生孢噬纤维菌内切葡聚糖酶的异源表达及CBM6对其酶学性质的影响

内切葡聚糖酶是纤维素酶系的重要组分之一,但大部分内切葡聚糖酶酸碱耐受性较差。为挖掘新型内切葡聚糖酶,本研究从生孢噬纤维菌CX11基因组中克隆了一个内切葡聚糖酶基因Sm＿1350。该基因大小为2 196 bp,编码732个氨基酸,编码蛋白包含一个分泌信号肽、GH5催化结构域、6家族碳水化合物结合模块(CBM6)和一个C末端结构域(CTD)。利用实时荧光定量PCR技术对Sm＿1350在不同碳源条件下的相对表达水平进行了分析,结果表明,Sm＿1350在纤维二糖和滤纸培养基中的表达水平均显著高于在葡萄糖培养基中的表达水平,推测其在CX11降解纤维素过程中发挥一定作用。本研究构建了Sm＿1350及其3种截短突变体,分别为Sm＿1350、Sm＿1350-GH5-CBM6、Sm＿1350-GH5和Sm＿1350-CBM6,并在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明,去除CTD结构域明显提高了目的蛋白的可溶性表达水平。以CMC为底物时,Sm＿1350-GH5-CBM6与Sm＿1350-GH5酶活力分别为(7 000.00±50.00)U/g和(2 542.73±35.03)U/g,表明去除CBM6降低了Sm...     

β-葡萄糖苷酶交联聚合物的制备及酶学性质

对来源于黑布林的β-葡萄糖苷酶进行了交联法制备(CLEAs),并对其酶学性质进行了初步研究。结果发现,当异丙醇为蛋白沉降剂时CLEAs的酶活回收率最高达58.9%;该聚合酶的最适温度为55℃,显示出良好的温度耐受性;CLEAs的Km、Vmax和Ki值分别为5.74 m M、203.4μmol/(min·mg蛋白)和394.03 m M;此外,金属离子Hg2+、Ag+可显著降低CLEAs的酶活。     

产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究

为解决目前工业用α-半乳糖苷酶耗能大、成本高的难题,研究泡菜汁中筛选出产α-半乳糖苷酶的菌株,而后对其进行紫外诱变和亚硝酸钠进一步诱变,并在不同温度和不同p H下测定α-半乳糖苷酶酶活力。结果表明:获得一株酶活高达36.9 U/m L的α-半乳糖苷酶菌株,该菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适p H为5.5。利用4%海藻酸钠做为固定剂对α-半乳糖苷酶进行固定化,可以使酶活保持在70%左右,此α-半乳糖苷酶高产菌株的发现及其酶学特性的研究为α-半乳糖苷酶的工业化应用奠定了基础。     

一种新型血栓溶酶的分离纯化及其性质

中国根霉２３＃的发酵液经离心除菌,硫酸铵分级盐析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤,Ｓｅｐｈｄｅｘ Ｇ－７５凝胶过滤层析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等步骤,得到一种凝胶电泳均一的血栓溶酶。通过等电聚焦测得其等电点ｐＩ＝４．２,该酶在ｐＨ７．０￣８．０较稳定,５０℃保持３０ｍｉｎ血栓溶酶活力无明显变化。     

对甲氧基苯基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖苷的合成

对甲氧基苯基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖苷是重要的有机合成中间体.以D-甘露糖为原料,经乙酰化、选择性脱C1位乙酰基、转化成三氯乙酰亚胺酯、与受体酚偶联和脱保护4步反应立体专一性地合成了对甲氧基苯基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖苷,目标化合物的结构经氢谱和质谱分析得到了确证,方法有效、产率高.     

新型香料α-戊基肉桂腈的合成及表征

以苯甲醛为起始原料,通过三步反应合成了一种新型香料α-戊基肉桂腈,产品总收率达到76%.研究了Na2CO3的用量对α-戊基肉桂醛肟收率的影响,实验结果表明:当碳酸钠与α-戊基肉桂醛的摩尔比为0.9∶1时,α-戊基肉桂醛肟收率最高,达到94%.并用1H NMR及FT-IR对产物的结构进行了表征.     

新型香料α-戊基肉桂腈的合成及表征

以苯甲醛为起始原料，通过三步反应合成了一种新型香料α-戊基肉桂腈，产品总收率达到76％．研究了Na2CO3的用量对α-戊基肉桂醛肟收率的影响，实验结果表明：当碳酸钠与α-戊基肉桂醛的摩尔比为0．9：1时，α-戊基肉桂醛肟收率最高，达到94％．并用^1H NMR及FT-IR对产物的结构进行了表征。     

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰

从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,在一定浓度条件下,化学修饰剂对发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰结果显示:色氨酸是α-半乳糖苷酶活性中心的必需氨基酸,-SH、-COOH和组氨酸对α-半乳糖苷酶的活性有影响,精氨酸、赖氨酸和-S-S-不是α-半乳糖苷酶活性中心的必需基团。邹氏作图法显示α-半乳糖苷酶活性中心的必需色氨酸数目为1。     

L-天冬氨酸α-脱羧酶异源表达和转化条件的优化

为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件.得到最优诱导条件:在OD600达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25℃下诱导表达18h时,酶活力达...     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

一种新型共轭蓝光高分子的合成及表征

苯并呋喃衍生物是一种具有高荧光效率、高热及光稳定性和优良空穴传输能力的蓝光发光材料。采用二(溴甲基)苯与溴代邻羟基苯甲醛发生Knoevenagel反应制备出了二溴代苯并呋喃衍生物,再通过与苯二硼酸发生Suzuki偶合,合成出了一种苯并呋喃基新型蓝光高分子材料(PBF)。利用荧光光谱仪(PL)、紫外光谱仪(UV)、差示扫描量热仪(DSC),研究了其相应的光学和热物理学性质。所得聚合物在膜状态下的PL分析表明,其最大荧光发射波长为444 nm,是一种典型的蓝光发光材料;DSC研究表明,聚合物在50~200℃温度范围内无明显的玻璃化转变和晶体熔融现象,表现出优良的热稳定性。该聚合物易溶于CHCl3、THF等有机溶剂,可旋涂成膜,易于加工,是一种具有应用价值的蓝光发光材料。     

α-1,4葡聚糖麦芽糖苷酶生产菌的筛选及发酵条件

针对淀粉直接转化麦芽糖相对困难、高浓度麦芽糖生产效率低的工业难题,以麦芽糊精作为碳源,获得一株能将麦芽糊精转化为麦芽糖的α-1,4葡聚糖麦芽糖苷酶生产菌。能够转化糊精为麦芽糖并清除葡萄糖的发酵条件为:酵母粉2 g/L,麦芽糊精50 g/L,培养基初始pH值为6.0,发酵温度为35℃。     

α-1,4葡聚糖麦芽糖苷酶生产菌的筛选及发酵条件

针对淀粉直接转化麦芽糖相对困难、高浓度麦芽糖生产效率低的工业难题,以麦芽糊精作为碳源,获得一株能将麦芽糊精转化为麦芽糖的α-1,4葡聚糖麦芽糖苷酶生产菌。能够转化糊精为麦芽糖并清除葡萄糖的发酵条件为:酵母粉2 g/L,麦芽糊精50 g/L,培养基初始pH值为6.0,发酵温度为35℃。     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

新型载体 PEI/SiO2 固定化青霉素酰化酶的酶学性质

以 PEI/SiO2 为复合载体, 制备了固定化青霉素酰化酶. 考察了游离酶与固定化酶催化反应的最适宜 pH 值, 最适宜温度, 固定化酶的连续操作稳定性, 以及二者对金属离子的耐受性能及米氏常数. 实验结果表明: 游离酶和固定化酶催化反应的最适宜 pH 值分别为 9.32 和 7.34, 即固定化酶的最适宜 pH 值向酸性方向发生了移动, 且适宜的 pH 值范围变大. 游离酶催化反应的最适宜温度为 50 ℃, 在较低或较高的温度, 其活性都低;而固定化酶的最适宜温度为 40 ℃, 且温度范围显著变宽, 在 (20～60) ℃范围内, 固定化酶都能保持较高的活性. 固定化酶具有良好的连续操作稳定性, 且比游离酶具有较好的抗金属离子性能;二者的米氏常数分别为 2.38×10-1 mol/L 和 5.44×10-2 mol/L.     

纺织用嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化与酶学性质

首先从Pyrococcus horikoshii中克隆出编码热稳定性的内切纤维素酶基因,以载体pet21a为表达质粒,构建重组质粒pet21a-1171,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys中进行表达,目的基因得到明显的可溶性表达,通过加热变性处理和离心后,重组酶纯度达到80%以上,随后对加热处理后的粗酶液进行简单酶活测定,结果表明,最适反应温度为95℃,与国外文献报道相一致,嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶成功得到重组可溶性表达。     

豆壳过氧化物酶的酶学性质研究

豆壳过氧化物酶(Soybean Hull Peroxidase,SHP)是从大豆豆壳分离得到的一类重要的氧化还原酶,试验通过缓冲溶液抽提法提纯豆壳过氧化物酶,采用愈创木酚法测定酶活力。结果表明,豆壳过氧化物酶是一种耐高温、耐酸碱的酶,其酶作用的最适温度为35℃,最适pH值为5.2,对愈创木酚和过氧化氢的表观Km值分别为1.53 mmol/L和0.36 mmol/L。常见化合物对豆壳过氧化物酶活性的影响也不尽相同,Fe3+对酶的抑制作用明显,而Mg2+对酶反应有一定的激活作用。