Actinomucor elegans、Aspegillus oryzae和Rhizopus oligosporus产蛋白酶条件及蛋白酶性质的比较

比较了腐乳生产菌株Actinomucor elegans、豆酱和酱油生产菌株Aspegillus oryzae以及天培生产菌株Rhizopus oligosporus产生蛋白酶的条件和所产蛋白酶的性质。结果表明,不同的菌株产酶条件及蛋白酶的性质有较大的差异:少孢根霉主要产生酸性蛋白酶,在pH2.5-4.0的酸性介质中、32℃条件下培养时产酶能力较强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0时酶活力最高,在pH5.0附近最稳定;米曲霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,所产生的蛋白酶活力显著高于少孢根霉和毛霉,米曲霉在酸性条件下产酸性蛋白酶能力强,在中性条件下产中性蛋白酶能力强,在碱性条件下产碱性蛋白酶能力强,在28-32℃时产酶能力强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛范围内有很强的活力,在pH6.0-8.0的范围内稳定性强;毛霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,但酶活力明显低于米曲霉,毛霉在中性偏酸性(pH5.5)的介质中产酸性蛋白酶的能力较强,但介质的酸碱度对毛霉产中性及碱性蛋白酶没有影响,在28℃时产酸性、中性和碱性蛋白酶的能力都比较强,毛霉所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛pH范围内有活力,在pH5.0-6.0时酶活力最高,在pH5.0-7.0时稳定强。     

高活性生淀粉糖化酶菌株F7的鉴定及其酶学性质的研究

对高活性生淀粉糖化酶菌株F7的归属和酶学性质进行了鉴定和探讨,从菌体形态特征和分子生物学特征方面对F7进行了鉴定,从F7的酶活力、酶对生淀粉的吸附力、最佳的作用温度、pH等方面探讨了F7的生淀粉糖化酶性质。结果表明:菌株F7归属藻菌纲(Phycomycetes),毛霉目(Mucorales),毛霉科(Mucoraceae),根霉属(Rhizopus Ehrenberg),米根霉种(Rhizopus oryzae)。其酶不仅对生淀粉吸附力大,消化能力强,而且其兼有的强酸性蛋白酶活力低;该酶作用pH范围是3.3～5.3;作用温度是35～45℃,酶活力稳定,在低温条件下酶液能保存较长时间;该酶对大米生淀粉的吸附率高,糖化能力也强。     

酸性条件下毛霉和根霉蛋白酶的催化特性

研究比较了Actinomucor elegans蛋白酶和Rhizopus oligosporus蛋白酶在pH 3.0～6.0的条件下催化大豆分离蛋白(SPI)降解的特性,结果表明:在pH3.0和pH3.5的条件下,SDS-PAGE显示毛霉和根霉蛋白酶都能迅速地催化大豆7S和11S蛋白的降解,但此时水溶性蛋白的得率不高,均在35%以下;在pH5.0、5.5和6.0时,毛霉和根霉蛋白酶催化大豆分离蛋白降解的能力增强,水解度升高,水溶性蛋白的得率增加,但毛霉蛋白酶的水解产物水溶性蛋白得率始终高出约10%,SDS-PAGE显示毛霉蛋白酶催化下的大豆分离蛋白各个亚基降解消失的速度下降,同时伴随有新的条带产生,特别是碱性亚基几乎不能在4h内降解,根霉蛋白酶催化下的大豆分离蛋白各个亚基降解消失的速度在pH5.0和5.5时还比较强,但在pH6.0时明显下降,酸性亚基和碱性亚基均不能在4h内消失,表明在酸性条件下2个霉菌的蛋白酶其催化特性有明显的差异。     

诱导少孢根霉分泌胞外β-葡萄糖苷酶条件的研究

对少孢根霉在液态发酵后产生的β-葡萄糖苷酶最大酶活时最适工艺条件进行了研究。研究结果表明以吐温-80、吐温-20、曲通-x、聚乙烯醇、V_c、醋酸钠和EDTA作诱导剂,以吐温-80的效果最佳,使用量为100μL/ 100mL时获得最大酶活;麸皮、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、玉米粉作碳源,以麸皮的产酶效果最佳,2%的麸皮使用量获得最大酶活。少孢根霉产β-葡萄糖苷酶最适发酵工艺条件:接种量2%少孢根霉在75mL黄豆芽液体培养基中,加2%的麸皮、调发酵培养基的初始pH值6.0,再加100μL/100mL诱导剂吐温-80,于35℃培养48h。     

八公山腐乳酿制过程中毛霉和根霉的前期发酵比较研究

八公山腐乳前期发酵工艺对其总体风味具有重要影响,围绕腐乳酿制中常用的总状毛霉（Mucorracemosus）和米根霉（Rhizopus oryzae）开展工艺探索具有重要意义。在单因素试验的基础上,选取发酵时间、发酵温度和接种量为影响因子,以蛋白酶活力为评价指标,采用响应面法优化总状毛霉和米根霉发酵腐乳的前期发酵条件,比较最优条件下二者前期发酵分泌酶系和氨基酸。研究结果表明总状毛霉的前期发酵条件为：发酵时间60 h、发酵温度24 ℃、接种量1.0×105 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为42.79 μg/mL;米根霉的前期发酵条件为：发酵时间50 h、发酵温度32 ℃、接种量1.0×105 CFU/mL,此时分泌产蛋白酶活力为33.51 μg/mL。通过对二者前期发酵的情况比较分析可知：总状毛霉发酵前期产物中蛋白酶活力高于米根霉,而淀粉酶、糖化酶、脂肪酶活力低于米根霉。总状毛霉发酵产物的氨基酸总量高于米根霉,但其中呈味氨基酸和疏水氨基酸差别不大。两种菌的前期发酵互有优势,为协同作用提供了一定的理论依据。     

米根霉葡萄糖淀粉酶的分离纯化及特性研究

葡萄糖淀粉酶是米根霉在淀粉质培养基中诱导分泌的一类胞外酶，其表达对米根霉转化淀粉生成L-乳酸的效率，以及L-乳酸分批发酵周期的长短有很大影响。本文对米根霉葡萄糖淀粉酶进行分离纯化，并研究其酶学性质，结论如下：经硫酸铵盐析、透析脱盐、Sephadex G-100柱层析等纯化步骤，葡萄糖淀粉酶比活力提高23倍。SDS-PAGE显示纯化后的酶为一条带，相对分子量约75．5kD。该酶以可溶性淀粉为底物时最适催化反应pH值为4．0～6．0，最适催化反应温度为40-50℃，在50℃下保持稳定。钙离了和锰离子对该酶活力有一定的增强作用，而铅离子和亚铁离子对其活力有明显的抑制作用。     

根霉3.010产纤维素酶酶学特性研究

对根霉3.010所产纤维素酶酶学特性进行了分析研究.实验结果显示:根霉在培养的第6d～8d为纤维素酶旺盛分泌期,其最适反应温度为50%左右,且在40℃以下热稳定性较好:纤维素酶的最适反应pH值为4.0-6.0,在pH4.0～7.0时稳定性较好.在1.0%的浓度下,CaCl2、MnSO4和CoCl2均对该酶有激活作用;而KCI、ZnSO4和CuSO4则对该酶活力有不同程度的抑制作用;NaCl、FeS04和Mg2SO4对根霉纤维素酶活力影响不明显.     

根霉脂肪酶发酵优化和酶性质的研究

对少根根霉发酵条件进行了优化.对比了二十余种碳源和氮源,正交实验选出根霉产脂肪酶的最优培养基:全脂豆粉4%,MgSO4 0.1%,K2HPO4 0.5%,(NH4)2SO4 0.2%,花生油1%,pH自然.特别对复合氮源进行了研究,有机复合氮源效果不大,有机氮源和无机氮源复合可获得较高的酶活.在温度26.5℃,转速130r/min,装液量70～100mL,上述培养基条件下,发酵酶活力最高单位315 U/mL.另外考察了酶的基本性质,利用该株菌产脂肪酶催化合成单甘酯取得良好的效果,说明该株少根根霉脂肪酶有良好的1,3位置专一性和催化活性.     

葡聚糖修饰米根霉脂肪酶条件优化及其稳定性研究

采用经高碘酸钠活化的葡聚糖修饰米根霉脂肪酶,以获得具有较高酸解催化活性的脂肪酶。研究反应时间、反应pH值、还原剂浓度及葡聚糖质量分数对化学修饰效果的影响,并利用Box-Behnken设计法及响应面优化法对米根霉脂肪酶的化学修饰条件进行优化,当反应pH值为7.63、反应时间为15.53 h、还原剂浓度为0.20 mol/L、葡聚糖质量分数为0.3%时,脂肪酶酸解率可达到最高值37.28%。在40 ℃最适温度条件下,修饰酶的活性是原酶的2.2 倍,且经化学修饰后脂肪酶的稳定性有显著提高。     

福建药白曲中根霉的分离鉴定及菌株特性分析

采用选择性培养基对福建各地区药白曲中的根霉进行分离纯化,得到6株根霉纯菌株。经菌落形态特征观察以及分子生物学方法鉴定,确定这6株根霉均为米根霉属Rhizopus oryzae strain CBS 112.07。通过糯米基质固态发酵法跟踪测定米根霉产液化酶、糖化酶以及产还原糖和总酸能力,结果显示:6株米根霉的液化力在前5 d呈递增的趋势,其中以菌株M1,M2,M3产液化酶活力最高,并在第5天达到最大值;糖化力则在前5 d内呈现快速上升后保持稳定的趋势,其中以菌株M2,M3,M6产糖化酶活力最高,其糖化力均在第2天达到最大值,三者差异不具有显著性;还原糖产量变化趋势与糖化力相似,其中以M2、M3产还原糖量最高,并与其他菌株之间呈显著差异性;此外,M4产总酸能力最高,可达到1.17%(以乳酸计),其产还原糖量和糖化酶活力最低。M1,M2和M3是可应用于红曲黄酒酿造的优良米根霉菌株。     

采后一氧化氮处理对油桃抗软腐病的诱导

以油桃为实验对象,研究了采后NO供体硝普钠(SNP)处理对低温贮藏期间油桃根霉软腐病的控制效果及其机理。研究结果表明硝普钠处理能显著地抑制损伤接种Rhizopus stolonifer的油桃果实软腐病的扩展,其中较低浓度5mmol/L的硝普钠处理效果最好,其病斑直径仅为对照的75.83%。进一步研究表明SNP浸泡处理能显著地提高低温贮藏期间油桃果实组织苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)的活性,且在贮藏后期对组织过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性具有抑制作用,然而对多酚氧化酶(PPO)的活性没有明显的诱导作用。可见一氧化氮是通过改变油桃抗性相关酶的活性来增强果实的抗病性。     

酒曲根霉的诱变育种

本试验对根霉RA-1菌株进行NaNO2诱变和紫外线诱变,得到一株低聚糖酶活力较高的菌株,酶活力达到4360(U/g干曲),比出发菌株提高403.7%,液化酶比出发菌株提高到486.2%,达到1953(U/g干曲),糖化酶提高到出发菌株的567.8%,达到2.55×105(U/g干曲),将该菌株进行斜面传代,产酶稳定。     

根霉淀粉酶的分离纯化及部分性质研究

本实验对根霉RhizopusRA-1淀粉酶进行了分离纯化,经过(NH4)2SO4分步沉淀,DEAE-纤维素离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析等3部纯化,得到了电泳纯的糖化酶和两条紧密相连的液化型淀粉酶带,用SDS-PAGE法测得三种酶都只含有一种亚基,相对分子质量分别为78000,48000,50000。     

根霉PE-8菌株淀粉降解酶类的研究菌株的选育及其酶解淀粉产物的鉴定(I)

从淀粉厂土样等样品中分离筛选到一支产淀粉降解酶的根霉菌株P78,经紫外线及Co60辐射诱变和自然分离,获得一支突变菌株PE-8,在麸曲培养基上,46～48℃、固态培养22～24h,酶活力达3000U/g（干）。经高压液相色谱和纸层析分析证明,其分泌的淀粉降解酶类作用于适当液化的玉米淀粉产物中麦芽三糖至麦芽八糖的比例达77.6％、葡萄糖含量仅为3.03％,属于麦芽低聚糖,说明根霉PE-8菌株分泌的淀粉降解酶类不同于葡萄糖淀粉酶或α-淀粉酶,属于低聚糖酶。     

Lipase production by Rhizopus oryzae growing on different carbon and nitrogen sources

Nitrogen and carbon sources influencing the growth and production of lipase by Rhizopus oryzae were studied. High yields of enzyme activity were obtained when proteose peptone was the nitrogen source in media with olive oil (MWO) and without olive oil (MWHO). Carbon sources increased lipase activity in MWHO but decreased it slightly in the presence of oil. Lipase activity was significantly (P < 0.5) higher in MWO than in MWHO. Biomass concentration was also higher in the presence of oil. Industrial by-products bran and whey have been used as efficient media for the production of lipase by R oryzae. © 1999 Society of Chemical Industry     

从日本根霉中提取壳聚糖的初步研究

报道了一种从日本根酶中提取壳聚糖的简单方法。正交试验研究显示,以2%淀粉为碳源,1%蛋白胨为氮源,在起始pH5.0,26℃下培养60h时产量最高,菌丝体干重为8.43g/L。经NaOH间歇处理,HCl抽提,得到天然壳聚糖为895mg/L,壳聚糖产量占菌丝体干重的10.58%。产品壳聚糖纯度为90.5%。     

糖化曲优良根霉分离技术

根霉在生长的后期会形成孢子，以往根霉的分离采用孢子繁殖法；本文依据根梅在生长时首先长出丝状菌体，并具蔓延、伸展的特性，采用菌丝切割移植方法，可以分离得优良根霉。同孢子分离法相比，可以简化操作程序，在实际运用中效果良好。     

优良根霉菌株C—24和LZ—24的选育

从收集的33份优质曲样中分离纯化出64株根霉菌，根据培养特征，稀磺液测试秀明圈大小，酶活力，试饭情况，试饭情况，试饭糖分，酸度，产酒情况等筛选出了性能较优的根霉菌2株，再经反复紫外线诱变处理，育成C－24和LZ－24两株优良的菌株，系列试验结果表明其生长速度快，试饭糖分别对比照Q303高27．1％，21．8％，对酿酒原料适应性广，大生产制曲效果好，出酒率和酒质明显提高。     

亚硝基胍、紫外诱变筛选高产纤溶酶菌株

以产纤溶酶的根霉Y为出发菌株，通过亚硝基胍、紫外复合诱变，采用血纤维蛋白平板法测量发酵上清液的纤溶活性，得到一株高产突变株C6。其产酶活性是出发菌株的4．73倍，经过传代培养，该菌株的高产纤溶酶的特性能够稳定遗传。     

根霉菌在食品工业中应用的安全性

一些根霉菌种产生毒素使其在发酵食品中的应用安全性受到了质疑.该文从毒素的研究进展和现状出发提出根霉菌可能存在的食品安全问题,并介绍文献资料在毒素研究过程中采用的一些新方法,希望从食品安全角度研究根霉菌的科学应用问题,为我国合理利用根霉菌发酵生产安全的发酵食品奠定基础.