鞣花酸经活性氧与血管再生途径对四氯化碳诱导肝硬化的保护作用研究

【摘要】 目的 研究鞣花酸（EA）对四氯化碳（CCl4）诱导的肝硬化小鼠模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将40只小鼠随机分为对照组（n=10,予0.9%氯化钠溶液）和肝硬化模型组（n=30,由橄榄油稀释10%CCl4诱导建模）,模型组又随机分为EA未干预组（n=10）、7.5 mg/kg EA组（n=10）、15 mg/kg EA组（n=10）。检测所有小鼠血清谷氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和白蛋白（ALB）水平,苏木精-伊红（HE）染色观察肝细胞形态。采用逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）检测肝细胞Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- PX）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3活性,蛋白印迹检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、VEGF受体（VEGFR）- 2表达水平。结果 根据肝细胞ALT、AST、ALB含量检测及HE染色细胞形态观察结果,推测EA对CCl4诱导的肝硬化小鼠具有保护作用。EA能显著抑制Ⅰ型胶原和iNOS表达,氧化应激及活性氧（ROS）形成显著降低,EA干预组VEGF、VEGFR- 2表达及caspase- 3活性显著提高。结论 EA通过ROS及血管再生途径对CCl4诱导的肝硬化有保护作用。
     

TIPS联合胃冠状静脉栓塞治疗肝硬化门静脉高压伴上消化道出血

【摘要】 目的 对比单纯TIPS和TIPS联合胃冠状静脉栓塞术（GCVE）治疗肝硬化门静脉高压症（PHT）伴上消化道出血（UGH）,分析TIPS和GCVE联合应用的必要性、可行性及临床疗效。方法 回顾性分析2010年4月至2012年5月收治的38例PHT伴UGH患者临床资料,其中接受单纯TIPS治疗15例（A组）,TIPS联合GCVE治疗23例（B组）,观察分析手术前后血液指标、门静脉及脾脏血流动力学、脾脏形态学、消化道静脉曲张程度变化。随访术后并发症发生情况。结果 两组术后门静脉压降低、流速加快、脾静脉淤血指数降低均较术前明显（P＜0.05）,B组均优于A组（P＜0.05）。术后两组食管胃底静脉曲张（EGV）均明显好转（P＜0.05）,B组和A组EGV好转率分别为94.7%、66.6%,急诊止血率分别为100%、75%,再出血率分别为4.3%、28.5%,B组均明显优于A组（P＜0.05）。手术前后肝功能指标组内、组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。两组术后肝性脑病（HE）发生率、支架原发通畅率差异均无统计学意义（P＞0.05）。两组再介入通畅率均为100%,支架远端位于门静脉左支者HE发生率显著低于位于右支者（P＜0.05）。结论 TIPS联合GCVE治疗肝硬化PHT伴UGH疗效确切,优于单纯TIPS。

     

自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔急性肝损伤模型的治疗效果，了解促肝细胞生长素（pHGF）在干细胞移植治疗中的协同作用。方法新西兰雄性大白兔１５只，皮下注射５０％CCl ４ 橄榄油溶液０．８ml／kg连续４d制作急性肝损伤模型。模型动物随机分为实验组A（干细胞移植组），实验组B（干细胞移植＋pHGF组）和对照组（各５只）。实验组经兔双侧胫骨抽取骨髓约５ml ，采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞，制成５ml 细胞悬液，透视下经股动脉插管将骨髓干细胞经肝动脉注入肝脏，对照组注入生理盐水。实验组B在干细胞移植后隔日静脉注射pHGF２．０mg ／kg共２０d。干细胞移植后２、４、８周抽血进行肝功能检测，８周后取兔肝脏组织标本进行病理学观察。结果骨髓干细胞肝动脉移植后肝功能逐渐改善，至移植后８周，各组血清AST、ALT活性和TBIL、ALB含量均显著低于术前指标，而球蛋白含量高于术前（P均＜０．０５），而且各组之间仍有明显差异。病理组织学观察显示实验组肝纤维组织增生程度和肝细胞变性较对照组明显减轻。免疫组化染色可见肝组织内散在分布有CD３４阳性肝样细胞，实验组A较对照组多，实验组B最多。结论自体骨髓干细胞经肝动脉移植对肝损伤有明显治疗作用，可改善肝功能，促进肝组织结构重建，抑制纤维组织增生；pHGF能加速肝组织的修复和肝功能的改善。     

不同活度不同剂量125I粒子植入对兔肝脏纤维化的影响

目的 评价不同活度、不同剂量125I粒子植入对兔肝脏纤维化的影响。方法 16只新西兰大白兔（雌雄不拘）随机分为A、B、C、D组,每组4只。每只实验兔在CT引导下分别植入4颗125I粒子,粒子按照2×2排列,间隔1 cm。A组植入空仓粒子,B组粒子活度为2.22 MBq,C组为2.96 MBq,D组为3.70 MBq;术前及术后6个月分别取实验兔血行实验室检查（血常规、肝功能、肝纤维化4项）,术后第6个月利用计算机治疗计划系统（TPS）分别勾画B、C、D组120 Gy、140 Gy、160 Gy等剂量曲线图,计算与中心点距离,并取对应辐射区边缘肝脏组织,行病理学检查。结果 所有植入操作均顺利完成。粒子植入前后各组丙氨酸转氨酶（ALT）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ- C）、透明质酸（HA）、APRI指数等指标之间差异有统计学意义（P<0.05）,但是各项指标所处范围均提示不存在肝脏纤维化。所有实验兔肝脏组织大体标本均未见明显肝脏损伤。病理结果显示,随着粒子活度增加,Knodell HAI评分有升高的趋势,但各组评分均小于2分,提示不存在肝脏纤维化。结论 125I粒子植入是一种安全的治疗方式,在本实验剂量及活度范围内,不同剂量、不同活度的125I粒子肝脏植入,不会导致肝脏纤维化。     

氧化应激在布-加综合征肝纤维化大鼠模型中表达及意义

【摘要】 目的 探讨氧化应激（OS）在大鼠布-加综合征（BCS）肝纤维化模型中的表达及意义。方法 SD大鼠180只根据数字表法分为对照组（n=20）、模型组（n=80）和假手术组（n=80）,模型组和假手术组分别均分为1、3、6、12周亚组。对照组大鼠仅常规饲养;模型组于肝后段下腔静脉（IVC）部分结扎构建BCS动物模型;假手术组未结扎IVC,其它过程同模型组。收集大鼠肝组织行苏木精-伊红（HE）、Masson和免疫组化染色,分别检测OS标志物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）与肝纤维化相关因子转化生长因子（TGF）- β1、血小板衍生生长因子（PDGF）- A表达。结果 模型组术后MDA值高于对照组,SOD值低于对照组（P均＜0.05）;术后6周模型组MDA表达最高,SOD表达最低。模型组TGF- β1、PDGF- A和mRNA表达高于对照组、假手术组（P均＜0.05）,术后3周模型组TGF- β1、PDGF- A和mRNA表达最高。模型组TGF- β1、PDGF- A与MDA互为正相关,三者均与SOD负相关。模型组肝纤维化与MDA正相关,与SOD负相关。结论 OS贯穿于BCS整个病程,影响淤血性肝纤维化进展,也许是BCS治疗切入点及未来研究方向。

     

三维打印辅助TIPS治疗肝硬化食管胃底静脉曲张出血

【摘要】 目的 探讨三维打印辅助经颈静脉肝内门体分流术（TIPS）治疗肝硬化食管胃底静脉曲张出血的临床价值。方法 30例肝硬化伴食管胃底静脉曲张出血患者随机分为病例组（n=15）和对照组（n=15）。病例组患者术前接受肝脏CT薄层扫描和门静脉系统CT静脉造影（CTV）,根据扫描数据按1∶1打印肝脏血管模型,进行体外模拟穿刺,并调整RUPS-100型经颈静脉肝内穿刺系统穿刺针角度,制定最佳穿刺路径后行TIPS;对照组患者术前接受肝脏CT薄层扫描和门静脉系统CTV检查,凭经验行TIPS。比较两组术中穿刺针数、时长、穿刺成功率和穿刺相关并发症发生率。结果 两组穿刺成功率均为100%。病例组穿刺针数、时长、穿刺相关并发症发生率均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 三维打印辅助TIPS可减少穿刺次数,缩短穿刺时间,降低穿刺相关并发症发生率。

     

诱导型一氧化氮合酶、血小板衍生生长因子- B和脂多糖在布- 加综合征大鼠模型中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血小板衍生生长因子（PDGF）- B、脂多糖（LPS）在布-加综合征（BCS）大鼠模型中的表达及意义。方法 部分结扎大鼠肝后段下腔静脉构建BCS模型。实验分为对照组（n=20）、模型组（n=20）和假手术组（n=20）,各组又分4亚组（1、3、6、12周组）。收集肝组织作免疫组织化学、苏木精-伊红和Masson染色,检测iNOS、PDGF- B和LPS表达。结果 模型组LPS值均显著高于对照组和假手术组（P=0.001）。模型组iNOS、PDGF- B mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和假手术组（P=0.001）;各亚组iNOS、PDGF- B mRNA和蛋白表达差异均有显著统计学意义（P=0.001）。模型组iNOS与PDGF- B、LPS呈正相关;肝纤维化与LPS呈正相关,与PDGF- B呈负相关。结论 BCS病损与修复是一复杂过程,iNOS、PDGF- B和LPS可能分别在BCS病程不同阶段发挥侧重不同的作用,如何调节它们在纤维化中的平衡,也许是值得进一步研究的方向。
     

射频消融治疗大鼠肝泡状棘球蚴病及病理改变

摘要】 目的 观察大鼠肝泡状棘球蚴病（HAE）射频消融术后3、5、7 d肝脏功能变化情况,及术后7 d的病理形态学改变,探索射频消融治疗大鼠HAE的安全性及疗效。方法 取30只成功接种HAE模型大鼠,分成对照组（假手术组）10只和实验组20只,对照组仅开腹后缝合,实验组在开腹直视下行病灶完全消融,两组均分别于术前及术后3、5、7 d剪尾取血,检测天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）水平。第7天处死全部大鼠,取大鼠肝泡状棘球蚴组织行病理检查,将肝功能测定结果与病理改变进行综合分析。结果 射频消融术后,显微镜下大鼠肝脏消融范围内病灶组织完全坏死。术后第3天,AST、ALT明显升高,第5天逐渐恢复,第7天基本恢复至正常。术后肝功能变化与射频消融毁损区范围有关,并与消融后病理相对应。结论 短期内直视下射频消融治疗HAE技术简便易行,消融病灶液化坏死明显,可以完全消融。可能是治疗早期微小及难治性HAE的新选择。

     

兔VX2门静脉癌栓模型构建

【摘要】 目的 经肠系膜上静脉插管注入VX2肝癌瘤粒或瘤条，构建不同类型兔门静脉癌栓（PVTT）模型。方法 剖腹后直视下穿刺肠系膜上静脉，在兔门静脉主干近端置入经皮肝穿刺胆道造影（PTC）套管。20只健康大白兔随机分成两组，A组（n=10）注入0.1～0.2 cm瘤粒，B组（n=10）注入0.1 cm×1.5～2.0 cm瘤条。术后1周，DSA造影观察癌栓生长情况，处死后作病理学观察。结果 两组实验兔均成功完成门静脉插管，瘤株接种成功率均为100%。术后1周造影显示，A组8只兔见门静脉一级分支癌栓，2只兔见门静脉主干癌栓，10只兔均见肝内弥漫散在的多发转移灶；B组10只兔均见门静脉主干癌栓，肝实质内未见弥漫性转移灶。结论 采用介入技术将不同大小的VX2肿瘤瘤粒或瘤条种植于兔门静脉内，能形成伴有或不伴有肝内弥漫性转移灶的门静脉主干或一级以上分支癌栓模型。
     

经颈静脉肝内门体静脉分流术治疗肝硬化门静脉高压症脾切除断流术后症状复发临床效果

【摘要】 目的 探讨经颈静脉肝内门体静脉分流术（TIPS）治疗肝硬化门静脉高压症脾脏断流术后症状复发的临床效果。方法 回顾性分析2010年1月至2015年12月因肝硬化门静脉高压症接受TIPS术治疗的192例患者临床资料。其中既往接受过脾切除断流术48例（A组）,未接受脾切除断流术144例（B组）。采用Cox回归模型分析影响术后疗效及预后的因素。对比分析两组术后门静脉高压症状缓解情况及临床疗效。结果 TIPS术后192例患者均成功建立肝内门体分流道,随访5～65个月,平均（35.13±7.68）个月。TIPS术前、术后A组血小板计数均高于B组（P＜0.01）,A组术后远期肝功能优于B组（P＜0.05）,A组术后肝性脑病（HE）发生率低于B组（P＜0.05）,两组术后分流道通畅率及生存率差异均无统计学意义（P＞0.05）。肝硬化门静脉高压症脾脏断流术后症状复发患者随访9～64个月,TIPS术后门静脉高压症状可在短期内有效缓解。Cox回归模型分析显示术前Child- Pugh评分（HR=1.653,95%CI=1.721～3.298,P=0.003）、HE（HR=1.023,95%CI=0.908～0.965,P=0.008）及脾切除（HR=0.981,95%CI=1.019～1.584,P=0.041）是影响术后HE的独立影响因素。结论 TIPS术治疗肝硬化门静脉高压症脾切除断流术后症状复发患者效果良好。术前接受脾切除断流术对术后支架分流道通率及生存率无明显影响,术后HE发生率较低,可能获得较好的远期肝功能。