COL4A1在miR- 29b对N2B细胞氧糖剥夺/再灌注损伤保护作用中的调控机制研究

【摘要】 目的 通过构建N2B神经细胞氧糖剥夺（OGD）/再灌注（R）模型验证miR- 29b对神经细胞的保护作用,探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1（COL4A1）在miR- 29b对神经细胞OGD/R损伤保护作用中的调控机制。方法 正常和缺氧条件培养N2B细胞,实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 29b表达。细胞计数试剂盒（CCK）- 8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术分别检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。免疫印迹双荧光素酶验证miR- 29b靶基因是否为COL4A1;N2B细胞转染miR- 29b mimics,RT- qPCR和免疫印迹检测COL4A1表达。构建COL4A1 3’非翻译区（UTR）野生型和突变型载体、靶基因,设计合成COL4A1,转染N2B细胞,缺氧培养,CCK- 8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。 结果 OGD/R细胞中miR- 29b表达较正常细胞组降低。在相同缺氧/复氧条件下培养细胞中miR- 29表达上调,细胞增殖能力明显增强,凋亡明显抑制。miR- 29b表达上调抑制COL4A1表达,但转染COL4A1及其对照组后,COL4A1对照组细胞增殖明显高于过表达组,凋亡明显低于过表达组。 结论 miR- 29b对N2B神经细胞OGD/R模型具有保护作用,通过抑制COL4A1表达减轻缺氧对N2B神经细胞的损伤。miR- 29b可通过调节COL4A1表达减少缺血/缺氧再灌注对神经细胞的损伤。

     

磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1过表达对肝细胞癌进展的影响

【摘要】 目的 研究磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1（PIK3R1）表达对肝细胞癌（HCC）进展的影响。 方法 免疫组化和逆转录- 定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC组织中PIK3R1表达。RT- qPCR和免疫印迹检测不同HCC细胞系中PIK3R1 mRNA和蛋白表达,选择MHCC97H、HCCLM3细胞作为模型研究PIK3R1对HCC进展的影响。溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和流式细胞术评价PIK3R1下调对HCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。蛋白印迹分析评估PI3K/蛋白激酶B（Akt）/mTOR信号传导通路的表达变化。 结果 HCC组织中PIK3R1表达与相邻正常组织相比,显著上调。下调PIK3R1表达抑制HCC细胞系增殖、迁移并促进其凋亡。PIK3R1下调还抑制MHCC97H、HCCLM3细胞中p- PI3K、p- Akt和p- mTOR表达。 结论 HCC中PIK3R1表达显著上调,沉默PIK3R1可抑制HCC细胞系增殖、迁移并加速凋亡,其可能是未来HCC治疗的潜在靶点。
     

miR- 23b直接靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖研究

【摘要】 目的 探讨肝细胞肝癌（HCC）组织微小RNA（miR）- 23b表达与癌症进展的关系,miR- 23b是否通过靶向白细胞介素（IL）- 11影响肝癌细胞增殖。方法 采用免疫组化分析和逆转录-定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC和相邻正常肝组织中IL- 11和IL- 11受体（R）α表达水平,RT- qPCR和蛋白印迹法检测不同HCC细胞株SMMC- 7721、LM3、Hep3B中miR- 23b表达水平,随后检测转染miR- 23b激动剂、拮抗剂和对照组SMMC- 7721细胞中miR- 23b、IL- 11、IL- 11Rα表达水平。采用集落形成和细胞凋亡分析检测转染miR- 23b激动剂和拮抗剂的SMMC- 7721细胞增殖和凋亡。采用荧光素酶测定系统了解IL- 11是否为miR- 23b直接作用靶标。采用集落形成和流式细胞仪检测pcDNA- IL- 11转染miR- 23b激动剂及小干扰RNA（siRNA）转染miR- 23b拮抗剂对SMMC- 7721细胞增殖和凋亡的影响。结果 HCC组织miR- 23b表达与癌症进展呈负相关。与邻近正常肝组织相比,HCC组织miR- 23b表达显著下调,IL- 11、IL- 11Rα表达显著上调,miR- 23b表达与IL- 11、IL- 11Rα表达呈负相关。IL- 11是miR- 23b调节HCC进展直接靶标,miR- 23b可通过靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖并促进其凋亡。结论 miR- 23b可通过调节IL- 11、IL- 11Rα表达抑制肝癌进展,可能直接下调IL- 11表达而在HCC进展中起抑癌作用。miR- 23b可能是未来肝癌治疗的潜在靶点。

     

射频消融亚致死性温度对肝癌干细胞的影响

【摘要】 目的 研究亚致死温度射频消融（RFA）对肝癌干细胞（LCSC）产生及其相关转录因子表达的影响。方法 利用小鼠Hep1-6肝癌细胞株和肝细胞癌（HCC）患者临床样品，检测LCSC相关标志物和转录因子的表达。结果 不同温度分别刺激Hep1- 6细胞后发现，45℃是不能诱导细胞死亡的亚致死性温度。流式细胞仪（FCM）检测显示45℃处理可引起CD13+、CD44+、CD90+、CD133+ Hep1- 6细胞水平明显上调，提示45℃温度导致Hep1- 6细胞中以上各型LCSC产生增加；实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测显示45℃温度导致CD13、CD90、CD133 mRNA水平明显上调。CD13 mRNA水平在5例HCC患者复发肝癌组织中均明显上调，CD133 mRNA在4例复发肝癌中上调，CD90 mRNA仅在1例复发肝癌中上调；FCM检测显示CD13+ LCSC水平在4例复发肝癌中明显上调，CD133+ LCSC水平仅在1例复发肝癌中上调，提示CD13+ LCSC水平上调与45℃温度关系更密切。RT- qPCR检测显示4例CD13+ LCSC上调的复发肝癌患者13个LCSC相关转录因子中Sox2、Stat1明显上调，FCM检测显示45℃处理Hep1- 6细胞后Sox2、Stat1 mRNA明显上调。用Sox2、Stat1 siRNA分别沉默了Sox2、Stat1基因，表明Sox2、Stat1均参与了45℃温度诱导的CD13+ LCSC产生。结论 RFA治疗中45℃亚致死性温度所致CD13+ LCSC水平增高与Sox2、Stat1表达有关。该结果对肝癌复发研究有一定借鉴意义。

     

miR- 29b通过抑制N2a细胞p53凋亡通路减轻氧糖剥夺/再灌注损伤

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 29b过表达是否抑制脑缺血损伤,进一步探讨其潜在机制。方法 体外培养小鼠成神经细胞瘤N2a细胞,构建氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）模型,模拟体外脑缺血损伤。N2a细胞随机分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R＋转染miR- 29b激动剂组、OGD/R＋转染miR- 29b抑制剂组、转染miR- 29b激动剂阴性对照组、转染miR- 29b抑制剂阴性对照组。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测各组miR- 29b表达,溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法、乳酸脱氢酶（LDH）法检测 miR- 29b激动剂和抑制剂对OGD/R诱导细胞活性和凋亡的影响,Hoechst 33258染色法观察N2a细胞形态学特征及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3活性,免疫印迹法定量分析促凋亡蛋白Bax、Bcl- 2及p53表达。结果 经OGD/R处理的N2a细胞中miR- 29b水平明显降低。miR- 29b激动剂显著增加细胞活力,减少LDH漏出率,改善细胞核在凋亡过程中形态学变化,增强OGD/R条件下caspase- 3活性;miR- 29b抑制剂加剧OGD/R诱导的细胞毒性和细胞凋亡。miR- 29b激动剂阻断OGD/R诱导的Bax和p53蛋白表达增加,降低Bcl- 2蛋白表达;miR- 29b抑制剂加剧OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变。p53基因敲除的p53 siRNA降低细胞活力,增加LDH漏出率,逆转miR- 29b激动剂对细胞损伤的改善作用。结论 miR- 29b通过负调控p53依赖性凋亡途径减轻脑缺血性损伤,可能为缺血性脑卒中提供一潜在的治疗靶点。
     

M2型丙酮酸激酶同工酶表达对肝细胞癌化疗敏感性的影响

【摘要】 目的 研究M2型丙酮酸激酶同工酶（PKM2）对肝癌细胞HepG2增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨PKM2表达对肝细胞癌（HCC）化疗敏感性的影响。方法 采用蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测正常肝细胞株HL- 7702和肝癌细胞株HepG2中PKM2蛋白和mRNA表达。构建靶向PKM2基因重组质粒（PKM2- siRNA）和对照质粒（siRNA- NC）,并转染至HepG2细胞中,蛋白印迹和qRT- PCR检测PKM2敲低情况。细胞克隆形成、Transwell趋化和TUNEL法分析PKM2表达对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。不同浓度多柔比星（DOX）处理各组细胞后,CCK- 8和TUNEL法检测细胞活性和凋亡。 结果 HepG2细胞株中PKM2蛋白和mRNA表达与HL- 7702相比显著上调[mRNA（1.01±0.01）%对（5.04±0.02）%,蛋白（1.34±0.04）%对（4.03±0.02）%,P＜0.05]。PKM2在PKM2- siRNA转染HepG2细胞中表达在转录和翻译水平显著降低,细胞克隆形成率、细胞侵袭数均低于空白转染组和转染siRNA- NC对照组,细胞凋亡率高于空白转染组和转染siRNA- NC对照组,DOX半抑制浓度（IC50）为7.25 μg/mL,转染siRNA- NC对照组为18.51 μg/mL。随着DOX给药浓度增加,细胞凋亡率显著增加。转染PKM2- siRNA细胞组凋亡数明显高于转染siRNA- NC对照组（P＜0.05）。 结论 PKM2在人肝癌细胞株HepG2中高表达。敲低PKM2表达可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,增强对DOX化疗敏感性。PKM2可能是HCC治疗的潜在靶点。

     

高强度聚焦超声对人胰腺癌裸鼠移植瘤差异性表达基因的影响

【摘要】 目的 研究高强度聚焦超声（HIFU）辐照人胰腺癌移植瘤后差异性表达基因,从基因组学初步探讨HIFU的生物学机制。方法 构建人胰腺癌裸鼠YY- 1移植瘤模型,HIFU辐照后采用Agilent人类基因表达谱芯片检测差异性表达基因,反转录-聚合酶链反应（RT- PCR）技术验证上调基因HIF1a、SMAD4及下调基因Bcl- xl。结果 与未辐照对照组相比,辐照组表达谱芯片分析发现与胰腺癌相关的差异性基因共65个,其中上调43个,下调22个。基因本体（GO）分析提示显著表达改变的基因富集于细胞核、细胞质部位,并与蛋白结合、金属离子结合、锌离子结合、转录调控、细胞凋亡等功能相关。RT- PCR检测结果与表达谱芯片分析结果一致。结论 HIFU辐照可引起一系列基因调控改变,这些差异性表达基因可能参与调控肿瘤生物学过程。

     

体外不完全射频消融后肝癌细胞上皮-间质转化相关长链非编码RNA差异表达

【摘要】 目的 研究上皮-间质转化（EMT）相关长链非编码RNA（LncRNA）在不完全射频消融（RFA）肝细胞癌（HCC）病灶的差异表达谱变化。方法 采用Huh7细胞47℃水浴加热,获取体外模拟的不完全RFA HCC细胞。镜下及免疫印迹检测Huh7- H细胞EMT改变,Transwell检测细胞迁移与侵袭能力,CCK- 8检测细胞增殖能力。采用LncPathTM Human EMT Array芯片分析Huh7- H和Huh7差异表达的EMT相关LncRNA,RT- PCR验证。结果 镜下显示Huh7- H呈现EMT形态学改变。免疫印迹检测显示Huh7- H细胞上皮表型标志分子E- cadherin表达降低,间质表型标志分子N- cadherin、vimentin表达增加。Transwell迁移及侵袭实验显示,Huh7- H、Huh7穿膜细胞数分别为（138.0±11.8）和（61.0±5.2）、（82.7±39.4）和（33.3±7.8）,Huh7- H细胞迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）。CCK- 8检测显示Huh7- H细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）。LncPathTM Human EMT Array芯片筛选出3个差异表达LncRNA（P≤0.05,变化倍数≥1.5）,即2条LncRNA（FUNDC2P4、RPL27P7）下调,1条LncRNA（MTND4LP14）上调。RT- PCR验证HUH7- H组FUNDC2P4、RPL27P7、MTND4LP14基因表达丰度分别是HUH- 7组的0.137、0.869、1.037倍。临床标本验证LncRNA FUNDC2P4在癌旁组织表达高于HCC组织,HCC组织高于RFA术后残余HCC组织。结论 筛选出不完全RFA后HCC细胞低表达的EMT相关LncRNA FUNDC2P4,为深入探讨该基因功能及分子机制提供了基础。

     

热损伤对肝细胞肝癌细胞增殖及侵袭转移特性影响的实验研究

【摘要】 目的 体外实验评价热损伤对肝细胞肝癌（HCC）细胞增殖、侵袭转移能力及上皮-间质细胞转化（EMT）等特性的影响,探索热消融与HCC复发转移之间的关系。方法 通过体外加热构建McA- RH7777 HCC细胞热损伤模型。CCK- 8法检测热损伤对HCC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期情况。Transwell实验研究热损伤对HCC细胞侵袭能力的影响。荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）和蛋白印迹（Western blot）分析热损伤对HCC细胞侵袭及EMT 相关分子标志物VEGF、MMP- 9、Nm23、E- cadherin、vimentin的mRNA和蛋白表达的影响。结果 McA- RH7777 HCC细胞热处理条件为43.5℃水浴30 min。热处理后2～5 d细胞增殖能力显著高于对照组（P＜0.05）。热处理48 h及72 h后处于G1期细胞比例降低,S＋G2期细胞比例增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,热处理后24 h后HCC细胞侵袭能力差异不明显,而热处理72 h后细胞侵袭能力显著增加（22.3±2.46对14.2±1.82,P＜0.001）。RT- PCR和蛋白印迹分析结果显示,热处理72 h后HCC细胞VEGF、MMP- 9和vimentin表达水平显著增加,E- cadherin表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 亚致死量热损伤诱导McA- RH7777 HCC细胞发生EMT并增加其增殖和侵袭转移能力,表现出更高的恶性潜能。

     

125I粒子持续低剂量率照射和60Co γ射线高剂量率照射对H1299细胞生物学效应的比较研究

【摘要】 目的 探讨125I粒子持续低剂量率（CLDR）内照射和60Co γ射线高剂量率（HDR）外照射对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株H1299的细胞生物学效应。方法 H1299细胞处于指数生长期时分别行125I粒子CLDR照射和60Co γ射线HDR照射；克隆形成实验检测细胞存活分数，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率，Western blot检测Bax、Bcl- 2蛋白表达水平。结果 随着照射剂量增大，125I粒子CLDR照射比60Co γ射线HDR照射抑制H1299细胞增殖效应更明显。照射剂量为4 Gy时125I粒子组H1299细胞G2/M期百分比、细胞凋亡率分别为（21.77±0.31）%、（13.79±0.50）%；同样照射剂量下，60Co照射组H1299细胞G2/M期百分比仅为（18.85±0.99）%，细胞凋亡率仅为（8.79±0.22）%（P＜0.05）。125I粒子CLDR照射明显上调Bax蛋白表达，同时下调Bcl- 2蛋白表达。结论 125I粒子CLDR内照射比60Co γ射线HDR外照射抑制H1299细胞增殖效应更明显。Bcl- 2/Bax蛋白比失衡在125I粒子CLDR照射抗肿瘤效应中可能发挥重要作用。
     

Unerroric of control of mutual compliance of the efficiency of hydrogen engines of unmanned vehicles in the conditions of mass production

The issues related to the reliability of hydrogen engines of unmanned vehicles and increasing the efficiency of using hydrogen as fuel when using the method of its production during the decomposition of hydrogen-containing molecules of liquid-phase organic compounds in a plasma discharge under the action of intense ultrasonic exposure are considered. Experiments have shown that as a result of decomposition in the acoustoplasma discharge of liquid hydrocarbons, solid-phase carbon-containing products are formed, chemical transformations occur in the liquid phase and hydrogen-containing combustible gas is formed. Hydrogen-containing gas can be used as fuel immediately after synthesis, i.e. it does not require separation, since in addition to hydrogen it contains only impurities of CO₂ and water vapor. The purpose of the study is to formalize the basic conditions for tightening the control of mutual compliance with the efficiency of hydrogen engines of the same series in the conditions of their mass production. Methods of mathematical statistics and hardware-software modeling were used in the study. The term “unerroric of quality mutual compliance control” is introduced to describe a set of hardware and software tools for such control. The principle of in-depth testing of the technical condition of such engines of one series is described in a multidimensional formulation of the quality control problem for three of their operating parameters at once. The conditions for increasing the mutual correspondence of the measured values of such parameters in the conditions of serial production of hydrogen engines are formalized.     

气门锁夹槽位置检测

气门圆弧形锁夹槽中心至杆端面以及至盘锥面量规线的距离(如图1中L、H). 在过程检验中如用普通量具难以测量,如用仪器测量则速度慢,效率低.为便于生产过程控制,确保工序质量,我们采用锁夹槽定位,用标准件比较测量的专用检具(如图2)进行测量.为保证锁夹槽定位准确以适应不同型号的气门,并防止气门测量时轴向窜动和左右摆动,采用了V型定位叉,使锁夹槽以四点定位,V型叉口的宽度,根据锁夹槽圆弧半径大小确定:约为圆弧的三分之二处(图3,图4).     

小型锅炉烟尘测试时锅炉出力的计算

锅炉烟尘测试时,必须对锅炉出力进行测试。但监测中,许多小型锅炉往往不具备相关的计量装置和仪表,为解决这一问题,文章提出了用烟气量和空气过剩系数来计算锅炉的出力的公式,在实际使用中,该方法简单易行,其结果和实测值具有很好的一致怀。     

煤焦混烧时粉尘化学成分和比电阻对静电除尘效率的影响

文章介绍了在煤焦混粉燃烧的情况下，粉尘化学成分和粉尘比电阻的变化对静电除尘器效率的影响。     

关于发展天然气电厂的讨论

世界发电燃料结构在不断的转换过程中。18世纪60年代从薪柴转到煤炭,19世纪到20世纪初大量发展燃煤电厂;20世纪20年代又从煤炭转向石油和天然气,20年代上半叶又大量发展燃油电厂;20世纪末由于天然气生产的发展,天然气因环境影响小,受到工业发达国家的青睐,加速发展天然气电厂。我国70年代初和90年代曾两次发展燃油电厂,由于石油危机和石油价格暴涨而受到制约,不得不实行以煤代油,改造燃油电厂。现在似乎认为燃油电厂不能再搞,但又出现发展燃气电厂的热流,发展燃气电厂确实是当今的世界潮流,但是同当年发展燃油电厂一样,要研究是否符合中国的国情?     

活塞车床设计方案探讨--ECK25异形活塞车床设计分析

本文从新型活塞设计的趋势及其对活塞车床的功能要求，讨论活塞车床的设计方案，并从机床功能、造型和宜人性上进行分析。     

中国煤炭地下气化技术的发展

本文综述了煤炭地下汽化技术的国内外发展现状,对我国“长通道、大断面”煤炭地下气化新工艺给予了技术经济评述,并提出了发展煤炭地下汽化技术的政策建议。     

MgO膨胀剂细度对MgO水化和水泥浆体膨胀的影响

基于《水工混凝土掺用氧化镁技术规范》中的Ⅰ型氧化镁（MgO）,研究了该型MgO膨胀剂（MEA）细度对掺粉煤灰水泥浆体膨胀性能的影响。即采用X射线衍射分析(XRD)及同步热分析（TG DSC）分析了掺MEA水泥浆体中MgO的水化性。结果表明,养护温度相同时,MEA的细度对水泥浆体内MEA中MgO的水化和水泥浆体的膨胀无显著影响,产生的膨胀均能补偿水泥浆体的收缩;MEA的细度可从试验设计采用的45 μm筛筛余15%左右增加到30%左右,这将有利于MEA生产企业的节能降耗。     

柴油理化性能的分析与质量指标的控制

对柴油的化学组成及物理性质进行了分析,叙述了柴油理化性能与柴油机工作状态的关系,探讨了柴油质量指标的控制措施,为今后的柴油检验和机车检修工作提供了实用的理论依据。     

不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响

目前在研究水工隧洞地震响应时只考虑了单向地震激励,忽略了双向地震激励,故不能合理地分析不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响。因此,选取合理的材料参数和模型边界条件,应用ANSYS建立了某水工隧洞的三维有限元模型,对单向地震激励和双向地震激励下的水工隧洞进行了位移分析。结果表明,不同方向的地震激励对水工隧洞的水平位移和竖直位移影响不同,水平位移主要受x方向地震激励影响,竖直位移主要受y方向地震激励影响,并根据单向地震激励和双向地震激励存在的相关性,建立了位移数学关系模型。