紫薯多酚氧化酶底物特异性分析

分别以愈创木酚、儿茶酚、间苯二酚、对苯二酚和绿原酸5种酚类物质为底物,加入紫薯多酚氧化酶,反应体系在300～400 nm范围内均有吸收峰,说明这5种物质都是紫薯多酚氧化酶的作用底物.紫薯多酚氧化酶对各酚类底物的亲合性依次为绿原酸>儿茶酚>间苯二酚>愈创木酚>对苯二酚.     

金花茶花多酚氧化酶提取工艺研究

以金花茶花为原料,基于单因素试验结果,采用响应曲面法(response surface method,RSM)和人工神经网络模型(artificial neural networks,ANN)对金花茶花多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的提取工艺进行优化。结果表明:RSM和ANN两种模型的决定系数R2分别为0.9922和0.9362,验证后的相对误差率分别为2.49%、1.14%。对比两种模型,ANN能够比RSM更准确地拟合模型和推导提取条件。金花茶花PPO提取最佳工艺条件为浸提时间45 min,缓冲液pH 6.35,聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)添加量为22%。在此条件下,PPO提取量为1 805.11 U/(g·min)。该研究为金花茶花PPO活性与褐变的相关性以及抑制褐变提供基础。     

雪梨果肉多酚氧化酶的活性研究与纯化

以雪梨果实为试材,通过以邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,测定温度、pH值、抑制剂、不同成熟期及不同部位对PPO活性的影响。结果表明:最适pH值为6.4;最适温度为25℃;不同成熟期PPO的活性不同;1mol/L的亚硫酸钠为较好的抑制剂;果肉内部PPO活性最高,果肉中部的PPO活性最低。粗提液又经30%硫酸铵沉淀去杂和80%饱和度硫酸铵析出、Sephadex-G200柱层析及HiPrepTM16/10QXL离子柱层析,得到电泳均一的PPO,分子量43kD。     

黄淮小麦多酚氧化酶变异及其与品质指标相关性分析

选用我国黄淮麦区141份主要小麦品种(系),探讨了它们的多酚氧化酶(PPO)遗传变异及其他主要品质的相关分析.结果表明:我国黄淮小麦品种PPO活性表现出较大的变异,变异范围为:4.75～133.5,变异系数为:71.6%.PPO活性与面粉的膨胀势、回生值呈显著负相关,与面粉色泽主要指标相关均不显著.     

佛手山药多酚氧化酶提取及酶促合成茶黄素研究

为探究佛手山药多酚氧化酶(PPO)粗酶液提取及其催化儿茶素合成茶黄素的能力,本研究利用缓冲液浸提法制备佛手山药PPO粗酶液,考察料液比、pH、反应温度等因素对佛手山药PPO酶提取效果的影响。结果表明佛手山药PPO酶最适提取条件为料液比1∶2,pH 5.5,反应温度35℃。以反应底物作为研究对象时,邻苯二酚使得佛手山药PPO酶表现出最大酶活,茶多酚与EC表现相当,而EC优于其他三种儿茶素单体。以佛手山药PPO粗酶液作为催化剂,四种儿茶素单体之间成对组合作为酶促合成茶黄素的底物,通过HPLC法检测佛手山药PPO粗酶液催化儿茶素合成茶黄素的能力,结果表明佛手山药PPO酶能催化合成茶黄素TF1、TF2A、TF2B、TFDG,但四种产物的合成率却相差较大,PPO催化儿茶素合成四种茶黄素的为TF1> TF2B> TF2A> TFDG,TF1的合成率达到30.66%。     

不同金属离子对多酚氧化酶的影响

采用匀浆法从茄子中提取多酚氧化酶(PPO),以绿茶粉为底物,研究Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+7种金属离子对PPO活性的影响。结果表明:Cu2+、Mn2+和Mg2+3种金属离子对PPO的活性有不同程度的促进作用,而Ca2+、Na+、Al3+和Fe3+对PPO的活性有抑制作用。其中,Cu2+浓度为3mmol/L时对PPO有激活作用,此时茶黄素总量达到7.45mg;Fe3+浓度为5mmol/L对PPO有显著抑制作用,此时茶黄素总量降低至0.26mg。     

甘蔗汁多酚氧化酶的提取研究

以磷酸盐缓冲液匀浆浸提法提取混合甘蔗汁多酚氧化酶(PPO),探讨缓冲液p H值、表面活性剂添加量和聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)添加量对甘蔗汁PPO提取效果的影响。结果表明,以邻苯二酚为底物时,获得甘蔗汁PPO的酶活性最适测定波长是230 nm。磷酸盐缓冲液提取甘蔗汁PPO最适p H值为6.2;在磷酸盐缓冲溶液中PVPP最适添加量为2%,提取甘蔗汁PPO的比活性最高。在缓冲液中加入表面活性剂Tween 80和Triton X-100时,提取甘蔗汁PPO的比活性较低。     

多酚氧化酶的提取及分离纯化研究进展

多酚氧化酶(PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,能催化邻-苯二酚氧化成邻-苯二醌,也是许多果蔬等农产品酶促褐变的主要原因。本文综述了国内外多酚氧化酶的提取及分离纯化技术的研究进展,包括传统提取方法(如缓冲液匀浆法、丙酮提取法、丙酮粉提取法等)和新型提取方法(超声波辅助提取法和超高压提取法等),传统经典分离纯化方法(如溶剂法、沉淀法)和新型分离纯化方法(如凝胶色谱分离法和离子交换色谱分离法等),旨在为多酚氧化酶的研究和应用,特别是为抑制农产品酶促褐变提供参考。     

荔枝果肉多酚氧化酶提取与初步纯化

酶促褐变是影响荔枝果肉加工和贮藏的重要问题,多酚氧化酶(PPO)是引起酶促褐变的重要酶类.用磷酸缓冲液匀浆提取荔枝果肉中的多酚氧化酶,提取液最佳离子浓度为0.1mol/L、最适pH为7.5、最佳提取时间为2h,最适料液比为1:3.并通过硫酸铵沉淀和Phenyl Sepharowe CL-4B(苯基琼脂糖CL-4B)疏水柱层析进行初步纯化,该酶被纯化了9.4倍,得率为48%.     

东海中华管鞭虾多酚氧化酶(PPO)的纯化及特性研究

本文采用匀浆浸提法提取中华管鞭虾(Solenocera crassicornis,S. crassicornis)多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO),经硫酸铵质量分级、离子交换、凝胶过滤纯化后,以左旋多巴胺(L-DOPA)为底物研究其底物专一性和动力学特性,并选取不同抑制剂和金属离子探讨对该PPO的抑制影响。结果显示,匀浆浸提法提取PPO的最佳条件为料液比1:2(W/V)、p H 7.5、浸提3 h、温度50℃,从100 g中华管鞭虾中获取的PPO的产量和纯化倍数分别是1.2%和25.9,中华管鞭虾PPO对L-DOPA和儿茶酚具有很显著地催化氧化作用(p≤0.05),Km值为分别是3.8 mM和8.12 mM,说明该酶为儿茶酚家族酶。PPO活性对苯硫脲、抗坏血酸、柠檬酸较为敏感,能显著被Cu~(2+)、Zn~(2+)、乙二胺四乙酸(EDTA)抑制。结果表明,中华管鞭虾PPO可能是活性部位含Cu~(2+)的金属酶,为控制中华管鞭虾黑变提供基础的信息。     

微波与超声波提取杨梅汁多酚类物质的对比研究

以杨梅汁为原料,采用微波和超声波对杨梅汁中的多酚类物质提取进行了对比研究,两种方法分别采用单因素及正交实验,探讨了最佳提取条件和参数。结果表明:微波提取的最佳工艺参数为乙醇体积分数为80%,微波功率500 W,处理时间25 s,液料体积质量比为4 mL∶1 g;提取多酚提取量为514.837 mg/L;超声波提取的最佳工艺参数为乙醇体积分数为60%,超声波功率500 W,处理时间35 min,液料体积质量比为4 mL∶1 g,多酚提取量为609.256 mg/L。超声波提取的杨梅多酚类物质的量多于微波提取的量。     

紫甘薯多酚氧化酶酶学性质的研究

.采用磷酸缓冲液提取紫甘薯PP0,以儿茶酚为其褐变底物,采用分光光度法对其酶学特性进行了研究.紫甘薯PPO对pH的变化十分敏感,在pH4.1和pH6.0出现两个活力峰,其中pH6.0处为一肩峰.pH值小于3.0或大于7.5时,酶活力迅速降低.最适反应温度为16℃,30℃处有一肩峰.     

小麦多酚氧化酶酶学特性的研究

选取3个小麦品种作为试验材料,以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在410 nm处测定小麦多酚氧化酶的活性,研究温度、pH值、底物浓度对其活性的影响以及酶促动力学常数Km,结果表明:小麦多酚氧化酶的最适温度范围为60～75℃,最适pH值为4.0～4.6,描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数km=0.19 mol/L,vmax=4.04×102(mol·L-1)·min-1.     

芦荟多酚氧化酶特性的研究

研究了芦荟多酚氧化酶的基本性质。以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在4 10nm处测定芦荟多酚氧化酶的活性,研究了温度、pH值、底物浓度以及酶浓度对其活性的影响,并建立了酶促褐变反应动力学方程。实验结果表明,芦荟多酚氧化酶的最适温度为4 0℃,最适pH值为6 5 ,其酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数Km=0 2 8mol/L ,Vmax=2 32×10 -2 U/min。文中还研究了利用蛋白酶抑制褐变的方法,以芦荟多酚氧化酶液(mL)∶木瓜蛋白酶(mL ,浓度0 5mg/mL) =5∶1的比例向芦荟多酚氧化酶粗酶液中添加木瓜蛋白酶,在5 5℃、pH5 7条件下,水解10min可较好地抑制多酚氧化酶的活性,从而抑制芦荟的酶促褐变。     

高灌蓝越橘多酚氧化酶的提取和纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法、硫酸铵分级沉淀法及苯基琼脂糖疏水性层析法对高灌蓝越橘多酚氧化酶进行提取和纯化。在提取和纯化中，用加入不同的酚吸收剂和抑制剂并比较酶活性的高低来确认最佳方法。结果表明在粗提中加入酚吸收剂、增溶剂和抑制剂提取效果较好，苯基琼脂糖疏水性层析法对此类酶纯化效果较佳并为后来的辅酶的分离提供了较高的纯化倍数。     

苹果多酚氧化酶的提取及其抑制作用的研究

以冷冻丙酮制备苹果多酚氧化酶(PPO), 通过以邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,对苹果果肉中多酚氧化酶的pH值、温度、热稳定性及抗氧化剂抑制作用进行了研究.结果表明:用真空冷冻干燥得到的酶粉能更好的保持多酚氧化酶活性;酶氧化邻苯二酚的最适pH为6.0,最适温度为25℃;PPO在20-25℃时对热较稳定,期后随着温度升高后,酶活迅速降低;在100℃维持1min酶全部失活;抗坏血酸和黄酮类物质能明显地抑制酶促褐变.     

超高压激活鲜榨梨汁多酚氧化酶的酶学特性

为探究超高压加速梨汁褐变的机制,以鲜榨翠冠梨汁为原料,采用超高压（500 MPa、5 min）处理,以未处理的梨汁为对照,测定超高压处理对梨汁货架期色泽的影响,检测处理前后梨汁中溶解氧质量浓度和总酚浓度,并研究多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）的最适pH值、最适反应温度、热稳定性、米氏常数（Km）。结果表明,超高压组梨汁货架期6 h褐变（色差值（ΔE）＝1.61）,而未处理组货架期24 h仍未见明显褐变（ΔE＝0.56）。鲜榨梨汁PPO存在PPO1（pH 5.0）和PPO2（pH 7.0）两种形式,超高压加速褐变与PPO1和PPO2被激活有关：PPO1活力从6.5 U/mL上升到14.1 U/mL,上升了1.17 倍;PPO2活力从2.6 U/mL上升到25.5 U/mL,上升了8.8 倍。激活效应的内在原因是PPO存在潜在酶活性形式,其本身活力较弱甚至无活力,超高压是激活PPO潜在酶活性的外在原因之一,十二烷基硫酸钠处理、热处理等也可激活PPO潜在酶活性。超高压降低PPO的Km值,提高了其与底物之间的亲和力,从而提高酶促反应速率;PPO1与底物的亲和力1/Km从2.353 L/mol上升到46.909 L/mol,上升了18.9 倍;PPO2与底物的亲和力从2.852 L/mol上升到62.857 L/mol,上升了21.0 倍。超高压同时会降低最大酶促反应速率（Vmax）,Vmax对酶促反应速率的影响如超过Km的影响,将会表现出钝化效应。综上,超高压通过激活PPO潜在酶活力、提高PPO与底物的亲和力和酶促反应速率,加速鲜榨梨汁褐变。     

茉莉酸甲酯诱导甘蔗抗虫性中多酚氧化酶（PPO）活性分析

诱导抗虫性研究发现,应用茉莉酸甲酯（MeJA）诱导甘蔗后,其叶片及生长点组织中多酚氧化酶（PPO）活性明显提高,酶活性分别达22～50units／mg和182～218units／mg,这与模拟螟虫取食作用的机械损伤诱导作用结果相类似。