超氧化物歧化酶的固定化及其酶学性质

目的制备固定化超氧化物歧化酶(SOD),并分析其酶学性质。方法以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化超氧化物歧化酶。以邻苯三酚自氧化法分别测定溶液酶与固定化酶的活力,并计算回收率。对固定化酶的温度和pH稳定性、半衰期、重复使用的回收率及米氏常数(Km)进行测定。结果固定化超氧化物歧化酶活力为333U/g,酶活回收率为86.32%,半衰期为43.8d;固定化酶室温保存5d后,相对酶活力仍保持在80%以上,最适反应温度为45℃,使用一次后回收率为70.12%,重复使用两次后回收率为51.72%;固定化酶与溶液酶在pH6时活性最强,Km分别为0.18mmol/L和0.16mmol/L。结论该固定化酶较溶液酶的稳定性得到提高,便于贮存,在食品、药品、日用品等领域有良好的应用前景。     

原花色素的类超氧化歧化酶活性的测定

采用邻苯三酚自氧化法测定原花色素的类SOD活性，通过实验确定了适宜的测定条件为测定波长420nm；缓冲体系为Tris—HAc；邻苯三酚浓度为10mmol／L；pH值为8．2；Tris—HAc浓度为0．05mol／L，原花色素对邻苯三酚的自氧化抑制率达到92％。     

原花青素抗氧化活性测定方法比较

邻苯三酚法、水杨酸法、普鲁士蓝法是测定原花青素抗氧化活性常用的3种方法,对葡萄籽提取物中原花青素的抗氧化活性进行测定,对比这3种方法的准确性、重复性与稳定性。结果表明,水杨酸法和普鲁士蓝法比邻苯三酚法有较高的准确性、重复性与稳定性,操作相对简单,适合测定原花青素的抗氧化活性。     

磁性壳聚糖复合微粒固定化SOD的研究

制备了磁性壳聚糖复合微粒(Fe3O4/CS),并以Fe3O4/CS为载体固定了超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)。研究了温度、pH、储存时间、操作次数等对固定化SOD和游离SOD活性的影响。研究结果表明,固定化SOD的热稳定性、pH稳定性、储存稳定性等性能明显优于游离SOD,固定化SOD的操作稳定性良好。研究了固定化SOD和游离SOD的半衰期t1/2和动力学性质。固定化SOD的半衰期t1/2,1=35.7 d,游离SOD的半衰期t1/2,2=8.8 d;固定化SOD的米氏常数Km,1=0.04 mmol/L,最大反应速率Vm,1=40.19 mmol/min,游离SOD的米氏常数Km,2=0.19 mmol/L,最大反应速率Vm,2=85.76 mmol/min。     

壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶

用酶柔性固定化模型,以壳聚糖为载体,双醛淀粉为柔性链,对木瓜蛋白酶进行柔性固定化. 通过对固定化条件的优化,得出选用壳聚糖、双醛淀粉制得的柔性载体(Chitosan-DAS50)在酶用量为14.4 mg/g(酶/干球)、pH 8的条件下,固定木瓜蛋白酶18 h,所得的固定化酶活力回收率达72%,相当于采用壳聚糖-戊二醛(Chitosan-GA)手臂载体的3倍. 结果表明,酶的柔性固定化模型可以改善传统共价结合法固定化及手臂固定化酶活力回收率不高的缺陷.     

荧光偏振法测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20的含量

目的建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证。方法利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度。对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证。结果该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高(250μg/ml)、中(150μg/ml)、低(50μg/ml)、定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml)浓度样品的平均回收率均在(100±20)%的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15%;标准曲线拟合度良好。结论立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween 20有效浓度的监测。     

酶生物传感器对农药的测定

以戊二醛作交联剂,牛血清白蛋白(BSA)作保护剂,在本研究确定的最佳条件下将AChE固定到商品载体硝酸纤维素膜上,所得固定化酶片的活力重现性好,农药抑制率与农药浓度对数成线性关系,检出浓度为0.5μg·L-1,平均回收率为92.3%,在单管固定和同管固定两种固定酶片的测定实验中单管固定的酶片活力值比较平行.     

刺梨中SOD的提取和酶活测定

刺梨原产于我国西南地区,以贵州省为主,是目前发现超氧化物歧化酶(SOD)含量最高的水果[1]。本实验采用邻苯三酚自氧化法,分别测定刺梨鲜果、糖渍刺梨、刺梨干冲泡的饮品和刺梨酒中的SOD酶活。实验结果表明,刺梨鲜果和糖渍刺梨的SOD酶活分别为2140 U/g和3716.2 U/g;刺梨干冲泡的饮品、刺梨酒的SOD酶活分别是308.2 U/m L、368.1 U/m L。经比较发现,刺梨果实用糖腌制后SOD活性提高1.7倍左右,而制成饮品后SOD的酶活变化不大。     

青海地区青稞苗SOD的测定

文章采用邻苯三酚自氧化法,对青海地区三个品种青稞苗的不同生长高度的SOD(超氧化物歧化酶)活性的测定。经过结果分析,得出青稞苗在生长初期,随着高度的增长,其含量会逐渐增加,生长到25 cm左右SOD活性达到最大。通过对青稞苗不同生长时期的SOD活性的测定,旨在为青稞苗资源的进一步开发利用提供参考,提高青稞资源的有效开发利用,推动青稞产业发展。     

壳聚糖-海藻酸钠微球固定化木瓜蛋白酶的工艺研究

以壳聚糖和海藻酸钠为原材料,采用乳化交联法制备空白微球,通过戊二醛固定木瓜蛋白酶,以固定化木瓜蛋白酶的活性回收率作为最终测定指标,并以星点设计-效应面法优化实验条件。通过一系列的实验,结果表明最优条件为:固定化时间是4 h,壳聚糖与海藻酸钠的质量配比(m/m)为5∶5、加酶量为700 U/mL、戊二醛浓度为1. 0%、固定化温度为40℃。木瓜蛋白酶的固定化效果良好,木瓜蛋白酶活性回收率为68. 9%。     

催化裂化油浆固含量测定方法的研究

目前催化裂化油浆固含量的测定方法没有统一的标准,现行测定方法的比较分析鲜有报道。为了给油浆固含量测定方法的选择提供参考,本文通过实验,系统地比较分析了过滤法、离心法、灰分法以及炭化灼烧法这4种方法在固含量测定方面的准确度和精密度,并对过滤法在过滤材料及稀释剂选择方面进行了进一步的优化分析。结果表明：过滤法的准确度和精密度均较高,且基本能全面反映油浆固含物中催化剂及焦粉的含量;离心法的准确度和精密度均较差,测定结果明显偏大;灰分法及炭化灼烧法的精密度较高,但准确度较低,测定结果偏小;采用过滤法测定固含量时,过滤材料选择慢速定量滤纸即可满足一般的精度要求,当精度要求较高时,过滤材料可选择孔径为0.22μm的有机滤膜,另外稀释剂可选择芳香性溶剂如甲苯。     

动物肝脏中超氧化物歧化酶活性的测定

本文采用微量连苯三酚自氧化法测定动物肝脏中超氧化歧化酶活性,方法操作简单,精密度好,灵敏度高,可广泛应用于动物肝脏中超氧化歧化酶活性的测定。     

微量联苯三酚自氧化法测定蔬菜和花卉中SOD的活性

本文采用微量联苯三酚自氧化法测定蔬菜和花卉中的SOD酶活性,方法操作简单,精密度好,灵敏度高,变异系数为2．94%,平均回收率97．7%,可广泛应用于蔬菜和花卉中SOD活性的测定。     

乙基纤维素固定化α-淀粉酶的研究

对乙基纤维素固定化α-淀粉酶进行了研究,优化了α-淀粉酶的固定化工艺条件,并比较了游离酶和固定化酶的特性。结果表明,在α-淀粉酶浓度为4g·L-1、乙基纤维素质量分数为0.50%、4℃的条件下,固定化α-淀粉酶的重复操作稳定性最好;固定化α-淀粉酶的最适反应pH值为7.0、最适反应温度为60℃,具有良好的热稳定性、重复使用性和储存稳定性;该固定化方法操作简便,减少了酶变性的可能,最大程度保留了酶的活力。     

磁性壳聚糖微球的合成及其在固定化血管紧张素转化酶的应用

以化学共沉淀法合成Fe3O4纳米粒子为磁核,采用乳化交联法制备磁性壳聚糖微球,并对其形貌、结构和磁饱和强度等性质进行了表征。以磁性壳聚糖微球作为载体,固定化猪肺粗提物中的血管紧张素转化酶,并对固定化条件进行研究。结果表明,固定化血管紧张素转化酶的最佳条件为：pH值为8.3,最佳温度为50 ℃,最佳时间为1.5 h,最佳酶溶液蛋白浓度为6 mg/mL,此时固定化酶活力最高为0.048 U/g微球。与游离酶相比,固定化酶的pH值稳定性和热稳定性均得到提高。固定化酶重复使用10次,仍然保持40%以上相对活力,说明磁性壳聚糖微球是固定化血管紧张素转化酶的良好载体。     

Attachment of Lipase on Amino Functionalized Titania Submicrospheres via Covalent Binding

A facile and effective method for immobilized lipase was presented. The titania submicrospheres were synthesized via a modified sol-gel method followed by amino functionalization through the chelation between dopamine and titania. Lipase was covalently attached on the functionalized titania surface using glutaraldehyde as the cross linking agent. The loading ratio and relative activity of the immobilized lipase were 230 mg/g titania submicrospheres and 65%, respectively. The kinetic parameters including the Michaelis constant (K_m) and the maximum reaction rate (V_max) changed slightly after immobilization. Compared to free lipase, the immobilized lipase showed favorable pH stability, thermostability, recycling stability and storage stability. The immobilized lipase retained 90% activity after incubation at 50 ℃ for 2 h, while the free lipase retained only 60% activity. The immobilized lipase retained more than 80% activity after 8 batches.     

α-淀粉酶在MCM-41介孔分子筛上的固定化研究

采用浸渍法将α-淀粉酶固定在介孔分子筛MCM-41上。考察了吸附时间、给酶量和pH对α-淀粉酶固定化性能的影响,并对固定化酶的活性、稳定性和载体结构等进行了研究。结果表明,在固定化时间为11 h,给酶量为70 mg.g-1,pH=5.9的条件下,固定化酶活性回收率可达48%。与游离酶相比,固定化酶的耐热能力增强,温度达到70℃时,固定化酶相对活性可达到75%,而游离酶只有14%;在pH=3.3～8.0的内,固定化酶相对活性为62%～100%,而游离酶的相对活性为5%～100%,固定化酶具有更宽的pH适应性;此外,固定化酶储存稳定性明显增强,并具有一定的可重复操作性,且固定后载体仍然保持了良好的介孔结构。     

Integration of flocculation and adsorptive immobilization of Pseudomonas delafieldii R‐8 for diesel oil biodesulfurization

BACKGROUND: Deep desulfurization of hydrocarbon fuels is receiving increasing worldwide attention because of the increasingly stringent regulations to meet the requirement of environmental protection. Biodesulfurization (BDS) is being explored as either an alternative or complementary process to the conventional oil refining technologies. The whole cell immobilization technique is of great importance for accelerating the industrialization of BDS. An effective technique for a BDS process employing flocculation and integration with immobilization was developed. RESULTS: Pseudomonas delafieldii R‐8 cells were successfully flocculated and immobilized by directly adding chitosan and celite into the culture broth. The one‐step immobilized R‐8 cells exhibited good catalytic activity and retained at least 85% activity after six cycles of repeated‐batch desulfurization. Extensive biodesulfurization of diesel oil resulted in 82% reduction of total sulfur from 123 to 22 µg g^?1 in 24 h. CONCLUSIONS: A novel and simple technique was developed using chitosan flocculation and integration with cell immobilization onto celite for dibenzothiophene BDS. The present report indicates that integration of flocculation and immobilization may provide a continuous and efficient method of BDS. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

液相色谱串联质谱法检测油菜籽中27种除草剂残留

基于液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS),建立了油菜籽中27种除草剂残留的分析方法。样本采用改进的QuEChERS方法提取净化,用乙腈-乙酸溶液提取30 min,添加缓冲盐,振荡,冷冻离心去除脂肪和蛋白,将上清液转移至净化管中,加入PSA(N-丙基乙二胺)/C18(BONDESIL-C18)/GCB(石墨炭黑)混合粉末净化包,去除基质干扰,过0.22μm有机相滤膜。利用LC-MS/MS外标法定量分析。方法学考察结果表明,检出限为0.14~0.92μg/L,油菜籽基质中27种除草剂在2.0~200μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数r≥0.992;在5、10、25μg/kg添加水平下,27种除草剂的平均加标回收率为75.3%~102.0%,相对标准偏差在1.3%~10.4%之间。将该方法用于实际油菜籽样品的检测,结果显示所有样品均符合农药残留限量标准。该方法具有简便、灵敏度高、精密度和准确度好的优势,适合油菜籽中27种除草剂残留检测。