COL4A1在miR- 29b对N2B细胞氧糖剥夺/再灌注损伤保护作用中的调控机制研究

【摘要】 目的 通过构建N2B神经细胞氧糖剥夺（OGD）/再灌注（R）模型验证miR- 29b对神经细胞的保护作用,探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1（COL4A1）在miR- 29b对神经细胞OGD/R损伤保护作用中的调控机制。方法 正常和缺氧条件培养N2B细胞,实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 29b表达。细胞计数试剂盒（CCK）- 8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术分别检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。免疫印迹双荧光素酶验证miR- 29b靶基因是否为COL4A1;N2B细胞转染miR- 29b mimics,RT- qPCR和免疫印迹检测COL4A1表达。构建COL4A1 3’非翻译区（UTR）野生型和突变型载体、靶基因,设计合成COL4A1,转染N2B细胞,缺氧培养,CCK- 8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。 结果 OGD/R细胞中miR- 29b表达较正常细胞组降低。在相同缺氧/复氧条件下培养细胞中miR- 29表达上调,细胞增殖能力明显增强,凋亡明显抑制。miR- 29b表达上调抑制COL4A1表达,但转染COL4A1及其对照组后,COL4A1对照组细胞增殖明显高于过表达组,凋亡明显低于过表达组。 结论 miR- 29b对N2B神经细胞OGD/R模型具有保护作用,通过抑制COL4A1表达减轻缺氧对N2B神经细胞的损伤。miR- 29b可通过调节COL4A1表达减少缺血/缺氧再灌注对神经细胞的损伤。

     

热损伤对肝细胞肝癌细胞增殖及侵袭转移特性影响的实验研究

【摘要】 目的 体外实验评价热损伤对肝细胞肝癌（HCC）细胞增殖、侵袭转移能力及上皮-间质细胞转化（EMT）等特性的影响,探索热消融与HCC复发转移之间的关系。方法 通过体外加热构建McA- RH7777 HCC细胞热损伤模型。CCK- 8法检测热损伤对HCC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期情况。Transwell实验研究热损伤对HCC细胞侵袭能力的影响。荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）和蛋白印迹（Western blot）分析热损伤对HCC细胞侵袭及EMT 相关分子标志物VEGF、MMP- 9、Nm23、E- cadherin、vimentin的mRNA和蛋白表达的影响。结果 McA- RH7777 HCC细胞热处理条件为43.5℃水浴30 min。热处理后2～5 d细胞增殖能力显著高于对照组（P＜0.05）。热处理48 h及72 h后处于G1期细胞比例降低,S＋G2期细胞比例增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,热处理后24 h后HCC细胞侵袭能力差异不明显,而热处理72 h后细胞侵袭能力显著增加（22.3±2.46对14.2±1.82,P＜0.001）。RT- PCR和蛋白印迹分析结果显示,热处理72 h后HCC细胞VEGF、MMP- 9和vimentin表达水平显著增加,E- cadherin表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 亚致死量热损伤诱导McA- RH7777 HCC细胞发生EMT并增加其增殖和侵袭转移能力,表现出更高的恶性潜能。

     

miR- 29b通过抑制N2a细胞p53凋亡通路减轻氧糖剥夺/再灌注损伤

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 29b过表达是否抑制脑缺血损伤,进一步探讨其潜在机制。方法 体外培养小鼠成神经细胞瘤N2a细胞,构建氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）模型,模拟体外脑缺血损伤。N2a细胞随机分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R＋转染miR- 29b激动剂组、OGD/R＋转染miR- 29b抑制剂组、转染miR- 29b激动剂阴性对照组、转染miR- 29b抑制剂阴性对照组。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测各组miR- 29b表达,溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法、乳酸脱氢酶（LDH）法检测 miR- 29b激动剂和抑制剂对OGD/R诱导细胞活性和凋亡的影响,Hoechst 33258染色法观察N2a细胞形态学特征及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3活性,免疫印迹法定量分析促凋亡蛋白Bax、Bcl- 2及p53表达。结果 经OGD/R处理的N2a细胞中miR- 29b水平明显降低。miR- 29b激动剂显著增加细胞活力,减少LDH漏出率,改善细胞核在凋亡过程中形态学变化,增强OGD/R条件下caspase- 3活性;miR- 29b抑制剂加剧OGD/R诱导的细胞毒性和细胞凋亡。miR- 29b激动剂阻断OGD/R诱导的Bax和p53蛋白表达增加,降低Bcl- 2蛋白表达;miR- 29b抑制剂加剧OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变。p53基因敲除的p53 siRNA降低细胞活力,增加LDH漏出率,逆转miR- 29b激动剂对细胞损伤的改善作用。结论 miR- 29b通过负调控p53依赖性凋亡途径减轻脑缺血性损伤,可能为缺血性脑卒中提供一潜在的治疗靶点。
     

核因子- κB和炎性反应因子对经导管动脉栓塞术后肝细胞损伤的作用探讨

【摘要】 目的 探讨经导管动脉栓塞术（TAE）后核因子（NF）- κB和炎性反应对兔VX2肝癌模型癌旁正常肝细胞的损伤作用。方法 采用经典开腹穿刺注入瘤块法将VX2肝癌移植至70只健康新西兰大白兔肝脏内造模,接种后21 d CT、MR检查追踪肿瘤种植及生长情况。将60只造模成功兔随机分为TAE组（碘化油栓塞供血肝动脉）、造影组（仅肝动脉造影）和对照组（不作处理）,每组20只。免疫组化法检测NF- κB在各组癌旁正常肝组织中表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）- α和白细胞介素（IL）- 10在各组癌旁正常肝组织中水平。采用SPSS 22.0软件对数据作统计学分析,计量资料用t检验,计数资料用χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 免疫组化检测显示,TAE组、造影组、对照组癌旁正常组织中NF- кB阳性表达率分别为75%（15/20）、35%（7/20）和20%（4/20）。ELISA检测显示,TAE组、造影组、对照组TNF- α水平分别为（11.72±0.65） ng/L、（9.60±0.31） ng/L、（8.82±0.81） ng/L;IL- 10水平分别为（2.18±0.13） ng/L、（1.67±0.12） ng/L、（1.66±0.10） ng/L。与对照组和造影组相比,TAE组癌旁正常肝组织中NF- κB表达增加（P＜0.05）,TNF- α和IL- 10水平升高（P＜0.05）。结论 TAE术后肝功能损伤可能与NF- κB和炎性因子相互作用有关。
     

天冬多糖的提取及其对人肝癌SMMC-7721细胞生长影响的研究

目的 探讨天冬多糖提取方法的可靠性及天冬多糖对体外培养的人肝癌ＳＭＭＣ ７７２１细胞株生长的影响。方法 冷水浸提、乙醇沉淀法提取天冬粗多糖,再用链菌蛋白酶Ｅ及Ｓｅｖａｇ法脱蛋白,最后用纤维素及琼脂糖凝胶层析柱纯化提取纯品天冬脱蛋白多糖,并对其进行鉴定及分子量检测。用噻唑蓝法检测不同浓度纯品天冬脱蛋白多糖对于体外培养的人肝癌ＳＭＭＣ ７７２１细胞株生长的影响,绘制量效曲线及生长曲线。结果 使用本实验方法所得的提取物为纯品天冬脱蛋白多糖,分子量为 ５ ０００　～　 ４００ ０００ ｕ。此分子量范围的天冬多糖对人肝癌ＳＭＭＣ ７７２１细胞株生长具有双向调节作用:浓度较小时（ ≤ ８００ μｇ／ｍｌ）具有一定的促进作用,而当浓度较大时（ ≥ ９００ μｇ／ｍｌ）则表现出一定的抑制作用,随着时间的延长和浓度的增加,其抑制作用更为明显（Ｐ ＜ ０．０５）。结论 本实验所用纯品天冬脱蛋白多糖的提取、分离、纯化方法可靠。在体外培养情况下,天冬脱蛋白多糖在较低浓度时可促进ＳＭＭＣ ７７２１人肝癌细胞的生长,而在高浓度情况下,可以抑制其生长,且存在着量效、时效关系。     

红藤脂酸钠对人肝癌细胞系SMMC-7721体外抑瘤作用的实验研究

目的研究中药制剂红藤脂酸钠在体外对人肝癌细胞系SMMC-7721的生长抑制作用并初步探讨其作用机制.方法MTT法测定SMMC-7721细胞生长的抑制百分率,并运用Annexin V法和TUNEL法检测凋亡发生率.结果MTT法测得对照组与红藤脂酸钠处理组吸光值(A值)分别为:对照组(0.385±0.03),红藤脂酸钠处理组中的250μg/ml组(0.31±0.019)、500μg/ml组(0.199±0.022)、1 mg/ml组(0.15±0.033)和2 mg/ml组(0.048±0.026);各组间比     

微小RNA- 155通过Notch信号通路对脑缺血-再灌注损伤的影响

【摘要】 目的 探讨微小RNA（miR）在小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）所造成缺血-再灌注（I- R）损伤中的调控作用。方法 构建C57BL/6小鼠MCAO模型,采用氯化三苯四氮唑（TCC）染色和神经功能评分了解脑I- R损伤对小鼠神经功能的影响。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）技术检测miR- 155表达,苏木精-伊红（HE）染色观察miR- 155对脑组织病理学的影响,伊文氏蓝（EB）和脑组织含水量检测观察miR- 155对血脑屏障（BBB）通透性的影响,一氧化氮（NO）含量和内皮型内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达检测评估miR- 155对血管内皮细胞功能的影响,免疫印迹法检测Notch1、Notch1胞内结构域（NICD）、Jagged1和Hes1表达, RT- qPCR检测Notch1和Hes1 mRNA水平,以明确miR- 155在Notch信号通路中的作用。结果 miR- 155缺失提高Notch1、NICD、Hes1表达,降低脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）染色阳性细胞百分比和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3水平;干扰miR- 155表达增加NO产生和eNOS表达,导致脑组织含水量和EB含量下调。miR- 155过度表达使所有这些改变恢复至脑I- R损伤水平。Notch1、NICD、Hes1表达减轻脑I- R损伤状态。结论 miR- 155可通过Notch信号通路阻断正常NO产生和eNOS表达,这一调控机制可能是未来缺血性脑卒中治疗潜在靶点之一。

     

The effect of mixture gas on hydrogen permeation through a palladium membrane: Experimental study and theoretical approach

Hydrogen permeation through a palladium membrane has been measured in the presence of several gases, such as CO, _N2${\mathrm{N}}_2$, _CO2${\mathrm{CO}}_2$, and Ar, both in the feed side and in the shell side of the (membrane) module. It has been found that CO molecules, remarkably inhibit hydrogen permeation. In particular, in the presence of carbon monoxide the permeation decreases with two different slopes: (I) for low CO concentrations, the hydrogen permeation decreases quickly (surface effects), whereas (II) for higher ones it decreases smoothly (dilute effect). Permeation of hydrogen, in the presence of the other gases, i.e. _N2${\mathrm{N}}_2$, _CO2${\mathrm{CO}}_2$ and Ar, always decreases with the same slope (dilute effect). In order to describe the CO inhibition, a theoretical investigation has been proposed. In particular, the framework of the Density Functional Theory has been used. CO and _N2${\mathrm{N}}_2$ Density Functional full optimisations on palladium clusters show that CO and _N2${\mathrm{N}}_2$ molecules present two minima on the cluster surfaces with bond lengths of 2.0 and 3.8 Å, respectively. The CO minima are much stable than _N2${\mathrm{N}}_2$ minima, resulting in a surface effect on the hydrogen permeation through the membrane.     

The effect of flow pattern on split of two-phase flow through a micro-T-junction

An experiment has been carried out to study the phase split of water–nitrogen two-phase flow through a horizontal T-junction with a square cross section (500 μm × 500 μm), focusing on the effect of flow pattern. By comparing the results of slug, slug–annular and annular flows, it is shown that phase split characteristic of micro-T-junction highly depends on inlet flow pattern. When the inlet flow is a slug flow, it takes on gas rich in side branch. But when the inlet flow shifts to an annular flow, the side branch is rich in liquid. For an slug–annular flow, the curves show transitional characteristics. The effect of superficial velocities on the phase split of each flow pattern is considered as following: the liquid taken off decreases with an increase of liquid superficial velocity and increases with an increase of gas superficial velocity.The results have been compared to that of a 500 μm T-junction with a circular cross section. It is found that the square T-junction shows more liquid taken off at slug flow and slug–annular flow. While, at annular flow, the liquid taken off increases slower at high gas taken off in square T-junction due to cross section effect.     

药物洗脱球囊抑制下肢动脉狭窄性病变的实验研究

【摘要】 目的 探讨新型药物洗脱球囊（DEB）在下肢动脉狭窄性病变（PAD）中可能具有的抑制管腔丢失、减少内膜增生作用。方法 以雄性新西兰纯种兔（体重2.5 ～ 3.0 kg）为实验对象，于兔腹主动脉近心端及远心端各植入Mustang裸支架1枚，模拟PAD模型，并分别用裸球囊（PTA组）及药物洗脱球囊（DEB组）在血管支架段行后扩张，术后28 d处死动物，收集腹主动脉支架标本，塑料包埋并行Masson染色，比较各组内膜增生程度，同时行DEB药物（紫杉醇）靶点β- 微管蛋白免疫组化检测。结果 形态学上，与PTA组比较，DEB组内膜增生及管腔狭窄率明显下降。同时β- 微管蛋白免疫组化检测显示，与PTA组相比，DEB组血管内膜β- 微管蛋白表达量显著增加。结论 动物实验初步显示，DEB具有潜在的有效地抑制管腔丢失、减少内膜增生作用，初步证实该新型DEB的优良性能，提示该新型DEB远期应用于临床治疗PAD的潜在可能性。     

不同活度125I粒子植入抑制兔VX2肝癌机制研究

【摘要】 目的 探讨125I粒子组织间植入诱导肝癌细胞凋亡的机制。比较不同活度125I粒子组织间植入诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖的作用强度。方法 将24只兔VX2肝癌模型随机分为3组,分别植入不同初始活度的125I粒子:0 mCi组（对照组,n=8）、0.7 mCi组（n=8）及1.0 mCi组（n=8）。5周后处死实验兔,取出肿瘤病灶,检测125I粒子对肿瘤细胞凋亡、肿瘤生长相关因子表达的影响及caspase 3 活性改变。结果 不同初始活度125I粒子均可使肿瘤细胞凋亡率上升, Bcl 2、VEGF表达下调,Bax表达上调,1.0 mCi 125I粒子组作用均更加明显（P＜0.05）。不同初始活度125I粒子可增加肿瘤组织中caspase 3活性,两治疗组间差异无明显统计学意义（P＞0.05）。结论 125I粒子植入后不仅通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长、增殖,还影响凋亡相关基因及编码蛋白表达,抑制肿瘤细胞新生血管生成。     

肝细胞肝癌125I粒子植入影响肿瘤局部控制临床研究

【摘要】 目的 研究肝细胞肝癌（HCC）行125I 放射性粒子植入补救治疗后影响肿瘤局部控制（DCR）的关键因素。方法 共纳入HCC 患者68例,接受CT引导下125I 放射性粒子组织间植入治疗,粒子活度选择0.6~0.8 mCi,匹配周围剂量（处方剂量,MPD）设置110~160 Gy,近期疗效评估采用mRECIST标准,对影响肿瘤DCR的诸多因素,如性别、年龄、肿瘤大小、粒子数量、粒子分布模式（分巴黎布源模式和蒙特卡洛布源模式两种）,以及粒子植入术后即刻D90剂量等6个因素采用非参数二分类logistic多因素分析。结果 68例HCC患者均成功完成125I 放射性粒子植入补救治疗。未发生三级以上不良事件。65例患者获得随访和评估。单因素分析显示,病灶大小（P=0.006）和D90剂量（P<0.001）对DCR有影响,肿瘤最大径>5 cm,D90<110 Gy预示DCR未控;多因素分析显示,D90剂量（P<0.001）是唯一影响DCR的关键参数。结论 对于125I 放射性粒子植入补救治疗HCC而言,D90剂量是唯一影响肿瘤DCR的关键因素,足量的周边匹配剂量才能保证良好的临床疗效。

     

The effect of introducing a buffer layer to polymer solar cells on cell efficiency

The effect of poly(3,4-ethylenedioxythiophene):poly(4-styrenesulfonate) (PEDOT:PSS) as a buffer layer was investigated in polymer solar cells (PSCs). Four different types of PEDOT:PSS were used: PH, PH500 and their DMSO (dimethylsulfoxide)-doped counterparts. The efficiency of PSCs was independent of the electric conductivity of the buffer layer as a bulk property while it was significantly related to interfacial properties between the buffer layer and a bulk-heterojunction (BHJ) layer. The interfacial properties included charge transfer resistance (R_CT), hole mobility (μ_h) and contact angle (θ) of the solution of BHJ on the buffer layer. Lower R_CT, higher μ_h and smaller θ led to the higher fill factor (up to 72%), enabling highly efficient PSCs with efficiency (η)=4.25%.