桦褐孔菌子实体多酚的分离及抗氧化性的研究

桦褐孔菌子实体中含有大量的活性多酚,为了对多酚进行有效分离,采用甲醇、乙醇和水作为提取溶剂,通过测定多酚含量和DPPH自由基清除率来比较不同溶剂的提取效率,并运用Sephadex LH-20柱色谱对多酚提取液进行分离。结果表明:在60℃条件下,以甲醇为溶剂并结合超声破碎得到的提取液中多酚含量和DPPH自由基清除率最高,同时Sephadex LH-20柱色谱对乙酸乙酯层和正丁醇层多酚实现了有效初步分离,并得出多酚的组成与抗氧化活性紧密关联。多酚的初步分离为进一步深入研究多酚组分提供了基础。     

桦褐孔菌子实体三萜单体的分离及鉴定

利用超声破壁处理,氯仿为溶剂对桦褐孔菌子实体中三萜单体进行提取。通过薄层层析色谱(TLC)检测,用1%香草醛-浓硫酸试剂作为显色剂,反复用硅胶柱色谱对氯仿提取物进行梯度洗脱,得到两种羊毛脂烷型的三萜化合物,即化合物1(121mg)和化合物2(67mg)。采用HPLC的方法在206nm处分析其纯度,同时红外光谱(IR)分析两种化合物的特征,以及核磁共振(1 H-NMR和13 C-NMR)技术对两种羊毛脂烷型的三萜化合物进行结构鉴定。对比已知标准谱图,最终确定其结构为羊毛甾醇(Lanosterol)和栓菌酸(Trametenolic acid)。     

桦褐孔菌多酚的液体深层制备及抗氧化活性研究

用液体深层发酵方式培养并提取了不同时间的桦褐孔茵胞内外多酚,福林-酚法测定桦褐孔茵胞内外多酚的含量,通过清除DPPH·自由基和羟基自由基测定桦褐孔茵多酚的抗氧化活性,液质联用技术测定了胞内外多酚的基本组成和含量.结果表明,桦褐孔茵胞内外多酚最大含量分别为12.47 mg GAE/g和34.7 mg GAE/L,DPPH·自由基的最大清除率分别为52.5％和54.6％,羟基自由基的清除率为80.5％和66.2％,液质联用检测结果显示胞内外多酚含量分别为96.4％和86.3％,且种类和单一组分含量差异显著.     

珊瑚菌子实体多糖结构鉴定与抗氧化活性

从珊瑚菌子实体中分离纯化得到多糖组分RFPF2A,并研究其化学结构特征和抗氧化活性。采用DEAE sepharose fast flow离子柱、Sephacryl G-25和S-400 High-resolution凝胶柱层析进行分离纯化,经红外光谱、高效液相色谱、气相色谱-质谱联用和核磁共振等谱图分析确定多糖的结构组成,并测定RFPF2A的羟基自由基清除能力、超氧阴离子清除能力、亚铁离子金属螯合能力和总还原力。结果表明:RFPF2A分子质量为9.87×10~2kDa,由β-(1,6)-D-吡喃葡萄糖、α-(1,2,6)-D-吡喃半乳糖和β-(1,4)-D-吡喃甘露糖组合而成,摩尔比为n(葡萄糖)∶n(半乳糖)∶n(甘露糖)=1∶0.15∶0.26。当多糖质量浓度为5 mg/mL时,羟基自由基的清除能力达60%,超氧阴离子清除能力达74.47%,亚铁离子金属螯合能力达61.82%,还原力吸光值达1.506。因此,RFPF2A多糖具有显著的抗氧化活性,并表现出一定的质量浓度依赖性。     

桦褐孔菌醇提物的萃取分离及其抗氧化活性研究

采用不同极性有机溶剂对桦褐孔菌乙醇粗提取物进行液·液萃取,将粗提物划分为3个不同极性部位(乙酸乙酯相、正丁醇相、水相);选用总还原力、DPPH自由基清除率、FRAP法及β胡萝卜素褪色法对粗提物和萃取物进行抗氧化活性评价.结果表明:桦褐孔菌具有较好的抗氧化活性,乙酸乙酯相的总还原力、FRAP值、DPPH自由基清除率显著高fBHT和其他部位(户相似文献   

桦褐孔菌胞外多糖级份的化学性质和抗氧化活性研究

研究桦褐孔茵发酵胞外多糖的抗氧化活性。采用液体深层发酵培养桦褐孔菌,利用水溶醇沉法从发酵液中分离提取胞外多糖EPS,中性蛋白酶＋Sevage试剂法对EPS去除蛋白分离得到多糖DEPS。DEPS经DEAE-52阴离子交换色谱和SephadexG-200凝胶色谱柱层析后得到三个多糖级份,其中,具有较高蛋白质和甘露糖含量以及具有较低分子量的级份DEPS2和DEPS3的抗氧化活性较好。表明桦褐孔菌胞外多糖的抗氧化活性与其蛋白质、甘露糖含量及分子量有关。     

有机溶剂对桦褐孔菌液体深层发酵多酚和多糖的产生与活性的影响

在培养基中添加1g/L的不同有机溶剂(丙酮、甲醇、氯仿、甲苯和乙醇),讨论了有机溶剂对桦褐孔菌液体深层发酵多酚和多糖的产生的影响,并通过测定多酚的DPPH自由基清除率来探究有机溶剂对多酚抗氧化活性的影响。研究结果证明,添加有丙酮、甲苯与乙醇的培养基能显著提高桦褐孔菌生物量,比对照组提高2.68%、2.27%和3.98%;以胞内外多酚含量和活性为指标,丙酮有机溶剂,胞内、胞外乙酸乙酯层和胞外正丁醇层多酚的产量分别为对照组的2.5、5.3和1.7倍,相对应的活性分别是对照组的1.3、1.3和3.0倍;以胞内外多糖含量为指标,有机溶剂均对胞外多糖有抑制作用,乙醇为最佳的添加剂使胞内多糖(在95℃、121℃下提取)的增加率达到9.67%和15.20%。推测可能是有机溶剂能有效地促进细胞膜的相容性,从而改变了细胞膜通透性,影响了细胞对培养基营养物质的吸收。同时,不同有机溶剂又会对不同种类次级代谢产物的合成产生不同的影响。     

液体发酵桦褐孔菌三萜类成分抑制肿瘤细胞活性研究

探究桦褐孔菌液体深层发酵所得菌丝体中三萜类成分的抗肿瘤活性。采用高效液相色谱法鉴定桦褐孔菌液体深层发酵产物中含有5种已知具有肿瘤细胞生长抑制活性的三萜类成分,采用MTT比色法分析三萜类成分对卵巢癌细胞ES2、SKOV3和肺癌细胞A549和PC9的生长活性的影响,通过细胞周期和细胞凋亡实验研究三萜类成分对卵巢癌细胞和肺癌细胞增殖的影响。结果表明:经过三萜类成分处理3d和6d的肿瘤细胞生长活性均被明显抑制,对卵巢癌细胞ES2抑制的IC50分别为21.1μg/mL和17.6μg/mL,对SKOV3抑制的IC50值分别为33.8μg/mL和10.9μg/mL;对肺癌细胞PC9抑制的IC50分别为21.4μg/mL和19.7μg/mL、对A549抑制的IC50值分别为28.5μg/mL和23.5μg/mL。细胞周期实验结果表明三萜类成分对ES2、A549、PC9、SKOV3的阻滞可能发生在G0/G1期,在16.0μg/mL的三萜类成分处理下,PC9、A549、ES2、SKOV3处在G1期的细胞比例与对照组中各细胞G1期的占比分别提高32.3%、45.7%、10.9%、6.2%,S期的细胞数降低19.1%、57.3%、23.1%、17.5%。细胞凋亡结果表明,经过药物处理2d后,三萜类成分能够有效的诱导卵巢癌细胞ES2、SKOV3和肺癌细胞A549和PC9的细胞凋亡,进一步验证桦褐孔菌三萜类成分具有肿瘤抑制活性。     

两种不同来源桦褐孔菌多糖免疫活性的比较

利用水溶醇沉法分别从桦褐孔菌子实体和发酵产物中分离提取多糖,并采用两种免疫调节测定方法研究其免疫调节活性。所有桦褐孔菌子实体和发酵产物胞外乙醇沉淀多糖,除蛋白后多糖以及桦褐孔菌发酵产物胞内乙醇沉淀多糖,对NO的清除和人的外周血单个核细胞(hPBMCs)的增殖具有很强的活性,多糖含量和蛋白含量有明显的不同,桦褐孔菌发酵产物胞外多糖和胞内多糖具有较高的多糖含量和较低的蛋白含量,并且其对NO的清除活性和hPBMCs的增殖活性相对天然的桦褐孔菌子实体多糖弱。结果表明,桦褐孔菌多糖具有免疫调节活性。     

TritonX-100对液体深层发酵桦褐孔菌产活性多糖的影响

探讨表面活性剂TritonX-100对桦褐孔菌液体深层发酵产活性多糖的影响,利用醇沉法得到胞外多糖和胞内多糖,通过测定菌丝体量和胞内外多糖产量,明确TritonX-100对多糖的促进作用。进一步探讨TritonX-100的最佳添加时间及浓度,得出在第0d添加0.1%TritonX-100,促进效果最显著。多糖的DPPH自由基清除率测定结果表明,TritonX-100也促进桦褐孔菌多糖的抗氧化活性。通过对多糖化学成分以及单糖组成的分析,证明多糖中的糖、蛋白含量及单糖的组成与DPPH自由基清除率具有一定关联性。以上结果为进一步深入研究桦褐孔菌多糖奠定理论基础,从而建立一种桦褐孔菌发酵多糖的高产、高活性的液体深层发酵制备技术。     

桦褐孔菌三萜对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性及其有效成分鉴定

为探索桦褐孔菌(Inonotus obliquus)三萜是否能作为α-葡萄糖苷酶/α-淀粉酶天然抑制剂,采用硅胶柱色谱洗脱桦褐孔菌提取物,通过薄层色谱检测进行分离、纯化,结合液质联用色谱和核磁共振波谱对桦褐孔菌中的生物活性物质进行鉴定。结果表明:从桦褐孔菌发酵菌丝体中发现了桦褐孔菌萜D、lawsaritol和白桦脂酸,并从子实体中得到羊毛甾醇、桦褐孔菌醇和栓菌酸;桦褐孔菌子实体中的桦褐孔菌醇对α-葡萄糖苷酶具有最强抑制活性,液体深层发酵产物桦褐孔菌萜D对α-淀粉酶具有最强抑制活性,其IC_(50)值均低于阳性对照的阿卡波糖;酶抑制动力学结果表明,桦褐孔菌醇对α-葡萄糖糖苷酶作用机制为竞争性抑制,桦褐孔菌萜D对α-淀粉酶的抑制类型为非竞争性与竞争性抑制混合。     

响应面法优化桦褐孔菌产三萜化合物发酵培养基

通过单因子实验筛选出桦褐孔菌发酵产三萜化合物最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和混合氮源,采用部分因子实验得到对三萜含量有显著影响的4个组分,即葡萄糖、蛋白胨、CaCl2和酵母粉,再利用最陡爬坡实验并结合中心组合实验和响应面分析得到最佳培养基组成:葡萄糖58.9g/L、蛋白胨2.9g/L、CaCl20.5g/L、酵母粉1.2g/L、KH2PO41.0g/L和MgSO40.2g/L。采用该优化培养基发酵,三萜含量达到57.1mg/g,较优化前(41.8mg/g)和天然子实体(36.3mg/g)分别提高了36.6%和57.3%。     

液体深层发酵桦褐孔菌对不同来源木质纤维素的降解

桦褐孔菌作为白腐真菌的一种,能够降解木质纤维素,通过往桦褐孔菌液体深层发酵培养基中分别添加甘蔗渣、稻秆、麦秆、花生壳这4种不同来源的木质纤维素,研究在液体深层发酵条件下,桦褐孔菌对4种木质纤维素中的木质素、纤维素、半纤维素成分的降解规律.结果表明,桦褐孔菌对稻秆、麦秆、甘蔗渣、花生壳中木质素的降解率分别是74.8％,73.2％,58.5％,70.2％;对半纤维素的降解率分别是48.3％,71.6％,49.1％,67.6％;对纤维素的降解率分别是61.7％,48.9％,49.0％,66.2％.本次实验极好地印证了桦褐孔菌能够有效降解木质纤维素的特点,为今后大规模利用桦褐孔菌降解一些废弃木质纤维素奠定了基础,减少了秸秆类物质直接焚烧对环境造成的破坏,为充分利用木质纤维素资源提供了新的思路.     

石榴皮总多酚的超声波辅助提取及其抗氧化活性研究

采用超声波辅助提取从石榴皮中提取多酚类物质,通过单因素试验和正交试验得到总多酚的最佳工艺条件是:40%的乙醇溶液、1:30的料液比、60℃提取30分钟、提取3次、36 kHz的超声工作频率,总多酚提取率为25.86%。同时测定了石榴皮多酚提取物对超氧阴离子自由基(O2-.)及二苯代苦味酰基自由基(DPPH.)的清除活性,其自由基半清除率的有效浓度分别为43.48 g/L和0.013 g/L。     

pH值和表面活性剂对桦褐孔菌降解甘蔗渣效率的影响

为了提高桦褐孔菌(Inonotus obliquus)液体发酵选择性降解甘蔗渣木质素的效率,采用两因素多水平的方法进行正交实验,并通过正交实验确定发酵条件参数,对不同发酵时间处理后的甘蔗渣进行糖化水解,分析pH值和表面活性剂(Tween-80)对桦褐孔菌降解甘蔗渣的影响.结果表明:当pH值为6.0,Tween-80添加...     

广元地区油橄榄叶多酚提取条件及其抗氧化活性研究

采用乙醇溶剂浸提法提取广元地区油橄榄叶多酚物质。通过单因素和正交试验研究了料液比、乙醇体积分数、浸提温度以及浸提时间对橄榄叶多酚提取量的影响。结果表明：影响橄榄叶多酚提取量的主要因素及顺序为浸提温度〉乙醇体积分数〉浸提时间〉料液比。广元地区油橄榄叶多酚的最佳提取工艺条件为：料液比1：35（g／mL）,乙醇体积分数为60％,浸提温度55℃,浸提时间1．75h,油橄榄叶多酚提取量为57．22mg/g,其对DP-PH自由基的半清除质量浓度EC50为36．16μg/mL。     

超声波辅助提取美人蕉叶多酚工艺及其抗氧化活性研究

以美人蕉叶为原料,通过单因素试验并结合响应面法,对超声波辅助乙醇溶液提取美人蕉叶多酚的工艺条件进行研究.选择乙醇浓度、液料比、超声温度和超声时间作为响应面因素,多酚提取率为响应值,确定了能够用于美人蕉叶多酚提取率进行分析和预测的二次多项式回归模型方程.结果表明,在乙醇浓度为57%、液料比为43 mL/g、超声温度为72℃、超声时间为50 min时,测得的美人蕉叶多酚提取率最高,达到18.89 mg/g,与理论上的美人蕉叶多酚提取率(19.15 mg/g)相对误差仅为1.36%,证实了该模型合理,预测可靠.所提取的美人蕉叶多酚对DPPH自由基和OH自由基具有一定的清除能力并呈现正相关关系,其IC₅₀分别为49.99 mg/L和315.55 mg/L,证明了美人蕉叶多酚的抗氧化能力.     

萱草花中黄酮、多酚和多糖的提取及抗氧化活性

以10个不同品种的萱草花为原料,采用超声辅助法提取萱草花中黄酮、多酚及多糖,并评价3种提取物的抗氧化活性。结果表明,10种萱草花中多糖最高得率8.29%;多酚最高得率1.521%;黄酮最高得率1.743%。抗氧化活性结果表明,10种萱草花的提取液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基均具有较好的清除率,其中‘牧羊人’品种的多酚、黄酮提取物浓度仅为0.987 mg/mL时对2种自由基的清除率与VC相当,分别达到92.38%和99.79%。研究结果表明,萱草花中含有丰富的黄酮、多酚及多糖类物质,具有良好的抗氧化活性,可为萱草花的深度开发提供数据支撑。     

荔枝褐变及其多酚氧化酶动力学研究

对白蜡荔枝研究表明,常温下贮藏,荔枝果皮褐变与果皮多酚化合物含量的变化相一致：果皮发生褐变时,多酚物含量因氧化而显著减少。对其多酚氧化酶（ＰＰＯ）研究发现：其最佳底物是４－甲基儿茶酚;其催化的反应可用单底物反应模型来描述;用氧电极测出酶催化反应的最佳条件是ｐＨ值为７．３,温度为６２℃;米氏常数为２．３７３×１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１,ｒｍａｘ＝２．４５２ｍｇ·Ｌ－１·ｍｉｎ－１。该研究结果对防止荔枝酶促褐变具有一定的指导意义。