白头翁皂苷及其酶解产物的分离纯化

从白头翁中提取了皂苷作为酶反应底物,使用菌种Absidiasp.P00r产酶催化底物生成产物,使用硅胶柱层析分离纯化底物和产物。底物经体积比8.5∶1.5和8.3∶1.7的氯仿-甲醇洗脱液洗脱得到4种底物皂苷,得率分别为10.6%、13.8%、8.2%、15.3%,HPLC检测其纯度分别为83.94%、81.99%、80.18%、83.40%;产物经体积比8.5∶1.5的氯仿-甲醇洗脱液洗脱得到3种皂苷,得率分别为15.0%、7.1%、10.3%,HPLC检测其纯度分别为93.45%、91.28%、100.00%。     

单糖基白头翁皂苷的分离纯化

用柱层析法在氯仿和甲醇液中对白头翁皂苷酶解产物进行分离纯化,得到1种单糖基皂苷和皂苷元.经薄层层析和高效液相色谱检测确定：单糖基皂苷为3-O-α-L-阿拉伯糖-3β,23-二烃基-Δ20（29）-羽扇豆烯-28-酸,其得率为5.1%.高效液相色谱检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上.     

白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶(PSGaseⅡ)进行分离纯化,得到电泳纯酶蛋白,对其酶学性质以及该酶对底物的催化反应过程进行了研究。结果表明,该酶蛋白的分子质量为56ku,最适反应pH为4.0,在pH 3.0~7.0酶活力稳定;最适反应温度为40℃,在20~40℃酶活力稳定;金属离子Na~+、K~+、Mg~(2+)对酶反应无显著影响,而Fe~(3+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对其有较强的抑制作用。酶反应动力学参数K_m为19.60mmol/L,v_(max)为21.60mmol/(L·h)。PSGaseⅡ对白头翁皂苷PSⅠ的催化反应过程结果表明反应是分步进行的,PSGaseⅡ以白头翁皂苷PSⅠ为底物,先催化降解为中间产物白头翁皂苷PSⅡ,继续催化反应,最终生成白头翁皂苷A。     

单糖基白头翁皂苷的分离纯化

用柱层析法在氯仿和甲醇液中对白头翁皂苷酶解产物进行分离纯化,得到1种单糖基皂苷和皂苷元。经薄层层析和高效液相色谱检测确定:单糖基皂苷为3-O-α-L-阿拉伯糖-3β,23-二烃基-Δ20(29)-羽扇豆烯-28-酸,其得率为5.1%。高效液相色谱检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

白头翁皂苷酶解产物的分离纯化

白头翁皂苷酶解产物经硅胶柱梯度洗脱分离纯化。通过白头翁皂苷酶解产物的第28碳糖基水解反应、TLC和HPLC实验确定：酶解产物Ⅰ为白头翁皂苷Ⅳ，即3-O-α-L-阿拉伯糖-3β，23-二烃基-△^20(29)-羽扇豆烯-28-酸，其得率为4．08％；酶解产物Ⅱ为白头翁皂苷Ⅴ，即3-O-α-L-阿拉伯糖-3β，23-二烃基-△^20(29)-羽扇豆烯-28-O-糖基酯苷，其得率为44％；没有反应的底物为白头翁皂苷Ⅲ，即3-O-[α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-阿拉伯糖基]-3β，23-二烃基-△^20(29)-羽扇豆烯-28-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)-β-D-葡萄糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖酯苷，其得率为0．5％，酶解产物Ⅲ结构有待进-步测定。HPLC(高效液相色谱)检测结果显示所得纯品纯度可达95％以上。     

白头翁皂苷酶解产物的分离纯化

白头翁皂苷酶解产物经硅胶柱梯度洗脱分离纯化,通过白头翁皂苷酶解产物的第28碳糖基水解反应、TLC和HPLC实验确定:酶解产物Ⅰ为白头翁皂苷Ⅳ,即3 O α L 阿拉伯糖 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 酸,其得率为4.08%;酶解产物Ⅱ为白头翁皂苷Ⅴ,即3 O α L 阿拉伯糖 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 O 糖基酯苷,其得率为44%;没有反应的底物为白头翁皂苷Ⅲ,即3 O [α L 鼠李糖基(1→2) α L 阿拉伯糖基] 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 O [α L 鼠李糖基(1→4) β D 葡萄糖基(1→6)] β D 葡萄糖酯苷,其得率为0.5%,酶解产物Ⅲ结构有待进一步测定。HPLC(高效液相色谱)检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上。     

白头翁皂苷酶解产物促进皮肤纤维芽细胞的胶原蛋白合成

天然存在的白头翁皂苷不利于人体吸收,且具有溶血性。研究了白头翁皂苷的4种低糖基酶解产物对皮肤纤维芽细胞中胶原蛋白合成的影响。结果显示,白头翁皂苷酶解产物明显提高了纤维芽细胞的胶原蛋白含量。经酶转化后的低糖基白头翁皂苷既有利于人体吸收又具有良好的生理活性。人体皮肤试用初步试验证明,含白头翁皂苷酶解产物的化妆品没有副作用。     

白头翁皂苷的分离提纯

酒精溶剂浸提得到较粗的白头翁总皂苷,脱脂后,经大孔树脂层析得到高产、高纯的白头翁总皂苷,得率为9.4%。总皂苷经硅胶柱层析得到无色的、纯度较高的单体皂苷,得率为22.8%。通过薄层层析把纯化的单体皂苷与标准品白头翁皂苷Ⅲ进行对照,分离纯化的单体皂苷与标准品相同,是3 O [α L 鼠李糖基(1→2) α L 阿拉伯糖苷] 3β,23 羟基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 O [α L 鼠李糖基(1→4) β D 葡萄糖基(1→6)] β D 葡萄糖酯苷。     

白头翁皂苷的分离提纯

酒精溶剂浸提得到较粗的白头翁总皂苷，脱脂后，经大孔树脂层析得到高产、高纯的白头翁总皂苷，得率为9．4％。总皂苷经硅胶柱层析得到无色的、纯度较高的单体皂苷，得率为22．8％。通过薄层层析把纯化的单体皂苷与标准品白头翁皂苷Ⅲ进行对照，分离纯化的单体皂苷与标准品相同．是3-O-[α-L-鼠李糖基(1-2)-L-阿拉伯糖苷]-3β，23-羟基-△^20(29)-羽扇豆烯-28-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)-β-D-葡萄糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖酯苷。     

大豆皂甙的酶解及其产物分析

水解大豆皂甙分子上的部分糖基可以生成低糖链、高活性的新皂甙。实验步骤是：采用A．niger848s水解大豆皂甙，生成3组不同的新皂甙；并用1mm厚的层析制备板分离提取各个新皂甙。结果表明最适当的展开剂y（氯仿）：y（甲醇）：y（水）=74：26：10。该酶解过程的有效性已通过薄层层析（TLC）和高效液相色谱（HPLC）分析证实。     

大豆皂甙的酶解及其产物分析

水解大豆皂甙分子上的部分糖基可以生成低糖链、高活性的新皂甙。实验步骤是:采用A.niger848s水解大豆皂甙,生成3组不同的新皂甙;并用1 mm厚的层析制备板分离提取各个新皂甙。结果表明最适当的展开剂V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=74∶26∶10。该酶解过程的有效性已通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析证实。     

高效芘降解细菌的筛选、鉴定及其基本特性研究

以多环芳烃为唯一碳源梯度驯化,从焦化废水底泥中分离筛选出2株疏水性高效芘降解细菌CY4和HY7.通过16SrDNA基因序列分析,初步鉴定CY4为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida),HY7为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri).降解性能试验结果表明,这两株菌可利用底物谱较为广泛,包括水杨酸等多环芳烃转化产物,吲哚等杂化芳烃,多环芳烃和葡萄糖;其中CY4菌对芘的5d降解率达35.40%,HY7菌对芘的5d降解率达36.32%.     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株，检出率依次为副溶血性弧菌46．2％，溶藻弧菌28．5％，创伤弧菌11．3％，拟态弧菌5．9％，河弧菌4．8％，费尼斯弧菌2．2％和海鱼弧菌1．1％，未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同，而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

水产品中致病性弧菌的分离与鉴定

采用传统分析法和仪器法对438份水产品进行了分离与鉴定。结果检出7种致病性弧菌186株,检出率依次为副溶血性弧菌46.2%,溶藻弧菌28.5%,创伤弧菌11.3%,拟态弧菌5.9%,河弧菌4.8%,费尼斯弧菌2.2%和海鱼弧菌1.1%,未检出霍乱弧菌。不同水产品及其不同部位致病性弧菌的污染情况不同,而且传统分析法与仪器法(AMS)具有不同的检出率。     

三七内生菌的分离及其产皂苷发酵条件的优化

从三七的种子和根等部位分离三七内生菌,分离纯化后共获得三七内生菌11株。用薄层层析法对发酵液中皂苷类活性物质进行定性检测,并采用香草醛-硫酸显色法定量分析发酵液中皂苷的含量,筛选出一株可以产皂苷的内生菌株N3。生理生化鉴定和16SrDNA基因序列同源性比对分析结果表明,此株菌为肠杆菌属(Enterobacter)。通过单因素试验,确定内生菌株N3最适发酵条件为以蔗糖为碳源,牛肉膏为氮源,pH 7.0,温度28℃。     

产表面活性剂石油降解菌株的筛选及鉴定

从长期受油污的土壤中分离得到了7株降解石油类菌株,其编号分别为菌2-1、菌7-1、菌1-2、菌5-2、菌7-2、菌油3及菌油5.经形态观察、Biolog鉴定和16SrDNA基因序列分析,可鉴定菌2-1和菌7-1为粘质沙雷氏菌,菌1-2为居植物柔武氏菌,菌5-2、菌油3和菌油5都为克雷伯氏菌属,菌7-2为蜡状芽孢杆菌.其中,菌1-2、菌5-2和菌7-2能使发酵液的表面张力从36.10mN/m降低至20.20mN/m、20.74mN/m、21.78mN/m,表明这些菌所产生的表面活性剂能具有较强的乳化原油的能力,展现了较大的应用前景.