人β防御素-3的研究进展

人防御素是一类人体内源性抗微生物阳离子短肽,富含精氨酸,以其广谱高效的抗菌活性和独特的作用机制,成为人体天然免疫体系的重要组成部分。在人防御素家族中,人β防御素-3(HBD-3)具有较强的抗菌活性和更广的抗菌谱,对盐浓度相对不敏感,对宿主细胞毒性低,这些特点使其成为当前研究的热点。本文就其结构特征、生物学功能及其在抗感染方面的应用前景等方面的研究进展作一概述。     

人巨细胞病毒ISCOMs对小鼠细胞免疫应答的调节作用

应用人巨细胞病毒被膜蛋白制备实验型免疫刺激复活物 (ISCOMs)疫苗能诱发细胞免疫反应。对小鼠 1次接种ISCOMs未能诱生明显细胞毒性T细胞 (Tc)及自然杀伤细胞 (NK)细胞活性增加 ,但能使L3T4及其与LyT2的比值增加。第 2次免疫后小鼠Tc及NK细胞活性明显增加。提示该疫苗有可能在预防人巨细胞病毒 (HC MV)原发感染中发挥作用。     

激活素A对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的促进作用

目的探讨激活素A对巨噬细胞吞噬活性的促进作用及其机制。方法分别通过中性红试验、鸡红细胞法和流式细胞术,检测激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞饮活性、吞噬活性以及对MHCⅠ、Ⅱ类分子和CD68表达的影响。结果激活素A可明显促进RAW264.7细胞的吞饮及吞噬活性,对MHCI、II类分子表达没有影响,但可明显上调巨噬细胞表面分子CD68的表达。结论激活素A可促进巨噬细胞系RAW264.7细胞吞噬活性,这与其促进巨噬细胞成熟有关。     

正交试验法优化白花丹醌固体脂质纳米粒的制备工艺

目的:制备白花丹醌固体脂质纳米粒,并采用正交试验法优化其处方工艺.方法:采用乳化-超声分散法制备白花丹醌固体脂质纳米粒,以包封率为评价指标,通过单因素试验,考察了乳化温度、超声功率、大豆卵磷脂和泊洛沙姆188的用量比例等因素对白花丹醌包封率的影响,并以正交试验优选最佳处方工艺.结果:通过单因素与正交试验优选的最佳处方工艺为脂质用量80 mg、乳化剂用量150 mg(比例为1︰5)、乳化温度60℃、超声功率300 W.按照最佳处方工艺制备3批白花丹醌固体脂质纳米粒,平均粒径为168.93 nm,平均包封率为59.74％.结论:最佳处方工艺制备的白花丹醌固体脂质纳米粒具有较好的包封率,工艺稳定可行.     

激活素A对L929细胞活性的调节作用

目的探讨激活素A对小鼠纤维母细胞L929活性的调节作用。方法用不同剂量的激活素A刺激L929细胞,应用还原酶法分析细胞分泌一氧化氮(NO)的水平,RT-PCR法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、纤维连接蛋白(FN)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)mRNA的表达,应用中性红检测细胞的吞饮活性,MTT法检测细胞的增殖活性。结果L929细胞经激活素A刺激后,与对照组细胞比较,分泌NO的水平明显升高,iNOS mRNA及FN mRNA的表达水平也升高,而TIMP mRNA的表达水平无明显改变。激活素A可以促进L929细胞的吞饮活性,但对L929细胞的增殖活性无影响。结论激活素A具有促进L929细胞分泌炎性介质和形成细胞外基质的作用,这可能是其促进炎症发展、诱导组织纤维化的原因。     

还原氧化石墨烯对人原代成纤维细胞的毒性研究

通过氧化石墨烯制备还原氧化石墨烯,采用透射电子显微镜对其进行表征,并将其作用于人原代成纤维细胞,通过CCK8法细胞活性检测和细胞划痕实验研究还原氧化石墨烯对人原代成纤维细胞的毒性.结果表明:与氧化石墨烯相比,还原氧化石墨烯颜色变深,粉末变细,具有明显的薄层和褶皱结构;CCK8法细胞活性检测结果显示5μg·mL-1是还原...     

红曲素衍生物的合成及体外抗癌活性研究

从红曲色素中合成了3个衍生物,对不同的人癌细胞(SH-SY5Y、HepG2、HT-29、BGC-823、AGS和MKN45)的细胞毒性进行了评价。红斑素衍生物O1在受试化合物中显示出最大的抗癌作用。与紫杉醇相比,红斑素衍生物O1对人胃癌细胞SH-SY5Y、BGC-823、AGS和MKN45的生长抑制作用更强,同时,其对正常人胃上皮细胞GES-1的细胞毒性小于紫杉醇。在新的天然抗癌试剂的开发中,红斑素衍生物O1可以作为前体化合物提供。     

低温冷冻对CIK细胞诱导及活性影响的研究

目的 研究低温冷冻对CIK(cytokine-induced killer cells)细胞诱导及活性的影响,方法 用经过程序降温仪冷冻后的脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞,其活性与用新鲜的脐血单个核细胞定向诱导生成的CIK细胞进行比较,并对冷冻过的经21d诱导生成的CIK细胞,与未冻存过的细胞进行活性比较。用乳酸脱氢酶(LDH)分析法分析细胞毒活性,用流式细胞分析仪分析CIK细胞的纯度。结果 冻存后的脐血单个核细胞诱导生成的CIK细胞在扩增能力、纯度和细胞毒性方面与新鲜细胞诱导生成的CIK细胞无明显差异;经过冻存的CIK细胞在纯度和细胞毒性方面与未冻存前也无明显差异。结论 对于CIK细胞的临床应用具有指导意义。     

半连续悬浮细胞及固定化细胞生产紫草素的研究

采用半连续悬浮细胞及固定化细胞生产紫草素,结果表明:前者可明显提高单位细胞的紫草素产量,但在15天后其产量明显下降;后者可在75天内连续稳定地生产并分泌紫草素。采用六种化学试剂,以不同浓度处理固定化细胞,发现只要选择合适的试利与浓度即可改变细胞的透性而不影响其活性,并且产生的紫草素可不断地向胞外分泌,产量可提高2.4倍。应用紫外——可见全波长扫描、TLC 和 HPLC 分析,发现固定化细胞生产的紫草素与天然的紫草素成分基本相同,只是各单体成分的相对含量有一定的差异。     

新型鬼臼毒素拼接抗肿瘤活性分子衍生物的合成及抗肺癌活性研究

研究新型鬼臼毒素拼接抗肿瘤活性分子衍生物的抗肺癌活性及其机制。以鬼臼毒素为原料，丁二酰基为linker,分别与奎宁、喜树碱、1-Boc-3-羟甲基-2-甲基吲哚反应得到3个目标化合物，采用MTT法评价其对人肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)、人非小细胞肺癌细胞株(A549)的抗增殖活性；不同浓度的新型鬼臼毒素拼接抗肿瘤活性分子衍生物2a作用于A549/DDP细胞后，PI染色法检测细胞周期，DAPI染色法检测细胞核状态，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。对A549细胞、A549/DDP细胞具有非常好的细胞毒性，均明显优于阳性对照药(依托泊苷、顺铂),其中化合物2a对A549/DDP细胞的细胞毒性是依托泊苷的80多倍，具有很好的抗耐药作用，显著的阻滞A549/DDP细胞周期的G₀/G₁期，诱导其发生凋亡，抑制迁移能力，且与剂量呈正相关。     

新生牛肝活性肽对小鼠的免疫增强作用

目的观察新生牛肝活性肽对小鼠免疫功能的调节作用。方法采用清洁级ICR小鼠,分别经口给予2.08、4.16和12.48ml/kg3个剂量的新生牛肝活性肽,以生理盐水为对照组,通过淋巴细胞转化试验、小鼠迟发型变态反应试验、血清溶血素测定、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及NK细胞活性测定来评价其对小鼠的免疫增强作用。结果3个剂量组均能促进淋巴细胞增殖,中、高剂量组能增强小鼠迟发型变态反应强度和小鼠血清溶血素作用,提高溶血空斑数及NK细胞活性,但对小鼠的碳廓清能力及腹腔巨噬细胞的吞噬能力无明显影响。结论新生牛肝活性肽能增强小鼠的免疫功能。     

鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用与途径

目的探讨鱼藤素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用及其与线粒体凋亡途径的关系。方法用不同浓度的鱼藤素处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;罗丹明123单染法观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞cyt-c、caspase-3蛋白的表达水平;分光光度法检测细胞caspase-3蛋白活性。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖性;800和1200nmol/L鱼藤素处理组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;鱼藤素处理后,细胞线粒体膜电位降低,细胞浆内cyt-c和caspase-3蛋白的表达水平及caspase-3活性均明显升高。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制、诱导凋亡作用,其作用与线粒体膜电位降低、释放细胞色素c,从而激活caspase-3依赖途径有关。     

百子莲脱水素蛋白对人皮肤细胞损伤的保护作用

应用角质形成细胞(HaCaT)与成纤维细胞(NHSF)建立脱水、光老化及氧化应激模型评价百子莲Y_2SK_2与SK_3型脱水素蛋白对人皮肤细胞在不同胁迫条件下的保护功能。结果表明:0.01～10μmol/L为两种脱水素的安全作用浓度。光老化与氧化应激模型会造成人皮肤细胞发生氧化损伤与细胞凋亡。10μmol/L ApSK_3可将皮肤细胞超低温冻存后细胞活性提升57%～91%。ApSK_3可明显改善皮肤细胞在脱水处理中的胁迫损伤,两种脱水素在光老化与氧化应激模型中对皮肤细胞均有抗氧化保护作用,可显著降低细胞中MDA含量约10%～36%,提升HaCaT细胞的SOD酶活性;ApSK_3可有效抑制皮肤细胞在氧化胁迫下的casepase-3与casepase-8的酶活性,降低细胞程序性死亡事件发生。该研究发现脱水素蛋白在胁迫伤害中对人皮肤细胞具有保护作用,其机制可能与增强细胞抗氧化性以及参与细胞凋亡过程有关。     

无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法的建立

目的建立无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法。方法依据活性PT的ADP核糖基化酶活性,设计并合成一段荧光标记的合成肽Gαi3C20,以其为底物,采用柱前衍生-HPLC法检测无细胞百日咳疫苗的毒性,并对建立的方法进行验证。结果该方法的最低检测限为1 ng;最低定量检测限为8 ng,线性范围为8⁴00 ng/ml,区间内线性系数为0.999;用建立的方法对同一份样品平行测定10次,变异系数小于10%;该方法的回收率为94.9%;联合疫苗中的其他主要成分,如丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)、黏附素(pertactin,PRN)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)对检测结果无明显干扰。结论建立了无细胞百日咳疫苗毒性体外检测方法,该方法有望替代现行的动物检查法,可加强我国百白破联合疫苗的质量控制,提高疫苗的质量。     

含卤素吡唑啉衍生物的合成及其初步抗肿瘤活性研究

设计并合成了8种含卤素的吡唑啉衍生物,经~1HNMR、~(13)CNMR和高分辨质谱验证并用MTT法测试了其在9种细胞中的抗增殖活性。结果表明,所有化合物对细胞的抗增殖活性均大于阳性对照药DDP,且6种化合物对HeLa和SGC-7901两种细胞的抗增殖活性均明显强于阳性对照药Taxol,而2-氯-1-(5-(4-氯苯基)-3-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)乙酮对HepG2细胞的毒性与Taxol细胞的毒性相当。所有化合物对肿瘤细胞和正常细胞均显示选择性抑制活性。此外,吡唑啉环氮原子所连碳链长度为2的系列化合物,其IC50值均小于15μmol/L,而当碳链长度为4时,其IC50值偏大。经初步分析,吡唑啉衍生物的细胞毒性与吡唑啉环氮原子上所连碳链长度有关,碳链越长,活性越差。但B环上的不同卤素取代基对活性没有产生明显影响。     

重组FN多肽CH50促进化疗小鼠巨噬细胞功能的研究

观察重组人纤维结合素多肽CH5 0对化疗小鼠巨噬细胞的影响。结果表明 ,腹腔连续注射CH5 0能防止化疗药物使外周血单核细胞数量和腹腔细胞的数量降低 ,能促进代谢活性、杀瘤活性、细胞因子分泌及脾淋巴细胞的增殖反应。提示CH5 0可提高肿瘤化疗药物的疗效。     

几种天然活性物对黑色素细胞毒性及美白功效的比较

为比较几种天然产物的美白效果及细胞毒性大小，采用小鼠B16黑色素细胞为受试细胞，分别研究了熊果苷及两种不同的海藻多糖对黑色素细胞的细胞毒性、酪氨酸酶活性和黑色素合成的影响。结果表明：熊果苻具有明显的细胞毒件，与之相比，海藻多糖对黑色素细胞活力几乎无影响；3种药物对细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成均有浓度依赖性的抑制作用，且熊果苷的抑制作用高于海藻多糖。     

蛇床子素衍生物的合成和抗肿瘤活性评价

以蛇床子素为结构先导,通过在其7-O位引入4-哌啶基哌啶和1-(2-嘧啶基)哌嗪基团合成了2个新型的蛇床子素衍生物,其结构经1H NMR和MS(ESI)进行了表征。采用MTT法对化合物的抗肿瘤活性进行了评价,结果显示引入取代基可明显提高蛇床子素对HCT116和Hela细胞的抗肿瘤作用。     

免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人的免疫激活作用

目的评估免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人体内免疫作用。方法33位黑色素瘤病人用一种人源化抗神经节苷脂GD-2的单抗与IL-2融合的免疫细胞素进行治疗,按每天0.8、1.6、3.2、4.8、6.0、7.5 mg/m2静脉滴注,连续3 d为一疗程,病情稳定或缓解后,在第5周接受第2疗程治疗。观察病人外周血单核淋巴细胞抗体依赖的细胞毒性、自然杀伤细胞活性、IL-2的体外增殖以及IL-2可溶性受体的变化。结果Hu14.18-IL-2能诱导病人淋巴细胞的吞噬作用,增强外周血中自然杀伤细胞的杀伤能力和数目,使血清中IL-2受体复合体的可溶性受体α链水平上升。结论免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人具有免疫激活作用。     

克菌丹诱导人支气管上皮细胞转化

[方法]16HBE细胞经0.0625～1.0 mg/L剂量的克菌丹染毒,通过观察染毒细胞形态及恶性表型鉴定,检测克菌丹诱导16HBE细胞的转化.[结果]克菌丹转化第30代细胞生长速度增快,对conA凝集敏感性增强,失去贴壁生长依赖性,电镜下可见明显的形态学改变,裸鼠体内形成肿块为鳞状上皮细胞癌.[结论]克菌丹可直接诱导16HBE细胞发生恶性转化,该模型的建立为克菌丹对健康损伤效应研究及其评价奠定了基础.