烟草黑胫病菌分子生物学研究进展

烟草黑胫病是烟草主要病害之一,每年给烟草生产造成巨大损失。烟草黑胫病菌隶属于卵菌纲疫霉属。近十几年来随着分子生物学技术的迅猛发展,烟草黑胫病菌的分子生物学研究有了较大进步。本文总结了烟草黑胫病菌在病原菌起源和分类命名、全基因组序列、线粒体基因组序列和功能基因等方面的研究进展,并分析了烟草黑胫病菌在分子生物学研究方面的未来发展方向,以期为烟草黑胫病菌致病机理研究和烟草分子抗黑胫病育种提供一定的参考。     

烟草黑胫病菌高效杀菌剂的筛选

为了筛选防治烟草黑胫病的有效药剂,采用菌丝生长速率法分析了22种杀菌剂对烟草黑胫病菌的抑制作用,测定了其中抑菌效果较好的7种杀菌剂对烟草黑胫病菌菌丝生长的EC50值,并以50%（质量分数）烯酰吗啉悬浮剂和25%（质量分数）甲霜灵可湿性粉剂为对照药剂,通过温室盆栽试验考察了23.4%（质量分数）双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的防效。结果表明,在供试的22种杀菌剂中,氟吗啉、申嗪霉素、甲霜灵、代森锰锌、丁吡吗啉、烯酰吗啉和双炔酰菌胺7种杀菌剂的抑菌效果较好,其对烟草黑胫病菌的EC50值分别为2.023 0、1.923 0、1.808 2、1.758 0、1.400 0、0.783 0和0.018 0 mg/L。23.4%双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的病指防效为80.11%,显著高于对照药剂50%烯酰吗啉悬浮剂（64.89%）和25%甲霜灵可湿性粉剂（66.05%）,可有效控制烟草黑胫病的危害。     

烟草黑胫病菌对甲霜灵的敏感性则定

烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var nicotianae)对甲霜灵的敏感性测定结果表明：所测菌株菌丝生长对甲霜灵都存在不同程度的敏感性,Ec50值平均为0．2132μg/mL,Ec95值平均为6．5623μg/mL,但不同菌株对甲霜的敏感性不同,Ec50值芯围在0．0573－0．08485μg/mL之间,相差15倍左右。Ec95值的范围在2．3393－21．8051μg/mL之间,相差9倍左右。其中以9734－1、9716－3和9706－2的耐药性最明显。甲霜灵对烟草黑胫病菌孢子囊的产生也有明显的抑制作用,5．0μg/mL的甲霜灵对烟草黑胫病菌的产孢抑制率为100％,通过甲霜灵对烟草黑胫病菌继代培养物的测定也证明了烟草黑胫病菌对甲霜灵的耐药性。     

大蒜粗提物对烟草黑胫病菌的室内抑制作用

采用平板抑菌法测定了大蒜乙醇和水提取物对烟草黑胫病菌的抑菌效果.结果表明:大蒜提取物对烟草黑胫病菌有显著抑制作用,且随大蒜提取物浓度的增大而增强;大蒜乙醇提取物对烟草黑胫病菌的抑制作用优于水提取物.0.2 g/mL和0.3 g/mL浓度大蒜乙醇提取物对烟草黑胫病菌的抑制率均为100.00%;而0.3 g/mL浓度的大蒜水提取物的抑制率亦为100.00%;大蒜水提取物与乙醇提取物的有效抑制中浓度分别为0.04 g/mL和0.03 g/mL.因此,可尝试以大蒜为原料研制植物保护剂来防治烟草黑胫病.     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅲ)

综述了烟草黑胫病菌抗甲霜灵菌株群体动态及抗性水平 ,抗药性产生的原因 ,抗甲霜灵菌株的生物学性状遗传与变异 ,甲霜灵对烟草黑胫病菌的毒性作用方式 ,烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的遗传稳定性 ,对甲霜灵的抗药性治理策略和核酸分子杂交技术、PCR、RAPD、RFLP、ELISA技术在烟草黑胫病菌研究中的应用以及烟草黑胫病菌毒性遗传等方面的最新研究进展。     

烟草黑胫病菌研究进展(一)

系统综述了烟草黑胫病菌的发现与命名、分类、生物学特征、分布与为害、致病机理、生理特性及寄主范围等方面的最新研究进展。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅱ)

综述了烟草黑胫病菌致病性与生理分化的发现、机制、类型、主要途径、鉴定方法(生理生化法和寄主法)以及交配型的类型和在无性繁殖条件下发生变异的因素等方面的主要研究进展,并对烟草黑胫病菌致病性与生理分化、接种方法进行了比较分析和讨论。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅰ)

系统综述了烟草黑胫病菌的发现与命名、分类、生物学特征、分布与为害、致病机理、生理特性及寄主范围等方面的最新研究进展.     

6种杀菌剂对烟草黑胫病菌的毒力测定

采用生长速率法对"谱克"、"银法利"、"烯酰锰锌"、"敌克松"、"利尔"和"甲霜灵锰锌"6种杀菌剂进行了毒力试验.结果表明:50%"谱克"、68.75%"银法利"和69%"烯酰锰锌"对烟草黑胫病菌菌丝生长均有较好的抑制效果,其中以50%"谱克"的效果最好,其EC50为1.2704 μg/mL;60%"敌克松"、50%"利尔"杀菌剂次之,EC50分别为304.2533 μg/mL和371.1388μg/mL;72%"甲霜灵锰锌"的EC50最高,为610.1751μg/mL.     

40种中药材提取物对烟草黑胫病菌的抑制作用

测定了崂山40种常见中药材提取液对烟草黑胫病菌的抑菌活性。结果表明,10 g/L乙醇提取物浓度下,有11种植物(占27.5%)提取物对烟草黑胫病菌抑制率达100%,有28种(占70%)抑菌率达80%以上。对公丁香提取液相对含量较高的4种组分的抑菌效果进行了进一步测定,结果表明,丁香酚和乙酸丁香酚酯10倍稀释液对黑胫病菌抑制率高,分别为100%和60.19%,说明丁香酚和乙酸丁香酚酯为公丁香的主要抑菌活性成分。本研究表明,公丁香提取物中活性成分丁香酚具有防治烟草黑胫病的良好应用潜力。     

不同类型杀菌剂对烟草黑胫病菌生物活性的研究

研究了烯酰吗啉、嘧菌酯、醚菌酯、甲霜灵及代森锰锌5种不同类型杀卵菌剂对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊产量、游动孢子释放、孢子囊直接萌发及休止孢萌发的生物活性。结果表明:烯酰吗啉和甲霜灵对菌丝生长具有强烈的抑制作用,其次为代森锰锌,嘧菌酯和醚菌酯的活性最低;烯酰吗啉和甲霜灵对孢子囊的形成也具有很高的抑制活性,显著高于其它类药剂;游动孢子的释放对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为代森锰锌,而烯酰吗啉和甲霜灵对其没有抑制作用;孢子囊的直接萌发对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为烯酰吗啉和代森锰锌,而甲霜灵对此阶段没有活性;休止孢的萌发对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为烯酰吗啉、代森锰锌,而甲霜灵不影响其萌发。     

湖北省恩施州烟草黑胫病菌生理小种研究

１９９５～１９９８ 年从恩施州烟草上采集到黑胫病标样１０２ 个,分离纯化出４６ 个菌系,根据鉴别寄主的病害反应鉴定其生理小种。用游动孢子悬浮液注射１０ 叶期左右鉴别寄主的茎基部,所用鉴别寄主为Ｌ８、Ｎ Ｃ１０７１、Ｎ．ｎｕｄｉｃａｕｌｉｓ和小黄金１０２５。结果表明：４６ 个菌系对Ｌ８、Ｎ Ｃ １０７１ 和Ｎ．ｎｕｄｉｃａｕｌｉｓ无致病力,应为０ 号小种。其中有２０ 个菌系来源于Ｌ８ 杂交种ＭＳＫｙ１４×Ｌ８,说明恩施烟区杂交种ＭＳＫｙ１４×Ｌ８ 由于黑胫病菌生理小种变化而造成的黑胫病发病的可能性很小。本文对于该品种在生产上有一定程度的黑胫病发生的原因做了初步探讨。     

重庆市烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在重庆市涪陵、彭水、石柱等烟区采集了40个烟草黑胫病菌菌株,并采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型.结果表明,40个菌株对烟草品种L8具有较强的致病力,而对Nicotiana nesophila无致病力;在TTC培养基中皆呈现红色反应,说明供试的40个菌株皆为1号生理小种.     

国内外烟草黑胫病菌生理小种鉴定评介

烟草黑胫病菌生理小种的鉴定工作起始于60年代初,20多年来取得了较大的成绩,明确了生理小种的存在,并鉴定出了4个生理小种。这对于指导烟草抗病育种工作及控制烟草黑胫病的危害起到了重要的作用。生理小种是指形态相同,但在人工培养、     

湖北省烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在湖北省襄樊、恩施等主要烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离纯化出30个烟草黑胫病菌株。采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTZ(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N.nesophila无致病力,应为1号生理小种,占供试菌系的80%,为湖北省优势生理小种;其他6个菌株中有4个菌株对NC1071有较强致病力,但对L8致病力较弱,有1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,但对L8有较强致病力;6个菌株对N.nesophila无致病力,是否为2号生理小种还是其他致病型,尚待进一步研究确定。     

我国烟草黑胫病菌生理小种研究初报

1982—1986年先后从山东、河南、安徽、云南、贵州、福建、湖南、湖北、陕西、四川和辽宁等省采集并分离到烟草黑胫病菌系255个;根据鉴别寄主的病害反应鉴定其生理小种:用游动孢子悬浮液注射接种10叶期左右鉴别寄主的茎或茎基部。所用的鉴别寄主有白肋烟品系 L_8,烤烟品种 N.C.10 71和小黄金10 25等,及烟草野生种N.nudicaulis。结果是,有231个菌系对 L_8、N.C.10 71和 N.nudicaulis 无致病力或仅有弱致病力,应为0号小种;有12个菌系对四个鉴别寄主都有高度致病力,应为1号小种:有12个菌系对 L_8和 N.C.10 71无致病力,而对 N.nu-dicaulis 有中到高度致病力,根据它们的病害反应不像是0、1和3号小种,是否是2号小种还是新的小种有待进一步研究。参照田间检测结果,我们初步认为我国主要烟区烟草黑胫病菌群体中,0号小种为优势小种,亦有少量1号小种的存在,而在辽宁省1号小种似乎比0号小种更重要一些,在11个菌系中,1号小种7个,0号小种4个。     

四川省烟草黑胫病菌生理小种的分离鉴定

为了准确掌握四川省烟草黑胫病菌生理小种组成及分布情况,从四川烟草主产区采集了108个烟草黑胫病标样,采用髓部碟片分离法获得74株黑胫病菌,同时通过TTZ颜色反应和鉴别寄主法对74个菌株进行了生理小种鉴定.结果表明,四川烟草黑胫病菌存在0号和1号生理小种,供试菌株中0号生理小种占28.38％,1号生理小种占71.62％,属优势小种.两个生理小种在各采样区均有分布.     

大理州烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性测定

采用含药平板法建立烟草黑胫病菌对杀菌剂烯酰吗啉的敏感基线,并测定了2013年从云南省大理州各烟区分离纯化的烟草黑胫病菌菌株对烯酰吗啉的敏感性。结果显示,烟草黑胫病菌的敏感基线为1.4656 μg/mL;68个田间菌株对烯酰吗啉的EC₅₀值在0.5857~2.5254 μg/mL之间,平均为1.1118 μg/mL。表明烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的活性较高,大理州烟草黑胫病菌的抗药性风险较低。烯酰吗啉可用于大理州烟草黑胫病的有效防控,但应与其他杀菌剂进行合理的轮换使用。     

烟草根系分泌物对烟草疫霉菌的抑制作用

为明确烟草根系分泌物对烟草疫霉菌的影响,采用液相色谱-质谱联用仪(Liquid chromatograph-mass spectrometry,LC-MS)检测小黄金1025和革新3号根系中共有分泌物含量的变化。通过菌落生长、孢子囊形成、菌丝生长量明确含量差异较大的5种共有根系分泌物对烟草疫霉菌的抑制效果,并利用盆栽试验检测其对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,共有根系分泌物中,含量差异较大的化合物为酒石酸、二硝托胺、茉莉酮、棕榈酸和油酸。在低浓度(100μg/mL)条件下,5种化合物对烟草疫霉菌均具有显著的抑制效果,且随浓度的增加其抑制效果增强。酒石酸对菌丝生长、孢子囊形成的抑制率分别为36.72%和50.16%,棕榈酸对菌丝生长量的抑制率为59.86%。酒石酸和棕榈酸对烟草黑胫病的防治效果分别为53.11%和52.70%。因此,烟草根系分泌物中存在抑制烟草疫霉菌生长的物质,且能够在一定程度上防治黑胫病的发生。     

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。