高富硒酵母菌株的筛选及其富硒特性分析

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）为出发菌株,NaN3为诱变剂、H2O2为选择压力进行菌株诱变筛选,以总硒及有机硒的含量与产率、硒磷酸合成酶（SPS）活性和蛋白硒含量为评价指标进行菌株富硒特性研究。结果表明,经10 mol/L NaN3处理40 min和2.50%H2O2筛分,从出发菌株中得到两株富硒水平高、富硒能力稳定的菌株HXS-01和HXS-02,经48 h摇瓶富硒培养后,菌株HXS-01和HXS-02总硒和有机硒含量及产率、SPS活性和蛋白硒含量分别比出发菌株高3.4～4.0倍、2.9～3.5倍、0.7～1.1倍和0.9～1.1倍,且以菌株HXS-02的富硒能力更高,其总硒含量和产率分别为2 303.97 μg/g和7 945.19 μg/L,有机硒占总硒的百分比超过97%。利用H2O2作为一种新的选择压力可以有效筛选出具有高SPS活性的富硒酵母菌株。     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1.对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株.通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT.采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化.借助于SAS软件,首先利用Plaekett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值.在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始PH值为4.52.结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26ug/g,硒总含量为10654.62ug/L,为出发菌株的1.62倍.     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1。对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株。通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT。采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化。借助于SAS软件,首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值。在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始pH值为4.52。结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26μg/g,硒总含量为10654.62μg/L,为出发菌株的1.62倍。     

硒浓度梯度驯化结合紫外诱变法选育富硒酵母菌研究

为获得高产富硒酵母,通过硒浓度梯度驯化啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205、戴氏酵母Sac.delbrueckii Fec209、热带假丝酵母Candida tropicalis Fec2011等3株酵母菌,结果显示啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205比其他2株酵母的耐硒性能更强。因此以啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205为原始菌株进行紫外诱变以提高其富硒能力。通过硒抗性筛选,挑取出6株生长快、菌落大的突变菌株单菌落。取发酵培养基中生物量大的3株酵母菌Sac.cerevisiae Y-3,Y-4,Y-1,接种于硒浓度为40μg/ml发酵培养基,结果显示选育出的3株诱变后的啤酒酵母Sac.cerevisiae Y-3,Y-4,Y-1的硒含量分别为932、832、915μg/g,其中最高的Y-3比原始菌株啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205的硒含量增长50.08%、生物量提高了50.97%。     

富硒酵母菌株的选育

以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae L-11为出发菌株,通过DES多次诱变,Na2SeO3和乙硫氨酸抗性平板选择,得到一株高硒和高蛋氨酸含量的菌株L-11-7-2,其蛋氨酸含量达到1.37%,是L-11的169%.对L-11-7-2进行富硒培养,细胞内总硒和硒蛋氨酸分别为2452μg/g和1650μg/g,分别为出发株的280.2%和369.1%.     

产S-腺苷蛋氨酸酵母菌的诱变选育

以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产量达到1.15 g/L,与出发菌株相比提高了130.0%。摇瓶发酵最适条件为30℃、初始p H 5.5。经5 L发酵罐分批补料发酵68 h,S-腺苷蛋氨酸产量达到5.62 g/L。     

绿豆富硒工艺研究

利用绿豆来对硒进行吸收和转化,制备富硒绿豆产品。通过比较绿豆的吸水率及萌芽率,确定了绿豆浸泡的最佳工艺条件为:亚硒酸钠浓度30μg/mL、浸泡时间5h、浸泡水温35℃、浸泡水用量为3倍于绿豆的重量。用荧光分光光度法测定了富硒绿豆产品的总硒和有机硒含量,结果表明富硒绿豆中总硒和有机硒含量随着浸泡时间的延长而升高,随着绿豆的萌芽时间的延长而降低。经过最佳浸泡工艺条件处理后,得到的富硒绿豆产品总硒含量可达到14.86μg/g,其中有机硒含量为14.77μg/g。      

富硒牛奶的生产工艺及其开发

重点讨论硒元素对人类健康的重要性以及富硒牛奶的开发思路与生产工艺等问题。     

富硒保健酸奶的研制

为了将酸乳与有机硒两者结合起来,更好地发挥两者的保健功能,通过L9（33）正交试验,确定富硒乳酸菌制作酸奶生产用发酵剂的最佳发酵条件：发酵温度为42℃,加硒量为7μg.mL-1,接种量为4%。测得发酵剂的活菌数为：9.45×10^8cfu.mL-1,硒的转化率达到84.15%,活力为0.65,符合酸奶发酵剂质量要求。用此发酵剂生产富硒酸奶的最佳工艺条件：富硒发酵剂接种量为7%,加糖量为6%,培养温度为42℃,发酵时间为4.5 h。该酸乳硒含量达0.49μg.mL-1,转化硒为0.4815μg.mL-1,转化率为98.25%。与普通乳酸菌发酵酸乳相比,硒含量提高了约480倍。     

螺旋藻富硒培养及转化的研究

研究了向标准培养液中添加无机硒盐浓度对螺旋藻生长及其转化有机硒的影响，以及克服高无机硒盐浓度影响富硒螺旋藻产率的方法。     

清酒酵母的育种研究

在日本,清酒作为一种酒精饮料已经有1300多年的历史。清酒主要是利用清酒曲上的米曲霉和清酒酿酒酵母对大米进行发酵生产而得。综述了业内近年来对几种酵母诱变菌株的选育,清酒酵母的孢子形成和杂交技术,利用原生质体融合技术对清酒酵母的选育研究,以及清酒酵母的未来选育方向,为其他发酵行业中酿酒酵母的选育提供参考。     

RAPD 在酵母分类鉴定与育种研究中的应用

随机扩增多态性DNA(RAPD)因其简便、快速、灵敏等优点在酵母的分类鉴定,种属间亲缘关系确定及育种等方面有广阔的应用前景。本文综述近年来RAPD技术在酵母相关研究中的应用,并简单讨论该技术目前的研究热点。     

紫外线诱变法进行呼吸缺陷型酵母的选育研究

呼吸缺陷型酵母突变株是一类线粒体DNA发生突变的茵株，具有特殊的酒精代谢能力．因此在发酵产业的发展中起到了重要的作用。本文通过对野生型酵母菌进行紫外诱变，获取了呼吸缺陷型酵母突变体．通过正交试验确定诱变的最佳工艺为：照射剂量为15W、照射距离为22cm、照射时间为2min。本文对6株呼吸缺陷型酵母突变体进行了酒精发酵的酒精产量测定，试验得出野生型酒精产量平均值为9．441g／mL。而呼吸缺陷型酒精产量为9．468g／mL，从而得到了酒精高产菌株。     

极大螺旋藻的硒富集化培养研究

为得到大量含有机硒的极大螺旋藻(Spirulina maxima),以生物量和藻体内硒富集量作为指标,研究不同硒添加量和硒添加方式对极大螺旋藻生长及富硒效果的影响。结果表明,分8d等量(100μL)多次添加100μg/mL Na2SeO3溶液,是最佳添加量和添加方式,可得到生物量为0.903g/L,单位干藻粉有机硒含量为1413.168μg/g的富硒极大螺旋藻。     

L-缬氨酸高产菌诱变育种的研究

以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)L-缬氨酸产生菌XQ-2为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)逐级诱变处理,氨基酸结构类似物α-氨基丁酸(-αAB)、2-噻唑丙氨酸(2-TA)和α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)定向筛选,获得一株L-缬氨酸高产菌XQ-8(Leul(-ABhr2-TAhrAHVhr)。在以135 g/L葡萄糖为碳源和50 g/L硫酸铵为氮源的培养基中摇瓶发酵72 h,产酸达64~66 g/L。     

L-异亮氨酸高产菌育种机理的初步研究

研究了黄色短杆菌生物合成Ｌ－异亮氨酸代谢控制途径，结果表明，选育Ｌ－异亮氨酸高产菌必须首先活化磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ＰＣ）、天冬氨酸激酶（ＡＫ）、高丝氨酸脱氢酶（ＨＤ）、苏氨酸脱氢酶（ＴＤ）和乙酰羟基酸合成酶（ＡＳ）这五个关键酶，并减弱由丙酮酸激酶（ＰＫ）、柠檬酸合成酶（ＣＳ）、天冬氨酸β－脱羧酶（ＡＤ）、二羟吡啶二羟酸合成酶（ＰＳ）和高丝氨酸－Ｏ－转乙酰酶（ＨＴ）引起的五条分支代谢强度，从而强化生物合成Ｌ－异亮氨酸的主代谢流。根据这一育种思想，以黄色短杆菌（ＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍＡＴＣＣ１４０６７）为出发菌株，采用相关的氨基酸结构类似物进行定向育种，有目的地活化ＰＣ、ＡＫ、ＨＤ、ＴＤ和ＡＳ等酶，筛选获得的Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４，产酸达２８～３０ｇ／Ｌ．     

酒醅中酵母的分离及其生理生长特性的研究

通过对酒醅中酵母菌的分离和对其生理、生化特性进行系统的研究,了解酒醅中主要有机酸己酸、丁酸、乙酸、乳酸对酒醅中酵母菌生长发酵影响情况,掌握酒醅中的有机酸影响浓香型大曲酒发酵的规律,进一步提高酿酒生产技术水平。     

新面包酵母的实用性分子育种技术

一种新的面包发酵生产技术,冷藏面团法的实用性研究已取得显著性进展,并都已在国外实际生产中应用。本文着重介绍发酵生产技术中关键的新型实用性面包酵母菌株的育种技术及其特性分析方法,说明了新筛选菌株发酵性能低温敏感性的形成机理以及与这一特征相关连的基因及其克隆表达效果,并进一步阐述了该新发现基因的功能作用。     

发酵型富硒茶酒的研制

以富硒绿茶和脐橙果汁为主要原料,探究发酵型富硒茶酒的最佳加工工艺,拟开发一款兼具绿茶风味和果香味的营养保健型茶酒。在前人对糯米酒发酵条件研究的基础上,采用正交试验的方法探究酵母接种量、果汁添加量、茶水比和发酵时间最佳发酵条件。在此发酵条件下对酵母接种量、果汁添加量、茶水比进行单因素试验和正交优化试验,探讨其对富硒茶酒品质风味的影响,并对成品的各项质量指标进行检测。通过正交优化确定工艺参数:茶水比例1∶50(g/mL),果汁添加量10%,酵母菌接种量0.4%,发酵温度28℃,发酵时间6 d,加糖量19%。经测定,该配方所制得的富硒茶酒的理化指标为酒精度9.6%±0.5%vol、总糖度≤3.0 g/L、总酸度4.5±0.5 g/L、茶多酚含量704.6 mg/kg,卫生指标符合发酵酒国家安全标准。该参数条件下生产的富硒茶酒色泽橙黄明亮,口感清冽甘甜,酒味与茶味协调,有明显果香,冷藏后饮用更佳。