小麦α-醇溶蛋白体外克隆表达及脱酰胺改性对面条机械特性的影响

本研究以pUC57-α-gliadin重组质粒为对象进行同源性分析,构建表达质粒pET-22b-α-gliadin,利用大肠杆 菌（Escherichia coli）体外诱导表达α-醇溶蛋白,以体积分数70%乙醇溶液提纯,利用柠檬酸对α-醇溶蛋白进行脱 酰胺改性,通过傅里叶变换红外光谱、内源性荧光扫描、扫描电子显微镜表征改性后α-醇溶蛋白的结构变化,通过 质地剖面分析（texture profile analysis,TPA）实验探究其对面条质地的影响。结果表明：α-醇溶蛋白柠檬酸脱酰胺 改性后α-螺旋结构含量减少,β-折叠结构含量增加,α-螺旋/β-折叠由1.00降为0.64,说明α-醇溶蛋白的分子柔韧性增 加;α-醇溶蛋白的内源性荧光扫描结果显示λmax发生红移,说明α-醇溶蛋白的内部结构发生伸展,使内部的色氨酸 暴露;扫描电子显微镜观察结果表明α-醇溶蛋白表面呈现光滑均匀的块状;TPA实验发现脱酰胺改性的α-醇溶蛋白 使面条硬度降低,黏着性提高。     

妊娠期大鼠补充苏氨酸锌对仔鼠金属硫蛋白基因MT1表达的影响

为了探讨母体补充苏氨酸锌对子代生长性能、金属硫蛋白（metallothionein,MT1）mRNA表达的影响,实验以苏氨酸锌为受试物,将90 只受孕SD大鼠随机分成5 组,并于妊娠期第6～15天进行灌胃补充不同剂量苏氨酸锌。母鼠分娩后将仔鼠进行常规饲养至1 月龄,测量仔鼠的体质量、身长和尾长,将各组仔鼠断颈处死后取肝脏、肾脏、脾脏和胸骨等组织进行RNA的提取并测定MT1基因相对表达量。结果表明：与空白对照组相比,苏氨酸锌各剂量组仔鼠体质量有显著增加（P＜0.05）。与溶媒对照组和空白对照组相比较,苏氨酸锌各剂量组仔鼠的MT1 mRNA表达量高,且差异显著（P＜0.05）,并且1 000 mg/kg苏氨酸锌处理组各组织中MT1的基因表达量要高于其他组。本结果表明：妊娠期补充苏氨酸锌能显著提高仔鼠MT1 mRNA表达水平,并能在一定程度上增加仔鼠体质量。     

TGase催化玉米醇溶蛋白糖基化改性

利用转谷氨酰胺酶（transglutaminase,TGase）催化玉米醇溶蛋白与氨基葡萄糖盐酸盐（glucosamine hydrochloride,GAH）发生交联反应。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确认玉米醇溶蛋白与GAH发生交联反应。以玉米醇溶蛋白糖基化修饰产物中GAH导入量为指标,优化糖基化反应条件,并对玉米醇溶蛋白糖基化修饰样品的溶解性进行了表征。结果表明,最适的糖基化反应条件为底物质量浓度5 g/100 mL、TGase添加量50 U/g（以玉米醇溶蛋白计）、玉米醇溶蛋白中酰基供体与GAH中的酰基受体物质的量比1∶6、初始pH 8.0、反应温度44 ℃、反应时间7 h;此反应条件下,玉米醇溶蛋白中GAH的最大导入量为（11.34±0.21） mg/g（以玉米醇溶蛋白计）。与玉米醇溶蛋白相比,玉米醇溶蛋白交联样品与糖基化修饰样品的溶解性均得到提高,玉米醇溶蛋白糖基化修饰样品的溶解性最高。     

加工条件对醇法大豆浓缩蛋白溶解性及结构的影响

为探究工业化生产的醇法大豆浓缩蛋白溶解性较差的原因,研究了醇法加工条件(乙醇体积分数、浸提温度、干燥温度)对大豆浓缩蛋白溶解性及结构的影响。结果表明：大豆浓缩蛋白的溶解度随着乙醇体积分数的增大呈现先降低后升高的趋势,乙醇体积分数为65%时溶解度最低;浸提温度和干燥温度的升高会导致溶解度大幅降低;随着浸提液中乙醇体积分数的增大,大豆浓缩蛋白表面疏水性、分子间的疏水相互作用、二硫键含量及粒径均呈现先增加后降低的趋势,在乙醇体积分数为65%时最大,而α-螺旋含量增加,β-折叠含量整体先增加后降低,无规卷曲含量降低;随着浸提温度和干燥温度的升高,大豆浓缩蛋白分子间氢键作用力降低,而表面疏水性、分子间疏水相互作用、二硫键含量和粒径增大,α-螺旋向β-折叠及无规卷曲转变,蛋白质结构趋于无序。综上,工业化醇法加工工艺(60%～70%乙醇体积分数、50～60℃浸提温度、60～70℃干燥温度)所引发的大豆浓缩蛋白表面疏水性的增大、分子间聚集程度的增加等导致了其溶解度的降低,不利于后期应用。     

黑米通过上调高脂高胆固醇膳食饲喂饲雌性小鼠小肠ABCG5/8和ABCA1表达降低胆固醇水平

研究黑米对高脂高胆固醇膳食饲喂雌性小鼠血脂水平及小肠胆固醇代谢相关基因调控的影响。将48只雌性C57BL/6J小鼠随机分成高脂对照组和三个实验组(高脂饲料中添加白米和黑米代替玉米淀粉),测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,气相色谱法检测肝脏中胆固醇含量,Real-time PCR法分析调控小肠胆固醇代谢相关基因HMG-Co A-R、MTP、ABCG5/8、ABCA1、NPC1L1等的m RNA表达水平。与高脂组相比,黑米组血清中TC和TG含量较对照组极显著降低,但白米组血清中TC、TG、HDL-C含量较对照组无统计学差异。与高脂组相比,白米组小鼠肝脏中胆固醇含量无显著变化,黑米低剂量组显著降低(P0.05),黑米高剂量组极显著降低(P0.01)。Real-time PCR结果显示,与高脂组相比,黑米添加组ABCG5、ABCA1 m RNA表达水平均显著上调(P0.01),MTP m RNA表达水平均显著下调(P0.05);黑米低剂量组ABCG8 m RNA表达水平显著升高(P0.05),高剂量组上调极显著(P0.01);黑米低剂量组NPC1L1 m RNA表达水平降低(P0.05),高剂量组下调极显著(P0.01);黑米高剂量组HMG-Co A-Rm RNA表达水平显著降低(P0.05)。结果表明,黑米对高脂高胆固醇膳食饲喂小鼠胆固醇代谢平衡的调节,可能是通过增加小肠中胆固醇排泄并抑制固醇的吸收实现的。     

醇法大豆浓缩蛋白改性工艺条件的研究

主要对醇法大豆浓缩蛋白改性工艺条件进行了研究,探讨了改性过程中加水温度、溶液pH、超声时间对改性工艺的影响。通过正交实验得出最佳工艺条件为:将醇法大豆浓缩蛋白加100℃水溶解,调pH为10,超声时间30 m in,在此条件下生产的产品水溶性蛋白质可达57.2%,氮溶解指数(NSI)为81.5%。     

Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达及活性研究

研究了Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达条件及与甘露糖的结合活性。将构建的巴氏酵母Lg-FLO1基因N端序列的重组表达载体p ETFL1进行双酶切验证,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过菌落PCR鉴定阳性转化子,并进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测不同诱导条件对目的蛋白N-Lg-Flo1表达的影响,并对目的蛋白进行变性溶解、纯化、复性及活性测定。结果表明,酶切证实重组表达载体含有N-Lg-FLO1基因片段;在LB培养基中的表达量高于TB培养基;和IPTG相比,乳糖诱导同样可以表达含量较高的目的蛋白且成本较低。以乳糖作为诱导剂,终质量浓度为0. 2 g/L,诱导温度37℃,诱导6 h,目的蛋白的表达量均高于30%;荧光光谱分析表明,复性后的N-Lg-Flo1蛋白具有与甘露糖结合的活性。该研究为大规模生产絮凝蛋白并以此为原料制备糖的特异性吸附剂奠定了基础。     

齐口裂腹鱼肌肉品质及其PPARγ、PGC-1α相对表达量分析

通过对不同质量的齐口裂腹鱼肌肉品质的相关指标进行分析,并采用实时荧光定量PCR技术对其组织中过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活子1α（PGC-1α）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的相对表达量开展研究。结果表明:不同质量的齐口裂腹鱼肌肉中蛋白质、粗脂肪含量存在显著性差异（p<0.05）,其水分、灰分含量差异不显著（p>0.05）;肌肉的pH没有差异,大鱼的失水率高于中鱼与小鱼,小鱼与中鱼肌肉中氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量均高于大鱼;中、小鱼的肌肉品质高于大鱼。在不同质量齐口裂腹鱼的头肾、肝脏、肌肉中,PPARγ的相对表达量均存在显著性差异（p<0.05）;PGC-1α在头肾中相对表达量存在显著性差异（p<0.05）,在肝脏、肌肉中差异不显著（p>0.05）;PPARγ、PGC-1α在组织中的相对表达量与肌肉中粗脂肪含量有一定关联。      

齐口裂腹鱼肌肉品质及其PPARγ、PGC-1α相对表达量分析

通过对不同质量的齐口裂腹鱼肌肉品质的相关指标进行分析,并采用实时荧光定量PCR技术对其组织中过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活子1α(PGC-1α)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的相对表达量开展研究。结果表明:不同质量的齐口裂腹鱼肌肉中蛋白质、粗脂肪含量存在显著性差异(p0.05),其水分、灰分含量差异不显著(p0.05);肌肉的pH没有差异,大鱼的失水率高于中鱼与小鱼,小鱼与中鱼肌肉中氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量均高于大鱼;中、小鱼的肌肉品质高于大鱼。在不同质量齐口裂腹鱼的头肾、肝脏、肌肉中,PPARγ的相对表达量均存在显著性差异(p0.05);PGC-1α在头肾中相对表达量存在显著性差异(p0.05),在肝脏、肌肉中差异不显著(p0.05);PPARγ、PGC-1α在组织中的相对表达量与肌肉中粗脂肪含量有一定关联。     

醇提大豆浓缩蛋白生产技术工业化问题探讨

基于食品对大豆蛋白质的功能性要求和目前商业市场的实践情况,本文分析了大豆浓缩蛋白的最佳加工工艺,探讨了醇提大豆浓缩蛋白工业化生产的技术方案,包括生产工艺、设备选型和控制产品质量技术措施。同时本文提出功能性大豆浓缩蛋白能够弥补醇法大豆浓缩蛋白不足,从而拓宽了大豆浓缩蛋白的应用范围。     

大豆分离蛋白-甜菊糖苷复合稳定剂制备纳米乳液

为适应食品工业对食品配料天然绿色、营养健康的追求,采用大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）-甜菊糖苷（steviol glycosides,STE）复合体系作为稳定剂制备纳米乳液,研究稳定剂组成、微射流参数、油相质量分数等对纳米乳液形成的影响,并对乳液稳定性及微结构进行表征。结果表明：油相质量分数为10%时,单独SPI（1%）制备的乳液粒度较大（d43为0.548 μm）,稳定性差。添加0.25%～1% STE时,乳液粒度分布更均匀,粒度变小;当STE质量分数为0.5%和1%时,乳液粒度小于200 nm,且具备较好的贮存稳定性（30 d）。添加2% STE会导致乳滴表面蛋白被完全取代,从而弱化乳液的长期稳定性。微射流压力、均质次数及STE质量分数的增加均可降低乳液粒度,但油相质量分数的增加可增加乳液粒度。进一步将纳米乳液进行冷冻干燥处理,可制得结构化良好且高油含量的油粉;相对于单独SPI稳定的结构化乳液,SPI-STE纳米乳液制得的油粉结构更为完整,表面黏性小。     

黑米通过上调小肠ABCG5/8和ABCA1基因表达降低胆固醇水平

以高脂膳食饲喂致高胆固醇小鼠为动物模型,研究黑米对小鼠血脂水平及小肠胆固醇代谢相关基因调控的影响。将48 只雄性C57BL/6J小鼠随机分成高脂对照组和3 个实验组（白米组、黑米低剂量组、黑米高剂量组）,测定血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）及高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平,气相色谱法检测肝脏中胆固醇含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）分析调控小肠胆固醇合成、吸收、转化及排泄基因HMG-CoA-R、MTP、ABCG5/8、ABCA1、NPC1L1等的mRNA表达水平。结果表明：与高脂对照组相比,白米组小鼠血清中TC、TG、HDL-C含量无统计学差异,但黑米低、高剂量组小鼠血清中TC和TG含量降低,且HDL-C含量显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。与高脂对照组相比,白米组小鼠肝脏中胆固醇含量无显著变化,黑米低剂量组显著降低（P＜0.05）,黑米高剂量组极显著降低（P＜0.01）。Real-time PCR结果显示,与高脂对照组相比,黑米低、高剂量组ABCG5/8、ABCA1 mRNA表达水平均极显著上调（P＜0.01）;黑米低剂量组NPC1L1 mRNA表达水平降低（P＜0.05）,黑米高剂量组极显著降低（P＜0.01）。黑米对高脂膳食饲喂致高胆固醇小鼠胆固醇代谢平衡的调节可能是通过增加小肠中胆固醇的排泄并抑制其吸收实现的。     

Separation of Steviol Glycosides by Hydrophilic Liquid Interaction Chromatography

Stevia rebaudiana Bertoni contains several steviol glycosides with sweet flavour. They all are sweeter than sucrose (up to factor 450). The various steviol glycosides are difficult to separate by reversed-phase chromatography. In this paper, five different hydrophilic liquid interaction chromatography columns are characterized using isocratic elution (5–20% water in acetonitrile with buffer or formic acid). Separation of the steviol glycosides is possible with all but one of the tested columns, but the robustness of the separation against changes of buffer concentration and percentage of water differ. Aqueous percentage and ion strength of the eluent are the main factors to be optimized in method development.     

高效液相色谱法检测运动饮料中甜菊糖苷

建立一种用高效液相色谱-PDA检测法测定运动饮料中甜菊糖苷的检测方法。样品前处理采用硅胶固相萃取小柱进行富集和净化,氮气吹干后用流动相复溶上机检测。采用Waters RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,以乙腈∶水=30∶70(体积比)作为流动相,用PDA检测器检测,外标法峰面积定量。结果表明,9种甜菊糖苷组分在20.0μg/m L~200.00μg/m L浓度范围内线性良好,相关系数r2为0.991~0.999,检出限在1.0μg/m L~3.0μg/m L,定量限为3.0μg/m L~9.0μg/m L,加标回收率达到81.4%~90.5%。     

甜菊糖苷类物质的功能性研究进展

甜菊糖苷是一类从甜叶菊叶子中提取的高甜度、低热值的甜味剂,是一种非常理想的蔗糖替代品。毒理学实验表明,甜菊糖苷不具有致畸、致癌和致突变毒性。除了作为优良的甜味剂应用在食品、饮料中,甜菊糖苷还表现出许多功能活性,如降血压、降血糖、抗肿瘤、抑菌、抗腹泻、增溶等。由于甜菊糖苷的结构可调性,可以对其进行定向修饰,得到更多具有潜在应用价值的衍生物,这方面的研究对于甜菊糖苷的深入开发利用具有重要意义,本文将围绕近几年有关甜菊糖苷功能性的研究展开讨论。     

蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏LDLR、ABCG1及ABCA1基因表达的影响

目的：研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR）、三磷酸腺苷结合盒转运体G1（ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1）及ABCA1基因表达的影响。 方法：选择2 月龄雄性Wistar大鼠60 只,将大鼠随机分为6 组,分别为基础饲料对照组（ND,1.2 g/（kg·d mb） 生理盐水灌胃）、高脂模型对照组（HFD,1.2 g/（kg·d mb）生理盐水灌胃）、阳性对照组（10 mg/（kg·d mb） 辛伐他汀片灌胃）,蓝靛果花色苷低、中、高剂量组（HFD＋L、HFD＋M、HFD＋H,分别给予4.0、40.0、 120.0 mg/（kg·d mb）的花色苷灌胃）,持续28 d。实验结束后,测定血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、 甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密 度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、载脂蛋白A（apolipoprotein A,Apo-A）及载 脂蛋白B（Apo-B）等血脂指标水平。取大鼠肝脏,利用实时荧光定量聚合酶链式反应测定大鼠肝脏组织中 LDLR、ABCG1、ABCA1 mRNA表达量,Western blot检测LDLR蛋白表达水平。结果：蓝靛果花色苷干预后, 与HFD组相比,花色苷均能不同程度地降低高血脂大鼠血清中TC、TG、LDL-C、Apo-B的含量（P＜0.05或 P＜0.01）,显著升高HDL-C及Apo-A的含量（P＜0.05或P＜0.01）。花色苷各剂量组LDLR蛋白和mRNA水平均增 高,与HFD组比较差异有显著性（P＜0.05）,ABCA1 mRNA和ABCG1 mRNA的表达水平也高于HFD组,尤其是花 色苷中、高剂量组差异明显（P＜0.05）。结论：40.0 mg/（kg·d mb）蓝靛果花色苷具有明显的调节血脂作用,其 作用机制可能是通过上调肝脏LDLR和ABC家族基因的表达,进而调节胆固醇逆转运过程。     

甜菊糖苷改善根皮素溶解性及体外释放的研究

为了提高根皮素(PT)在水中的溶解性,利用甜菊糖苷(STE)可自组装形成胶束的特点,建立甜菊糖苷-根皮素胶束增溶体系(STE-PT MC).通过体外模拟释放试验,对PT增溶前、后的释放度及释放动力学进行研究.结果表明,STE对PT产生良好的增溶效果,在最佳工艺条件下,1.03 g STE可将30 mg PT完全溶解于1...     

通过计算方法预测甜菊糖苷的甜味和苦味

通过计算模拟软件,对一系列甜菊糖苷与人体味觉受体间的相互作用进行了研究。建立了人体甜味受体(hT1R2,hT1R3)和苦味受体(hT2R4)的同源模型,通过Ramachandran图和其他质量参数来验证模型的可靠性。将味觉受体模型与天然甜菊糖苷分子进行对接,分析了对接过程中的能量变化和相互作用,发现对接结果与甜菊糖苷的甜味与苦味明显相关,可通过该计算方法来预测甜菊糖苷的风味。此外,味觉受体的空间位阻是导致甜菊糖苷C-13和C-19位上的葡萄糖基数量改变对其风味造成不同影响的主要原因。预测了数种改性甜菊糖苷的风味并挑选出可能的优质甜味剂。     

甜菊糖苷单体制备研究进展

甜菊糖是继蔗糖和甜菜糖之外的世界第三糖源,是从甜叶菊中提取分离得到的低热量、高甜度的糖苷类化合物。甜菊糖大约含有80%以上的甜菊糖苷,甜菊糖苷组分复杂,包含多种单体,目前已知的有40多种,常见的有莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷F、莱鲍迪苷M、杜克苷A、甜菊苷、甜茶苷、甜菊双糖苷等。甜菊糖苷单体用途多种多样,可单独作为食品添加剂,生理活性成分及单体转化的媒介等,是具有良好发展前景的物质,实现甜菊糖苷单体分离纯化及制备,是近几年的研究热点之一。因此对近几年国内外甜菊糖苷利用化学法和生物合成与转化法等相关的途径实现单体制备进行论述,为甜菊糖苷单体实现大规模生产应用提供理论依据和支撑。     

近红外光谱法定量测定甜菊糖苷的研究

目的:研究一种基于近红外(NIR)透射光谱法的甜菊糖有效成分快速测定新方法.方法:采用NIRS分析技术,对不同批次的甜菊糖苷水溶液采集透射光谱,选取不同的预处理方法和波段范围对光谱数据进行有效的信息提取与分析,确定最佳的回归因子数以及用于定量分析的最优波段范围.采用偏最小二乘法(PLS)建立甜菊糖苷水溶液中有效成分含量的定量分析模型.结果:甜菊糖溶液中甜菊双糖甙(steviolbioside,SX)、杜克甙A(dulcoside A,DA)、甜菊糖甙(stevioside,STV)、瑞鲍迪甙C(rebaidioside C,RC)、甜菊糖A3甙(Rebaudioside A,A3)和甜菊糖总苷(steviosides,STS)的PLS模型相关系数(R2)分别为0.9271、0.9355、0.9759、0.9706、0.9500、0.9870.预测均方根误差(RMSEP)分别为0.0004、0.0015、0.0150、0.0043、0.0170、0.0199.结论:所建方法操作简便、快速、准确、无损,具有较好的定性和定量分析性能,可用于甜菊糖苷溶液中各有效成分的快速检测.