热损伤对肝细胞肝癌细胞增殖及侵袭转移特性影响的实验研究

【摘要】 目的 体外实验评价热损伤对肝细胞肝癌（HCC）细胞增殖、侵袭转移能力及上皮-间质细胞转化（EMT）等特性的影响,探索热消融与HCC复发转移之间的关系。方法 通过体外加热构建McA- RH7777 HCC细胞热损伤模型。CCK- 8法检测热损伤对HCC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期情况。Transwell实验研究热损伤对HCC细胞侵袭能力的影响。荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）和蛋白印迹（Western blot）分析热损伤对HCC细胞侵袭及EMT 相关分子标志物VEGF、MMP- 9、Nm23、E- cadherin、vimentin的mRNA和蛋白表达的影响。结果 McA- RH7777 HCC细胞热处理条件为43.5℃水浴30 min。热处理后2～5 d细胞增殖能力显著高于对照组（P＜0.05）。热处理48 h及72 h后处于G1期细胞比例降低,S＋G2期细胞比例增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,热处理后24 h后HCC细胞侵袭能力差异不明显,而热处理72 h后细胞侵袭能力显著增加（22.3±2.46对14.2±1.82,P＜0.001）。RT- PCR和蛋白印迹分析结果显示,热处理72 h后HCC细胞VEGF、MMP- 9和vimentin表达水平显著增加,E- cadherin表达显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 亚致死量热损伤诱导McA- RH7777 HCC细胞发生EMT并增加其增殖和侵袭转移能力,表现出更高的恶性潜能。

     

磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1过表达对肝细胞癌进展的影响

【摘要】 目的 研究磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1（PIK3R1）表达对肝细胞癌（HCC）进展的影响。 方法 免疫组化和逆转录- 定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC组织中PIK3R1表达。RT- qPCR和免疫印迹检测不同HCC细胞系中PIK3R1 mRNA和蛋白表达,选择MHCC97H、HCCLM3细胞作为模型研究PIK3R1对HCC进展的影响。溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和流式细胞术评价PIK3R1下调对HCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。蛋白印迹分析评估PI3K/蛋白激酶B（Akt）/mTOR信号传导通路的表达变化。 结果 HCC组织中PIK3R1表达与相邻正常组织相比,显著上调。下调PIK3R1表达抑制HCC细胞系增殖、迁移并促进其凋亡。PIK3R1下调还抑制MHCC97H、HCCLM3细胞中p- PI3K、p- Akt和p- mTOR表达。 结论 HCC中PIK3R1表达显著上调,沉默PIK3R1可抑制HCC细胞系增殖、迁移并加速凋亡,其可能是未来HCC治疗的潜在靶点。
     

金纳米棒联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

【摘要】 目的 探讨叶酸偶联二氧化硅包覆的金纳米棒（GNRs@SiO2 FA）联合125I粒子诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其可能的机制,为临床提高肝癌125I粒子组织间植入疗效提供理论依据。方法 将体外培养的肝癌HepG2细胞随机分成空白对照组,单纯金纳米棒组,单纯125I粒子照射组及金纳米棒联合125I粒子照射组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PT PCR检测bax mRNA、bcl 2 mRNA表达水平,免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl 2表达水平及肿瘤细胞核增殖性抗原Ki67表达情况。结果 流式细胞仪检测4组肝癌HepG2细胞凋亡率,单纯金纳米棒组、单纯125I粒子照射组较空白对照组均有升高（P < 0.05）;联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组明显升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。联合组bax mRNA表达明显高于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组,bcl 2 mRNA表达明显低于单纯金纳米棒组与单纯125I粒子照射组。肝癌HepG2细胞bax表达于胞质,bcl 2表达于胞质和胞膜,Ki67表达于胞核,均表现为棕黄色细颗粒状沉淀。4组肝癌HepG2细胞凋亡相关基因bax、bcl 2及增殖核抗原Ki67蛋白表达量比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）;联合组较单纯金纳米棒组和单纯125I粒子照射组Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bcl 2、Ki67蛋白阳性表达率明显降低,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 金纳米棒与125I粒子联合应用能更有效增加肝癌细胞凋亡率,其机制可能是通过增加Bax蛋白的表达,抑制Bcl 2蛋白的表达来实现。
     

miR- 23b直接靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖研究

【摘要】 目的 探讨肝细胞肝癌（HCC）组织微小RNA（miR）- 23b表达与癌症进展的关系,miR- 23b是否通过靶向白细胞介素（IL）- 11影响肝癌细胞增殖。方法 采用免疫组化分析和逆转录-定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC和相邻正常肝组织中IL- 11和IL- 11受体（R）α表达水平,RT- qPCR和蛋白印迹法检测不同HCC细胞株SMMC- 7721、LM3、Hep3B中miR- 23b表达水平,随后检测转染miR- 23b激动剂、拮抗剂和对照组SMMC- 7721细胞中miR- 23b、IL- 11、IL- 11Rα表达水平。采用集落形成和细胞凋亡分析检测转染miR- 23b激动剂和拮抗剂的SMMC- 7721细胞增殖和凋亡。采用荧光素酶测定系统了解IL- 11是否为miR- 23b直接作用靶标。采用集落形成和流式细胞仪检测pcDNA- IL- 11转染miR- 23b激动剂及小干扰RNA（siRNA）转染miR- 23b拮抗剂对SMMC- 7721细胞增殖和凋亡的影响。结果 HCC组织miR- 23b表达与癌症进展呈负相关。与邻近正常肝组织相比,HCC组织miR- 23b表达显著下调,IL- 11、IL- 11Rα表达显著上调,miR- 23b表达与IL- 11、IL- 11Rα表达呈负相关。IL- 11是miR- 23b调节HCC进展直接靶标,miR- 23b可通过靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖并促进其凋亡。结论 miR- 23b可通过调节IL- 11、IL- 11Rα表达抑制肝癌进展,可能直接下调IL- 11表达而在HCC进展中起抑癌作用。miR- 23b可能是未来肝癌治疗的潜在靶点。

     

体外不完全射频消融后肝癌细胞上皮-间质转化相关长链非编码RNA差异表达

【摘要】 目的 研究上皮-间质转化（EMT）相关长链非编码RNA（LncRNA）在不完全射频消融（RFA）肝细胞癌（HCC）病灶的差异表达谱变化。方法 采用Huh7细胞47℃水浴加热,获取体外模拟的不完全RFA HCC细胞。镜下及免疫印迹检测Huh7- H细胞EMT改变,Transwell检测细胞迁移与侵袭能力,CCK- 8检测细胞增殖能力。采用LncPathTM Human EMT Array芯片分析Huh7- H和Huh7差异表达的EMT相关LncRNA,RT- PCR验证。结果 镜下显示Huh7- H呈现EMT形态学改变。免疫印迹检测显示Huh7- H细胞上皮表型标志分子E- cadherin表达降低,间质表型标志分子N- cadherin、vimentin表达增加。Transwell迁移及侵袭实验显示,Huh7- H、Huh7穿膜细胞数分别为（138.0±11.8）和（61.0±5.2）、（82.7±39.4）和（33.3±7.8）,Huh7- H细胞迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）。CCK- 8检测显示Huh7- H细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）。LncPathTM Human EMT Array芯片筛选出3个差异表达LncRNA（P≤0.05,变化倍数≥1.5）,即2条LncRNA（FUNDC2P4、RPL27P7）下调,1条LncRNA（MTND4LP14）上调。RT- PCR验证HUH7- H组FUNDC2P4、RPL27P7、MTND4LP14基因表达丰度分别是HUH- 7组的0.137、0.869、1.037倍。临床标本验证LncRNA FUNDC2P4在癌旁组织表达高于HCC组织,HCC组织高于RFA术后残余HCC组织。结论 筛选出不完全RFA后HCC细胞低表达的EMT相关LncRNA FUNDC2P4,为深入探讨该基因功能及分子机制提供了基础。

     

miR- 29b通过抑制N2a细胞p53凋亡通路减轻氧糖剥夺/再灌注损伤

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 29b过表达是否抑制脑缺血损伤,进一步探讨其潜在机制。方法 体外培养小鼠成神经细胞瘤N2a细胞,构建氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）模型,模拟体外脑缺血损伤。N2a细胞随机分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R＋转染miR- 29b激动剂组、OGD/R＋转染miR- 29b抑制剂组、转染miR- 29b激动剂阴性对照组、转染miR- 29b抑制剂阴性对照组。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测各组miR- 29b表达,溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法、乳酸脱氢酶（LDH）法检测 miR- 29b激动剂和抑制剂对OGD/R诱导细胞活性和凋亡的影响,Hoechst 33258染色法观察N2a细胞形态学特征及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3活性,免疫印迹法定量分析促凋亡蛋白Bax、Bcl- 2及p53表达。结果 经OGD/R处理的N2a细胞中miR- 29b水平明显降低。miR- 29b激动剂显著增加细胞活力,减少LDH漏出率,改善细胞核在凋亡过程中形态学变化,增强OGD/R条件下caspase- 3活性;miR- 29b抑制剂加剧OGD/R诱导的细胞毒性和细胞凋亡。miR- 29b激动剂阻断OGD/R诱导的Bax和p53蛋白表达增加,降低Bcl- 2蛋白表达;miR- 29b抑制剂加剧OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变。p53基因敲除的p53 siRNA降低细胞活力,增加LDH漏出率,逆转miR- 29b激动剂对细胞损伤的改善作用。结论 miR- 29b通过负调控p53依赖性凋亡途径减轻脑缺血性损伤,可能为缺血性脑卒中提供一潜在的治疗靶点。
     

索拉非尼对不同人肝癌细胞株中B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响

【摘要】 目的 研究索拉非尼对不同人肝癌细胞株HepG2、Hep3B、BEL- 7402、BEL- 7404、BEL- 7405、QGY- 7701、 QGY- 7703、SMMC- 7721、MHCC97H、MHCC97L、HCCLM3、HCCLM6中B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响。方法 免疫印迹法和溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法检测索拉非尼在不同人肝癌细胞株中对B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响及索拉非尼对不同人肝癌细胞株的抑制作用。结果 不同人肝癌细胞株中B7- H3和B7- H4蛋白表达较正常人肝细胞（HL- 7702）均显著上调（P＜0.01）。索拉非尼对Hep3B、BEL- 7404、MHCC97H、HCCLM3和HCCLM6肝癌细胞株的细胞毒活性IC50值分别为14.56、9.14、9.46、17.21、9.29 μmol/L。分别以5、10、20 μmol/L剂量索拉非尼处理Hep3B、BEL- 7404、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6后,B7- H3和B7- H4蛋白表达均较对照组显著下调（P＜0.01）。结论 B7- H3和B7- H4蛋白在不同人肝癌细胞株中通常过表达,可影响肿瘤免疫逃逸,可能是未来肝癌防治的一个新靶点。
     

125I粒子持续低剂量率照射和60Co γ射线高剂量率照射对H1299细胞生物学效应的比较研究

【摘要】 目的 探讨125I粒子持续低剂量率（CLDR）内照射和60Co γ射线高剂量率（HDR）外照射对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株H1299的细胞生物学效应。方法 H1299细胞处于指数生长期时分别行125I粒子CLDR照射和60Co γ射线HDR照射；克隆形成实验检测细胞存活分数，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率，Western blot检测Bax、Bcl- 2蛋白表达水平。结果 随着照射剂量增大，125I粒子CLDR照射比60Co γ射线HDR照射抑制H1299细胞增殖效应更明显。照射剂量为4 Gy时125I粒子组H1299细胞G2/M期百分比、细胞凋亡率分别为（21.77±0.31）%、（13.79±0.50）%；同样照射剂量下，60Co照射组H1299细胞G2/M期百分比仅为（18.85±0.99）%，细胞凋亡率仅为（8.79±0.22）%（P＜0.05）。125I粒子CLDR照射明显上调Bax蛋白表达，同时下调Bcl- 2蛋白表达。结论 125I粒子CLDR内照射比60Co γ射线HDR外照射抑制H1299细胞增殖效应更明显。Bcl- 2/Bax蛋白比失衡在125I粒子CLDR照射抗肿瘤效应中可能发挥重要作用。
     

舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究舒洛地特（SDX）对氧化型低密度脂蛋白（ox- LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用及其机制。方法 CCK- 8法确定ox- LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧（ROS）检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用。实时荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、小凹蛋白（caveolin）- 1 mRNA表达,免疫印迹试验检测eNOS、caveolin- 1蛋白表达。Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化eNOS（p- eNOS）蛋白表达。结果 100 μg/ml ox- LDL刺激下, HUVEC细胞活力显著下降（P＜0.01）,加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善（P＜0.01）,ROS产生降低（P＜0.01）。SDX可下调ox- LDL损伤HUVEC后caveolin- 1 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）,上调eNOS mRNA和蛋白、p- eNOS蛋白表达（P＜0.05）,明显改善受损HUVEC迁移能力（P＜0.01）。结论 SDX通过调控caveolin- 1/eNOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞。

     

磷脂酶Cβ1上调表达与肝细胞肝癌增殖和预后相关

【摘要】 目的 探讨磷脂酶Cβ1（PLCβ1）表达是否与肝细胞肝癌（HCC）患者临床病例参数及预后相关。方法 采用组织芯片（TMA）技术和免疫组织化学法检测141例HCC患者肿瘤及癌旁组织PLCβ1表达,分析PLCβ1表达与临床病理特征相关性;集落形成与细胞凋亡实验检测PLCβ1对HCC细胞增殖的影响;Kaplan- Meier法和Cox回归模型多因素分析HCC预后。结果 PLCβ1在肿瘤组织中表达明显高于癌旁组织,并与肿瘤分期密切相关。Kaplan- Meier生存分析表明PLCβ1高表达HCC患者生存率低于低表达患者。Cox多因素分析结果显示PLCβ1高表达是HCC患者预后的独立影响因素。PLCβ1在HCC细胞中过表达,促进HCC细胞增殖并抑制其凋亡。进一步研究发现,细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路激活可能参与PLCβ1介导的HCC细胞生长。结论 PLCβ1促进HCC进展,可作为HCC预后的独立影响因素,有望成为理想的治疗靶点。
     

Unerroric of control of mutual compliance of the efficiency of hydrogen engines of unmanned vehicles in the conditions of mass production

The issues related to the reliability of hydrogen engines of unmanned vehicles and increasing the efficiency of using hydrogen as fuel when using the method of its production during the decomposition of hydrogen-containing molecules of liquid-phase organic compounds in a plasma discharge under the action of intense ultrasonic exposure are considered. Experiments have shown that as a result of decomposition in the acoustoplasma discharge of liquid hydrocarbons, solid-phase carbon-containing products are formed, chemical transformations occur in the liquid phase and hydrogen-containing combustible gas is formed. Hydrogen-containing gas can be used as fuel immediately after synthesis, i.e. it does not require separation, since in addition to hydrogen it contains only impurities of CO₂ and water vapor. The purpose of the study is to formalize the basic conditions for tightening the control of mutual compliance with the efficiency of hydrogen engines of the same series in the conditions of their mass production. Methods of mathematical statistics and hardware-software modeling were used in the study. The term “unerroric of quality mutual compliance control” is introduced to describe a set of hardware and software tools for such control. The principle of in-depth testing of the technical condition of such engines of one series is described in a multidimensional formulation of the quality control problem for three of their operating parameters at once. The conditions for increasing the mutual correspondence of the measured values of such parameters in the conditions of serial production of hydrogen engines are formalized.     

煤焦混烧时粉尘化学成分和比电阻对静电除尘效率的影响

文章介绍了在煤焦混粉燃烧的情况下，粉尘化学成分和粉尘比电阻的变化对静电除尘器效率的影响。     

气门锁夹槽位置检测

气门圆弧形锁夹槽中心至杆端面以及至盘锥面量规线的距离(如图1中L、H). 在过程检验中如用普通量具难以测量,如用仪器测量则速度慢,效率低.为便于生产过程控制,确保工序质量,我们采用锁夹槽定位,用标准件比较测量的专用检具(如图2)进行测量.为保证锁夹槽定位准确以适应不同型号的气门,并防止气门测量时轴向窜动和左右摆动,采用了V型定位叉,使锁夹槽以四点定位,V型叉口的宽度,根据锁夹槽圆弧半径大小确定:约为圆弧的三分之二处(图3,图4).     

小型锅炉烟尘测试时锅炉出力的计算

锅炉烟尘测试时,必须对锅炉出力进行测试。但监测中,许多小型锅炉往往不具备相关的计量装置和仪表,为解决这一问题,文章提出了用烟气量和空气过剩系数来计算锅炉的出力的公式,在实际使用中,该方法简单易行,其结果和实测值具有很好的一致怀。     

关于发展天然气电厂的讨论

世界发电燃料结构在不断的转换过程中。18世纪60年代从薪柴转到煤炭,19世纪到20世纪初大量发展燃煤电厂;20世纪20年代又从煤炭转向石油和天然气,20年代上半叶又大量发展燃油电厂;20世纪末由于天然气生产的发展,天然气因环境影响小,受到工业发达国家的青睐,加速发展天然气电厂。我国70年代初和90年代曾两次发展燃油电厂,由于石油危机和石油价格暴涨而受到制约,不得不实行以煤代油,改造燃油电厂。现在似乎认为燃油电厂不能再搞,但又出现发展燃气电厂的热流,发展燃气电厂确实是当今的世界潮流,但是同当年发展燃油电厂一样,要研究是否符合中国的国情?     

活塞车床设计方案探讨--ECK25异形活塞车床设计分析

本文从新型活塞设计的趋势及其对活塞车床的功能要求，讨论活塞车床的设计方案，并从机床功能、造型和宜人性上进行分析。     

不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响

目前在研究水工隧洞地震响应时只考虑了单向地震激励,忽略了双向地震激励,故不能合理地分析不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响。因此,选取合理的材料参数和模型边界条件,应用ANSYS建立了某水工隧洞的三维有限元模型,对单向地震激励和双向地震激励下的水工隧洞进行了位移分析。结果表明,不同方向的地震激励对水工隧洞的水平位移和竖直位移影响不同,水平位移主要受x方向地震激励影响,竖直位移主要受y方向地震激励影响,并根据单向地震激励和双向地震激励存在的相关性,建立了位移数学关系模型。     

柴油理化性能的分析与质量指标的控制

对柴油的化学组成及物理性质进行了分析,叙述了柴油理化性能与柴油机工作状态的关系,探讨了柴油质量指标的控制措施,为今后的柴油检验和机车检修工作提供了实用的理论依据。     

MgO膨胀剂细度对MgO水化和水泥浆体膨胀的影响

基于《水工混凝土掺用氧化镁技术规范》中的Ⅰ型氧化镁（MgO）,研究了该型MgO膨胀剂（MEA）细度对掺粉煤灰水泥浆体膨胀性能的影响。即采用X射线衍射分析(XRD)及同步热分析（TG DSC）分析了掺MEA水泥浆体中MgO的水化性。结果表明,养护温度相同时,MEA的细度对水泥浆体内MEA中MgO的水化和水泥浆体的膨胀无显著影响,产生的膨胀均能补偿水泥浆体的收缩;MEA的细度可从试验设计采用的45 μm筛筛余15%左右增加到30%左右,这将有利于MEA生产企业的节能降耗。     

中国煤炭地下气化技术的发展

本文综述了煤炭地下汽化技术的国内外发展现状,对我国“长通道、大断面”煤炭地下气化新工艺给予了技术经济评述,并提出了发展煤炭地下汽化技术的政策建议。