体外不完全射频消融后肝癌细胞上皮-间质转化相关长链非编码RNA差异表达

【摘要】 目的 研究上皮-间质转化（EMT）相关长链非编码RNA（LncRNA）在不完全射频消融（RFA）肝细胞癌（HCC）病灶的差异表达谱变化。方法 采用Huh7细胞47℃水浴加热,获取体外模拟的不完全RFA HCC细胞。镜下及免疫印迹检测Huh7- H细胞EMT改变,Transwell检测细胞迁移与侵袭能力,CCK- 8检测细胞增殖能力。采用LncPathTM Human EMT Array芯片分析Huh7- H和Huh7差异表达的EMT相关LncRNA,RT- PCR验证。结果 镜下显示Huh7- H呈现EMT形态学改变。免疫印迹检测显示Huh7- H细胞上皮表型标志分子E- cadherin表达降低,间质表型标志分子N- cadherin、vimentin表达增加。Transwell迁移及侵袭实验显示,Huh7- H、Huh7穿膜细胞数分别为（138.0±11.8）和（61.0±5.2）、（82.7±39.4）和（33.3±7.8）,Huh7- H细胞迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）。CCK- 8检测显示Huh7- H细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）。LncPathTM Human EMT Array芯片筛选出3个差异表达LncRNA（P≤0.05,变化倍数≥1.5）,即2条LncRNA（FUNDC2P4、RPL27P7）下调,1条LncRNA（MTND4LP14）上调。RT- PCR验证HUH7- H组FUNDC2P4、RPL27P7、MTND4LP14基因表达丰度分别是HUH- 7组的0.137、0.869、1.037倍。临床标本验证LncRNA FUNDC2P4在癌旁组织表达高于HCC组织,HCC组织高于RFA术后残余HCC组织。结论 筛选出不完全RFA后HCC细胞低表达的EMT相关LncRNA FUNDC2P4,为深入探讨该基因功能及分子机制提供了基础。

     

SD大鼠McA- RH7777细胞系肝癌模型构建及其特点

【摘要】 目的 研究SD大鼠McA- RH7777细胞系肝细胞肝癌（HCC）模型构建及其相关瘤体生长、检测指标及影像学特点,评价该模型构建方法可行性和模型稳定性。方法 40只SD大鼠随机分为实验组（A组,n=30,肝脏注射种植McA- RH7777细胞0.2 mL）、空白对照组（B组,n=10,肝脏单纯注射等量0.9%氯化钠溶液）。A组大鼠开腹手术后7、14、21 d分别接受MR和增强CT检查并测量瘤体长径。手术后7、14、21 d,分别随机取A、B组10、3只大鼠麻醉,经颈静脉取血检测碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌酐（Crea）、尿素（Urea）;放血法处死大鼠,HE染色和VEGF免疫组化检测肿瘤组织形态。结果 A组27只（90%）大鼠成功成瘤,7、14、21 d时瘤体长径分别为（9.4±2.6） mm、（20.6±4.3） mm、（17.4±1.2） mm;成瘤大鼠CT平扫可见肝脏内低密度病灶,增强CT显示病灶环形强化,MR提示病灶T1加权为低信号,T2加权为高信号,弥散加权成像（DWI）为高信号。两组7、14、21 d血液ALP、ALT、AST、Crea、Urea检测结果比较,差异均无统计学意义（P＜0.05）。HE染色和VEGF免疫组化检测结果均提示肿瘤组织形态。结论 SD大鼠McA- RH7777细胞系HCC模型是可行、稳定、安全的。
     

SD大鼠原位肝癌模型构建及影像学检查

【摘要】 目的 探讨一种成瘤周期短、操作便捷、安全性高、适用于肝癌治疗研究的SD大鼠原位种植型肝癌模型制作方法,同时进行彩色超声、增强CT、MR等3种影像学检查和诊断。方法 20只SD大鼠随机分为McA- RH7777组和N1S1组,每组10只。称重后将McA- RH7777和N1S1肝癌细胞分别注入两组大鼠肝左中叶内,术后连续3 d腹腔注射青霉素（20万U/只）和地塞米松（2.5 mg/只）,以抗感染和免疫抑制治疗。术后7 d,采用彩色超声、增强CT、MR鉴别肝脏肿瘤,记录模型鼠体重,取出肿瘤组织进行形态学观察和病理学检查。结果 术后7 d,McA- RH7777组、N1S1组大鼠分别死亡2只、1只,影像学检查显示成活大鼠全部成瘤,建模成功率分别为80%（8/10）和90%（9/10）,差异无统计学意义（P=0.86）;大鼠体重分别减轻（50.00±24.93） g、（36.44±7.75） g;肿瘤体积分别为（316.43±265.84） mm3、（188.58±137.47） mm3。两组大鼠处死后,尸检结果与影像学检查一致;肉眼观察McA- RH7777肝癌外观呈团块状,N1S1肝癌呈结节状。HE染色显示McA- RH7777肝癌为高分化肝癌,N1S1肝癌为低分化肝癌。结论该方法能成功、高效地构建SD大鼠原位肝癌模型,同时通过不同影像学技术实现诊断和评价,为肿瘤介入治疗研究提供了一种可供选择的实验工具。
     

冷冻消融后残存肿瘤与上皮-间质转化关系的实验研究

【摘要】 目的 探究不完全冷冻消融对前列腺癌RM- 1细胞生物学行为的影响及其产生机制。方法前列腺癌RM- 1细胞放入-20℃冰箱中冷冻5 min,37℃水域复温,待细胞状态恢复后重复冷冻10 min、15 min。培养1 d后镜下观察细胞形态。20只C57/BL小鼠构建荷瘤模型,随机分为对照组与不完全冷冻消融组。不同时间点测量肿瘤大小,14 d时处死小鼠、取肺组织行HE染色,统计肿瘤肺转移枚数。Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力变化,免疫印迹检测相关蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞上清液转化生长因子（TGF）- β分泌量。结果 经不完全冷冻消融的RM- 1细胞排列紊乱,形态发生改变,可有触角结构形成。术后3、7 d不完全冷冻消融组肿瘤体积略小于对照组,但仅术后7 d差异有统计学意义（P=0.019）,术后10、14 d肿瘤体积基本相等。不完全冷冻消融组肿瘤肺转移枚数明显多于对照组（P＜0.001）。Transwell试验显示不完全冷冻消融组细胞迁移及侵袭能力强于对照组（P＜0.05）。免疫印迹检测显示,不完全冷冻消融组与对照组相比,N- cadherin、MMP- 9、vimentin、表达上调,E- cadherin表达下调。ELISA检测结果显示,不完全冷冻消融组细胞上清液中TGF- β分泌增多。结论 不完全冷冻消融可使RM- 1细胞迁移及侵袭能力增强,增加荷瘤小鼠肿瘤肺转移枚数,影响上皮-间质转化相关蛋白表达。

     

M2型丙酮酸激酶同工酶表达对肝细胞癌化疗敏感性的影响

【摘要】 目的 研究M2型丙酮酸激酶同工酶（PKM2）对肝癌细胞HepG2增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨PKM2表达对肝细胞癌（HCC）化疗敏感性的影响。方法 采用蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测正常肝细胞株HL- 7702和肝癌细胞株HepG2中PKM2蛋白和mRNA表达。构建靶向PKM2基因重组质粒（PKM2- siRNA）和对照质粒（siRNA- NC）,并转染至HepG2细胞中,蛋白印迹和qRT- PCR检测PKM2敲低情况。细胞克隆形成、Transwell趋化和TUNEL法分析PKM2表达对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。不同浓度多柔比星（DOX）处理各组细胞后,CCK- 8和TUNEL法检测细胞活性和凋亡。 结果 HepG2细胞株中PKM2蛋白和mRNA表达与HL- 7702相比显著上调[mRNA（1.01±0.01）%对（5.04±0.02）%,蛋白（1.34±0.04）%对（4.03±0.02）%,P＜0.05]。PKM2在PKM2- siRNA转染HepG2细胞中表达在转录和翻译水平显著降低,细胞克隆形成率、细胞侵袭数均低于空白转染组和转染siRNA- NC对照组,细胞凋亡率高于空白转染组和转染siRNA- NC对照组,DOX半抑制浓度（IC50）为7.25 μg/mL,转染siRNA- NC对照组为18.51 μg/mL。随着DOX给药浓度增加,细胞凋亡率显著增加。转染PKM2- siRNA细胞组凋亡数明显高于转染siRNA- NC对照组（P＜0.05）。 结论 PKM2在人肝癌细胞株HepG2中高表达。敲低PKM2表达可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,增强对DOX化疗敏感性。PKM2可能是HCC治疗的潜在靶点。

     

舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究舒洛地特（SDX）对氧化型低密度脂蛋白（ox- LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用及其机制。方法 CCK- 8法确定ox- LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧（ROS）检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用。实时荧光定量-聚合酶链反应（RT- PCR）检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、小凹蛋白（caveolin）- 1 mRNA表达,免疫印迹试验检测eNOS、caveolin- 1蛋白表达。Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化eNOS（p- eNOS）蛋白表达。结果 100 μg/ml ox- LDL刺激下, HUVEC细胞活力显著下降（P＜0.01）,加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善（P＜0.01）,ROS产生降低（P＜0.01）。SDX可下调ox- LDL损伤HUVEC后caveolin- 1 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）,上调eNOS mRNA和蛋白、p- eNOS蛋白表达（P＜0.05）,明显改善受损HUVEC迁移能力（P＜0.01）。结论 SDX通过调控caveolin- 1/eNOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞。

     

化疗栓塞对肝细胞癌MMP－２、TIMP－２表达的影响

目的探讨MMP－２、TIMP－２在肝细胞癌（HCC）中表达的意义及化疗栓塞对其表达的影响。方法４７例经手术病理证实的原发性肝细胞癌,其中２５例单纯手术切除,２２例经导管动脉化疗栓塞（TACE）后行Ⅱ期切除,用免疫组化方法检测两组标本MMP－２、TIMP－２蛋白表达。结果有、无转移或完整包膜的肝细胞癌MMP－２表达差异有统计学意义（χ ２ ＝６．５１８、６．０３８,P＜０．０５）;与单纯手术组相比,TACE组肝细胞癌MMP－２表达明显降低（χ ２ ＝４．８５４,P＜０．０５）、TIMP－２表达明显增高（χ ２ ＝５．１４４,P＜０．０５）;MMP－２与TIMP－２表达存在显著负相关（r＝－０．３９２,P＜０．０５）。结论MMP－２、TIMP－２与HCC的侵袭转移潜能相关,化疗栓塞有助于抑制HCC侵袭与转移潜能。     

miR- 23b直接靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖研究

【摘要】 目的 探讨肝细胞肝癌（HCC）组织微小RNA（miR）- 23b表达与癌症进展的关系,miR- 23b是否通过靶向白细胞介素（IL）- 11影响肝癌细胞增殖。方法 采用免疫组化分析和逆转录-定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测HCC和相邻正常肝组织中IL- 11和IL- 11受体（R）α表达水平,RT- qPCR和蛋白印迹法检测不同HCC细胞株SMMC- 7721、LM3、Hep3B中miR- 23b表达水平,随后检测转染miR- 23b激动剂、拮抗剂和对照组SMMC- 7721细胞中miR- 23b、IL- 11、IL- 11Rα表达水平。采用集落形成和细胞凋亡分析检测转染miR- 23b激动剂和拮抗剂的SMMC- 7721细胞增殖和凋亡。采用荧光素酶测定系统了解IL- 11是否为miR- 23b直接作用靶标。采用集落形成和流式细胞仪检测pcDNA- IL- 11转染miR- 23b激动剂及小干扰RNA（siRNA）转染miR- 23b拮抗剂对SMMC- 7721细胞增殖和凋亡的影响。结果 HCC组织miR- 23b表达与癌症进展呈负相关。与邻近正常肝组织相比,HCC组织miR- 23b表达显著下调,IL- 11、IL- 11Rα表达显著上调,miR- 23b表达与IL- 11、IL- 11Rα表达呈负相关。IL- 11是miR- 23b调节HCC进展直接靶标,miR- 23b可通过靶向IL- 11抑制SMMC- 7721细胞增殖并促进其凋亡。结论 miR- 23b可通过调节IL- 11、IL- 11Rα表达抑制肝癌进展,可能直接下调IL- 11表达而在HCC进展中起抑癌作用。miR- 23b可能是未来肝癌治疗的潜在靶点。

     

薏苡仁三酰甘油联合化疗栓塞对中晚期肝癌患者免疫功能的影响

【摘要】 目的 分析薏苡仁三酰甘油联合肝动脉化疗栓塞（TACE）对中晚期原发性肝癌（HCC）患者AFP、CD4+CD25+调节T（Treg）细胞、细胞免疫功能的影响及临床意义。方法 回顾50例中晚期HCC患者（经影像学检查显示无远处转移）资料,依据治疗方式分为两组:薏苡仁三酰甘油联合TACE治疗25例为研究组,单纯TACE治疗25例为对照组,研究组患者在TACE同时经肝动脉灌注薏苡仁三酰甘油100 ml,术后应用薏苡仁三酰甘油静滴5 d,每日200 ml。分别于治疗前1周、治疗后1个月取外周血,检测AFP、T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、 CD8+ 、CD4+/CD8+、 Treg）水平变化;术后1个月采用增强CT、MRI或PET- CT评价肿瘤坏死程度。结果 两组治疗后AFP均下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）,研究组肿瘤坏死率（57.7±8.2）%较对照组（56.8±8.5）%略高,但差异无统计学意义（P＞0.05）。研究组Treg细胞比例由（8.27±6.65）%下降至（4.22±1.59）%,二者差异具有统计学意义（P＜0.01）;CD3+、CD4+细胞比例及CD4+/CD8+分别由（55.78±13.66）%、（43.98±14.00）%、1.22±0.64上升至（62.29±10.78）%（P＜0.01）、（51.82±16.32）%（P＜0.05）、1.54±0.80（P＜0.05）,CD8+由（45.71±12.94）%下降至（39.70±12.41）%（P＜0.05）。对照组治疗前后比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 薏苡仁三酰甘油联合TACE治疗中晚期肝癌可以降低Treg细胞比例,可能在一定程度上影响患者细胞免疫状态,有可能降低HCC患者TACE术后复发的机会。
     

原发性肝癌患者介入化疗栓塞前肝储备功能测定的临床价值

目的探讨用吲哚氰绿潴留率（ICGR１５）评估原发性肝癌（HCC）患者介入化疗栓塞前肝储备功能的临床价值。方法４３例HCC患者介入化疗栓塞前测定ICGR１５,并根据结果将患者分为３组,同时对所有患者进行Child－Pugh评分。根据介入化疗栓塞后肝脏功能损伤程度及恢复情况将患者分为肝功能轻度损伤组（M组）和肝功能重度损伤组（S组）。分析介入化疗栓塞后３组间ICGR１５改变的差异。结果介入化疗栓塞后３组间ICGR１５变化差异具有统计学意义（P＜０．０５）,介入化疗栓塞前不同的Child－Pugh分级间ICGR１５变化差异有统计学意义（P＜０．０５）。结论与Child－Pugh分级相比,ICGR１５能更准确地评估介入化疗栓塞前肝储备功能。     

Unerroric of control of mutual compliance of the efficiency of hydrogen engines of unmanned vehicles in the conditions of mass production

The issues related to the reliability of hydrogen engines of unmanned vehicles and increasing the efficiency of using hydrogen as fuel when using the method of its production during the decomposition of hydrogen-containing molecules of liquid-phase organic compounds in a plasma discharge under the action of intense ultrasonic exposure are considered. Experiments have shown that as a result of decomposition in the acoustoplasma discharge of liquid hydrocarbons, solid-phase carbon-containing products are formed, chemical transformations occur in the liquid phase and hydrogen-containing combustible gas is formed. Hydrogen-containing gas can be used as fuel immediately after synthesis, i.e. it does not require separation, since in addition to hydrogen it contains only impurities of CO₂ and water vapor. The purpose of the study is to formalize the basic conditions for tightening the control of mutual compliance with the efficiency of hydrogen engines of the same series in the conditions of their mass production. Methods of mathematical statistics and hardware-software modeling were used in the study. The term “unerroric of quality mutual compliance control” is introduced to describe a set of hardware and software tools for such control. The principle of in-depth testing of the technical condition of such engines of one series is described in a multidimensional formulation of the quality control problem for three of their operating parameters at once. The conditions for increasing the mutual correspondence of the measured values of such parameters in the conditions of serial production of hydrogen engines are formalized.     

小型锅炉烟尘测试时锅炉出力的计算

锅炉烟尘测试时,必须对锅炉出力进行测试。但监测中,许多小型锅炉往往不具备相关的计量装置和仪表,为解决这一问题,文章提出了用烟气量和空气过剩系数来计算锅炉的出力的公式,在实际使用中,该方法简单易行,其结果和实测值具有很好的一致怀。     

气门锁夹槽位置检测

气门圆弧形锁夹槽中心至杆端面以及至盘锥面量规线的距离(如图1中L、H). 在过程检验中如用普通量具难以测量,如用仪器测量则速度慢,效率低.为便于生产过程控制,确保工序质量,我们采用锁夹槽定位,用标准件比较测量的专用检具(如图2)进行测量.为保证锁夹槽定位准确以适应不同型号的气门,并防止气门测量时轴向窜动和左右摆动,采用了V型定位叉,使锁夹槽以四点定位,V型叉口的宽度,根据锁夹槽圆弧半径大小确定:约为圆弧的三分之二处(图3,图4).     

煤焦混烧时粉尘化学成分和比电阻对静电除尘效率的影响

文章介绍了在煤焦混粉燃烧的情况下，粉尘化学成分和粉尘比电阻的变化对静电除尘器效率的影响。     

关于发展天然气电厂的讨论

世界发电燃料结构在不断的转换过程中。18世纪60年代从薪柴转到煤炭,19世纪到20世纪初大量发展燃煤电厂;20世纪20年代又从煤炭转向石油和天然气,20年代上半叶又大量发展燃油电厂;20世纪末由于天然气生产的发展,天然气因环境影响小,受到工业发达国家的青睐,加速发展天然气电厂。我国70年代初和90年代曾两次发展燃油电厂,由于石油危机和石油价格暴涨而受到制约,不得不实行以煤代油,改造燃油电厂。现在似乎认为燃油电厂不能再搞,但又出现发展燃气电厂的热流,发展燃气电厂确实是当今的世界潮流,但是同当年发展燃油电厂一样,要研究是否符合中国的国情?     

活塞车床设计方案探讨--ECK25异形活塞车床设计分析

本文从新型活塞设计的趋势及其对活塞车床的功能要求，讨论活塞车床的设计方案，并从机床功能、造型和宜人性上进行分析。     

中国煤炭地下气化技术的发展

本文综述了煤炭地下汽化技术的国内外发展现状,对我国“长通道、大断面”煤炭地下气化新工艺给予了技术经济评述,并提出了发展煤炭地下汽化技术的政策建议。     

MgO膨胀剂细度对MgO水化和水泥浆体膨胀的影响

基于《水工混凝土掺用氧化镁技术规范》中的Ⅰ型氧化镁（MgO）,研究了该型MgO膨胀剂（MEA）细度对掺粉煤灰水泥浆体膨胀性能的影响。即采用X射线衍射分析(XRD)及同步热分析（TG DSC）分析了掺MEA水泥浆体中MgO的水化性。结果表明,养护温度相同时,MEA的细度对水泥浆体内MEA中MgO的水化和水泥浆体的膨胀无显著影响,产生的膨胀均能补偿水泥浆体的收缩;MEA的细度可从试验设计采用的45 μm筛筛余15%左右增加到30%左右,这将有利于MEA生产企业的节能降耗。     

柴油理化性能的分析与质量指标的控制

对柴油的化学组成及物理性质进行了分析,叙述了柴油理化性能与柴油机工作状态的关系,探讨了柴油质量指标的控制措施,为今后的柴油检验和机车检修工作提供了实用的理论依据。     

不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响

目前在研究水工隧洞地震响应时只考虑了单向地震激励,忽略了双向地震激励,故不能合理地分析不同方向地震激励对水工隧洞位移的影响。因此,选取合理的材料参数和模型边界条件,应用ANSYS建立了某水工隧洞的三维有限元模型,对单向地震激励和双向地震激励下的水工隧洞进行了位移分析。结果表明,不同方向的地震激励对水工隧洞的水平位移和竖直位移影响不同,水平位移主要受x方向地震激励影响,竖直位移主要受y方向地震激励影响,并根据单向地震激励和双向地震激励存在的相关性,建立了位移数学关系模型。