试剂检测阳性的样本。通过以上数据对比,经配对χ2检验,国产试剂和进口试剂初筛检测HIV抗体的阳性率无显著性差异。结论 提示有必要提高目前国产与进口酶联免疫法试剂的特异性,减少假阳性反应,减少血液浪费与血源流失。     

丙型肝炎病毒核心总抗原检测试剂的评价

目的评价国外丙型肝类病毒核心抗原检测试剂盒的质量以及窗口期检测核心总抗原(HCVcAgTrak-C)的意义。方法用该试剂检测8649份自然献血员及566份HCV可疑感染者血清的核心总抗原,并与抗体试剂(Anti-HCV)、游离抗原(HCVfreeAg)试剂、核酸(HCVRNA)试剂进行比较。结果筛出核心总抗原和抗体同时阳性血清152份,抗体阴性而总抗原阳性血清5份。利用RNA试剂检测这5份血清,结果HCVRNA阳性。利用HCVfreeAg试剂检测这9215份血清,发现2份阳性,其中1份为抗原和抗体同时阳性,RIBA检测确证这份血清产生的是核心区抗体。另1份为单独抗原阳性。结论在应用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时使用HCVcAg试剂检测,可以减少因窗口期造成的漏检。     

HIV抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较

目的比较HIV抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异。方法 用HIV抗体诊断试剂和HIV抗体酶联免疫诊断试剂分别检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品、HIV不同亚型样品以及HIV高危人群样品。结果检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品中,20份阳性样品只检出10份阳性,5份最低检出限样品只检出1份阳性。与酶联免疫试剂相比,对B亚型样品的检测,其灵敏度低2-8倍;对AE重组样品,其灵敏度低100倍;对BC重组样品,其灵敏度低2-10倍。在HIV高危人群样品中,与酶联免疫诊断试剂阳性符合率为88.2％,阴性符合率为97.3％。结论快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂,因此,其应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂。     

部分国产HCV抗原的质量分析

为了改进国产丙型肝炎抗体试剂的质量，在建立第三代国家丙型肝炎抗体试剂参考品时，对国内现有丙型肝炎抗体试剂及试剂用抗原进行研究。用国内外不同试剂检测丙型肝炎CORE，NS3和NS5抗原，结果表明我国对现有丙型肝炎抗体试剂及试剂用抗原应加强研究，尤其应加强对NS3、NSS抗原的研究，使我国成品试剂尽快达到国外第三代丙型肝炎抗体试剂的水平。     

不同企业生产的HIV抗体确认试剂检测结果的比较

目的比较3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂的检测结果。方法分别应用3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂,检测64份经多家HIV抗体酶联免疫试剂检测不一致的样本,比较检测结果的差异,并对不确定样本的常见非特异性条带进行分析。结果 3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂检测64份样本均为阴性或不确定,但各试剂检测为阴性和不确定样本的比例差别较大,INNO-LIATMHIVI/ⅡScore与NEWLAVBLOT1试剂、INNO-LIATMHIVⅠ/ⅡScore与HIVBLOT2.2试剂及NEWLAVBLOT1与HIVBLOT2.2试剂检测结果的符合率分别为57.8%、28.1%和48.4%,且每两家试剂检测结果之间差异均有统计学意义(P均<0.01)。最易产生不确定结果的条带主要集中在p24和p17上。结论 HIV抗体确认试剂质量差别较大,应加强其质量控制并规范检测标准。     

关于HCV不同区段抗原的反应性研究

目的　探讨各种丙型肝炎病毒 (HCV)抗原在诊断中的作用及其与HCVRNA的关系。方法　利用HCV不同区段抗原抗 -HCV酶联免疫试验 (EIA)和逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,对不同临床型HCV患者进行检测。结果　各组患者均以抗 NS3和抗 C阳性率最高。但均有一定比例患者抗 NS4和抗 NS5阳性。与各单个片段抗 HCV阳性率相比 ,抗 HCV总抗体阳性率最高。结论　NS3和C抗原在检测抗 HCV中起很重要作用 ,但NS4和NS5抗原在抗 HCVEIA中的作用也不容忽视。联合应用不同区段HCV抗原将大大提高抗 HCVEIA试剂的灵敏度。     

HCV多表位多克隆抗体的纯化及HCV-Ag的检测

目的：制备并纯化HCV复合多表位多克隆抗体,探讨其用于丙型肝炎抗原检测的潜在可行性。方法：将人工合成的HCV复合多表位抗原在大肠杆菌中表达融合蛋白后免疫小鼠分析表达产物的免疫特异性及免疫原性,免疫家兔获取多克隆抗体,利用盐析和亲和柱纯化多克隆抗体,利用该抗体用双抗夹心法检测HCV-Ag。结果：融合蛋白能在原核表达系统中高效表达,并可诱发小鼠及家兔产生高滴度的特异性HCV抗体,该HCV多表位复合抗原多克隆抗体,在用ELISA法检测HCV-Ag中表现出较高的灵敏性（90.63%）及特异性（78.13%）。结论：通过盐析和亲和柱可高效纯化HCV复合多表位多克隆抗体,纯化后的抗体用ELISA双抗体夹心法检测HCV-Ag具有灵敏、特异、快速的优点,有望用于HCV的抗原检测。     

检测HCV RNA的PCR试剂质控试行参考品的建立

选慢性丙型肝炎病人中HCVRNA含量不等的阳性血清作为阳性标准，采用选自HCV基因5’端非编码区的不同引物来扩增病毒基因，扩增产物与分子量标准进行比较，部分产物用酶切初步分析进行确证。选国家HCV抗体诊断试剂盒临床验证参考品中的阴性样品作为阴性标准，经反复检测显示HCVRNA为阴性。选强阳性血清经5%小牛血清稀释作为灵敏度标准，检测范围为10－5～10－7。应用该参考品对北医肝病研究所的三批HCVRNA诊断试剂盒进行检测，阳性和阴性标准均符合要求，灵敏度为10-5～10-6。     

输血后丙型肝炎病毒NS4区抗体的动态变化及其诊断意义

利用重组NS4抗原及合成肽5－11抗原分别检测5例输血后丙型肝炎患者的系列血清136份，并与HCV总抗体及HCVRNA检测结果比较，发现抗NS4抗体的动态变化虽然有两种模式，但在多数情况下为一种模式，即抗体阳转后很少转阴，并且其动态变化基本与总抗体相似。同时发现2例病人抗NS4抗体阳转时间早于总抗体，因此，推测HCV检测试剂中增加NS4抗原可能对提高HCV诊断试剂的灵敏度有一定意义。     

吉林省职业献血员丙型肝炎病毒感染情况分析

<正> 作者对吉林省职业献血员丙型肝炎病毒(HCV)感染情况进行了调查。选择省内东部、南部、西部和中部7个血站308名职业献血员及286名无献血史成人作为对照。静脉采血,分离血清,置-20℃冻存。抗体检测采用西班牙LBE公司提供的丙型肝炎抗体(抗-HCV)检测试剂。该试剂包被的抗原为合成多肽抗原(含有结构区核心抗原和非结构区抗原)。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。凡检测样品OD值≥阈值为阳性。结果表明,职业献血员抗-HCV阳性率为21.75％(67/308),无献血史成人抗-HCV阳性率为5.24％(15/268)。职业献血员HCV感染率与无献血史成人HCV感染率差异显著(P<0.005)。国内资料报道,我国一般人群抗-HCV阳性率为1.4％～     

VIDAS HIV Duo Assay试剂的特异性及敏感性

目的评价HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV Duo Quick)和超敏法(VIDAS HIV Duo Ultra)试剂的特异性及敏感性。方法用这2种试剂和HIV抗体参比试剂,分别检测287份HIV感染或疑似感染者样品、1240份非HIV感染者血清/血浆样品,对与参比试剂检测结果不一致样品,进行抗体的确认及HIV p24抗原和RNA的检测,并比较其特异性和敏感性。用这2种试剂和HIV-1p24抗原参比试剂,分别检测3株病毒培养上清的系列稀释样品,并比较其检测p24抗原敏感性的差异。结果共检测1277份HIV抗体阴性样品和250份HIV抗体阳性样品,与参比试剂相比,快速法试剂的特异性为99.45%,敏感性为100%,而超敏法试剂的特异性为99.14%,敏感性为99.20%。两种试剂检测病毒株培养上清的敏感性均不低于HIV-1p24抗原参比试剂,且能检出HIV感染窗口期样品。结论这2种试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性均没有明显降低,并且能检测出HIV感染窗口期样品。     

乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂的研制

目的制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测。方法分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证。结果试剂对乙型脑炎病毒抗原的最佳定量范围是0·131~0·666ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0·996,平均变异系数CV小于10%。与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P<0·01)。对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2·7%和4·4%。结论试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测。     

应用HIV免疫阳转血清评价HIV抗体检测试剂的质量

目的 应用免疫阳转血清对HIV抗体检测试剂质量进行评价。方法 采用HIV-1核心区p24、gp41、膜区gp120和全病毒抗原免疫家兔制备系列兔血清,评价国内外HIV抗体双抗原夹心法试剂的质量。结果免疫阳性血清可用于测定试剂对各不同区域抗体检测的能力。结论 对评价试剂盒敏感性有实际意义。     

HIV抗体确认试剂国家参考品的建立

目的建立评价HIV抗体确认试剂的国家参考品。方法从我国部分地区收集HIV感染者或可疑感染者以及非HIV感染者血浆样品,并对其进行HIV抗体、核酸以及抗体条带等检测,从中筛选出有代表性的样品组成参考品,用4家不同的HIV抗体确认试剂进行检测和标化。结果共筛选出27份样品组成HIV抗体确认试剂参考品,其中10份为HIV抗体确认阳性参考品,12份为HIV抗体确认阴性参考品,5份为HIV抗体不确定参考品。用4家不同的HIV抗体确认试剂标化12次,10份HIV抗体确认阳性参考品均检测为确认阳性;5份不确定参考品均检测为确认阳性或不确定,无检测为阴性者;12份阴性参考品10次均检测为确认阴性。结论该参考品可用于评价HIV抗体确证试剂的质量。     

第3代丙肝试剂国家参考品的研制及初步应用

筛选全国 14个省、市、自治区的 2 5 0 0 0多份血样 ,取其中 2 6 4份用国产 14种抗HCVEIA试剂 ,国外 2种第 3代抗HCVEIA试剂复检 ,用RIBAHCV 3.0和PCR试剂确证。经两轮会同标定 ,国外两个实验室复核 ,确定40份阳性、40份阴性样品组成第 3代丙肝试剂国家参考品。 40份阴性样品中包括国内外几十种试剂曾经出现过非特异假阳性反应的阴性样品以及其S C值较高的阴性样品。 40份阳性样品中 ,6 5 %为弱阳性样品 ,有的样品含有全谱的抗HCV抗体 ,有的样品含有某几种抗HCV抗体 ,有的样品以抗HCV某种蛋白抗体成分为主 ,还有的样品只含有某种特定的抗HCV蛋白抗体。该参考品已通过专家鉴定并经卫生部批准使用。经改进后达到第 3代参考品标准的国产试剂的临床考核说明 ,该参考品促进了国产试剂质量的提高 ,并达到国际先进水平。