纤维素分解菌BSX5的分离、鉴定及产酶条件

利用透明圈法从袋装降解的笋干中分离到一株分解纤维素的细菌菌株. 该菌株呈长杆状、革兰氏染色为阳性、产芽孢,命名为BSX5.其生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析,发现该菌株与Bacillus subtilis的同源性为99%,系统发育树分析与Bacillus subtilis遗传关系最近,确定该菌株为Bacillus subtilis. 采用以3,5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为底物,测定不同培养条件下BSX5菌株的酶活力,结果最适产酶时间为8-12 h,最适产酶温度为50 ℃,最适产酶pH值为5.5～6.5.     

一株产壳聚糖酶芽孢杆菌的分离及鉴定

采用透明圈法,从黄河三角洲地区的腐败落叶分离出9株产壳聚糖酶的菌株。再经菌株分离纯化、液体发酵复筛及酶活研究,确定其中1株为壳聚糖酶高产菌株,命名为XHT-0903。通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定,确定XHT-0903为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。其液体发酵酶活力达20 U/mL,具有较好的开发及应用价值。     

浓香型皇台大曲可培养细菌群落结构及其产淀粉酶的研究

采用稀释平板法,从浓香型皇台大曲中分离纯化出73株细菌菌株,经PCR扩增其16S rDNA并测序,比对分析发现这些纯化的细菌菌株中有23株16S rDNA序列各异的可培养细菌,这些菌株分别为Bacillus licheniformis16株、Bacillus subtilis2株、Bacillus amyloliquefaciens1株、Bacillus cereus1株、Bacillus atrophaeus1株、Bacillus sonorensis1株和Brevibacillus sp.1株;采用透明圈法和液态发酵法对大曲中可培养细菌产淀粉酶性能进行检测,结果表明Bacilluslicheniformis、Bacillus subtilis和Bacillus cereus的一些菌株产淀粉酶的活性较高,其中,Bacillus licheniformis的数量最多,是重要的白酒酿造功能菌。     

骆驼刺源产乳酸的地衣芽孢杆菌分离鉴定和菌株特性研究

为了探讨产乳酸的芽孢杆菌对青贮发酵的作用。以青贮三个月的豆科牧草疏叶骆驼刺为材料,进行MRS培养基分离、纯化细菌,革兰氏染色,芽孢染色,细胞形态学观察,生理生化特性鉴定和16S rDNA序列分析。结果显示,菌株杆状,G+,有芽孢,产乳酸;16S rDNA测序结果显示该菌株与模式菌株ATCC 14580的相似性为99.3%。结果表明,该菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

传统豆瓣辣酱中高产蛋白酶芽孢杆菌的筛选及鉴定

目的:从贵州传统豆瓣辣酱中筛选高产蛋白酶菌株,并对其进行鉴定,以获得高产蛋白酶菌株,为豆瓣辣酱生产提供优良菌种。方法:采用脱脂牛乳平板法,初筛产蛋白酶菌株;比浊法测定各菌株生长曲线,了解各菌株的对数生长期;牛津杯法及Folin法对菌株所产粗酶液活性进行定性与定量分析,以筛选出高产蛋白酶菌株,并对其进行鉴定。结果:筛选获3株高产蛋白酶菌株A-1、A-2、A-3,经菌种形态学鉴定、生理生化实验及16S r DNA分子序列分析将其鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其对数生长期分别为4~18、6~18、10~20 h;其蛋白酶活力分别为137.042、165.560、103.286 U/m L。     

一株耐盐性蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究

通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,对其进行He-Ne激光诱变,获得遗传稳定性良好的突变株DB-12-16,其所产蛋白酶的酶活最高可达132U/mL,此外,还可耐受25%浓度的氯化钠。酶学性质研究结果表明:突变株所产蛋白酶具有较高的温度和pH适应性。作为一种耐盐且高产蛋白酶的菌,该突变株在食品生产及环境修复等方面有极为广阔的应用前景。     

天祝放牧牦牛生活环境土壤中一株产凝乳酶细菌的分离与鉴定

筛选高产凝乳酶细菌,并对其进行鉴定和产凝乳酶活力测定。利用酪蛋白培养基从天祝放牧牦牛生活环境土壤中筛选高产凝乳酶细菌,利用形态观察、生理生化检测、16S rDNA 序列分析对其进行鉴定,并采用Arima法和福林法分别测定凝乳酶活力和蛋白水解活力。获得18 株产凝乳酶细菌,其中菌株D3.11 产凝乳酶活力相对最高,鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),其在麸皮培养基中发酵72 h 产凝乳酶活力高达89.56 SU/ml,蛋白水解力为21.27U/ml。菌株D3.11 是一株高产凝乳酶细菌,可作为候选菌株进行进一步研究。     

酿造环境中细菌的筛选及代谢产物研究

研究酿造环境中细菌组成,并进一步筛选出10株产风味物质明显的细菌,通过菌种形态特征、生理生化鉴定、16s rDNA测序分析,1#菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);2#、5#、6#、8#、9#菌株为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans);3#菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis);4#菌株为多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymyxa);7#、10#菌株为环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)。分析这10株细菌的固态培养代谢产物,能够产生多种芝麻香典型呈味物质。     

蔗糖酶产生菌的分离鉴定及酶学性质的研究

以蔗糖为唯一碳源筛选培养基,从高糖土壤筛选出1株分离出一株产蔗糖酶活力较高的细菌菌株,编号为L23。根据生理生化特性和16S rDNA序列,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。对该菌所产蔗糖酶的性质研究结果表明:酶的最适pH为3.6,最适反应温度为40℃,在30~40℃范围内稳定。     

一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

从郑州奶牛场土壤样品中分离到一株芽孢杆菌,命名为A—19菌株。该菌株有较高的蛋白酶活性,37℃、pH7．0培养48h后,其蛋白酶活力可达63．5U/mL。菌体生长专性需氧,有运动性,粗糙型菌落,氧化酶试验阳性,DNA（G＋C）的摩尔分数为47％。该菌株的16SrDNA序列与芽孢杆菌属有很高的同源性,Bacillus vallismortis（99．61％）,B．subtilis（98．81％）,B．amyloliquefaciens（98．95％）,B．licheniformis（97．93％）。通过其生理生化特征和16S rDNA序列相似性的系统发育分析,确定A—19菌株属于芽孢杆菌属。该菌的16S rDNA序列已被GenBank收录,序列登陆号为EU561347。     

青海牧区产凝乳酶细菌多样性分析

为发掘性能优良的产凝乳酶细菌菌株,开发新型细菌凝乳酶。本文采用酪蛋白培养基从采自青海牧区土壤样品分离筛选产凝乳酶细菌,利用菌株16S rDNA基因序列对菌株进行鉴定并分析其多样性。结果表明,36个样品中分离得到21株产凝乳酶细菌,沉淀圈与菌落直径比值为1.41~5.5;分离菌株在不同培养基上凝乳酶和蛋白水解活性有明显差异,麸皮汁培养基中凝乳酶活性为11.3~1215.6 SU/mL,蛋白水解活力为14.6~59.5U/mL;21株菌中有14株菌属芽孢杆菌属(Bacillus),是产凝乳酶细菌的优势属;多样性指数分析表明,该地区产凝乳酶细菌具有丰富多样性。     

红茶菌菌相分析及优势菌的分离与鉴定

目的：了解红茶菌菌相结构及获取发酵菌株。方法：采用16S rDNA高通量测序技术和传统微生物培养法对红茶菌菌相组成和优势菌株进行分析。结果：高通量测序显示红茶菌的细菌群落丰富度与多样性大于真菌。结论：细菌中驹形氏杆菌(Kohmagataeibacter)、醋酸杆菌属(Acetobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus) 为优势菌株,真菌中德克酵母属(Dekkera)、接合酵母属(Zygosacchaormyces)为优势菌株。传统平板培养法分离得到7株醋酸菌、3株酵母菌和1株乳酸菌,其中食糖驹形氏杆菌(Komagataeibacter saccharivorans)1株、腐烂苹果醋酸杆菌(Acetobacter malorum)1株、木驹形氏菌(Komagataeibacter xylinus)4株、醋酸杆菌属(Acetobacter)1株、拜耳接合酵母 (Zygosaccharomyces bailii)2株、布鲁塞尔德克酒香酵母(Dekkera bruxellensis)1株、植物乳杆菌(Lactobacillus.plantarum)1株。     

桃褐腐病菌拮抗酵母的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

以北京平谷桃果实表皮上分离得到的45株酵母菌为出发菌株,采用平板对峙法,筛选对桃褐腐病菌（Monilinia fructicola）具有较高拮抗作用的生防酵母菌。结果表明,共筛选出具有较好抑制效果的酵母菌6株,其中菌株MLL-9-1拮抗活性最强,对桃褐腐病菌的抑菌率达77.91%;活体筛选试验结果表明,该菌株对桃褐腐病的抑制率达50.30%。生防相关性状检测结果显示,该菌株能够产生蛋白酶,透明圈直径达30.5 mm,说明该菌主要通过分泌蛋白酶达到抑制病原菌的效果。经形态学、生理生化试验及26S rDNA序列分析,鉴定该菌为葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）。     

牛蒡根际耐Cd2+菌株的分析

采用纯培养法,从牛蒡根际土壤中分离耐Cd2+菌株,对耐Cd2+菌株的耐性和种群多样性进行分析。结果显示:分离到10株耐Cd2+菌株,经16S rDNA分子鉴定,耐Cd2+菌株分别属于Bacillus subtilis、Enterobacteraerogenes、Enterobacter ludwigi、Klebsiella sp.、Pectobacterium carotovorum、Pseudomonas sp.。其中,Pectobacterium carotovorum NP22、Enterobacter ludwigii NP23、Pseudomonas sp.NP39等3株菌株的对Cd2+耐性最高,在Cd2+质量浓度为400mg/L固体LB培养基中可正常生长。     

腐败醋中微生物的分离鉴定及乳酸链球菌素对其抑制作用

从腐败醋中分离出84 株不同微生物菌株,通过对其形态学观察、革兰氏染色、16S rDNA测序,并与GenBank中已知序列进行比对,以及进一步测定16S～23S ITS,发现其由20 株解淀粉芽孢杆菌、12 株地衣芽孢杆菌、6 株芽孢杆菌属1NLA3E、12 株蜡样芽孢杆菌、4 株巨大芽孢杆菌、3 株短短芽孢杆菌、2 株短小芽孢杆菌、11 株凝结芽孢杆菌、12 株类芽孢杆菌、1 株耐酸乳酸菌、1 株产气荚膜梭菌组成。除耐酸乳酸菌外,均为革兰氏阳性芽孢杆菌。通过管碟法和比浊法测定了乳酸链球菌素（Nisin）对以上菌株的抑菌效价,显示Nisin对腐败醋中分离得到的微生物菌株均具有明显的抑菌或杀菌活性。     

丹江镇辣椒红酸汤细菌菌群多样性分析及抗食源性致病菌乳酸菌筛选

以贵州丹江镇传统辣椒红酸汤为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序技术进行细菌菌群多样性分析,结合微生物纯培养技术和双层平板法从中分离优势乳酸菌,通过分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并筛选抗食源性致病菌乳酸菌。结果表明,辣椒红酸汤样品中的优势细菌门为厚壁菌门（Firmicutes）和变形菌门（Proteobacteria）;优势细菌属为乳杆菌属（Lactobacillus）。从辣椒红酸汤样品中共分离得到17株乳酸菌,经鉴定,11株为干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、3株为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）、1株为副干酪乳杆菌亚种（Lactobacillus paracasei subsp.）、1株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、1株为乳酸杆菌（Lactobacillus sp.）,其中4株乳酸菌具有较好的产酸和抑菌性能,且干酪乳杆菌ST7-14的抑菌能力最好,对蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）ST2-1和阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）ST2-6的抑菌圈直径分别为37.0 mm和31.5 mm。     

抗副溶血弧菌海洋微生物的筛选、鉴定及抑菌谱研究

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物,以副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）为指示菌,采用平板划线法对拮抗菌株进行初筛,琼脂扩散法进行复筛,并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并研究其抑菌谱。结果表明,从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物,经过初筛,得到10株有抑制效果的拮抗菌,经过复筛得到1株对副溶血弧菌有较好抑制效果的菌株,编号为NO.5.10.1-1,抑菌圈直径为（18.50±0.28） mm,该菌被鉴定为中村芽孢杆菌（Bacillus nakamurai）。除金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）外,该菌对7株致病菌均有抑制作用,具有较广的抑菌谱。     

西藏牦牛粪和乳源中益生菌的筛选与鉴定

采用钙透明圈法从西藏地区牦牛粪和乳源中分离、筛选益生菌，通过形态观察及分子生物学技术进行菌种鉴定，并对其生长特性、产酸能力、耐胆盐、酸、人工胃液能力及抑制大肠杆菌能力进行分析。结果表明，共分离、筛选出25株乳酸菌，经鉴定7株为益生菌，分别为1株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），2株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）和4株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracaseium）。其中植物乳杆菌B2具有良好的生长优势、产酸能力（发酵终pH值在4左右）、耐酸（pH值为4）、耐胆盐（0.6%）、耐人工胃液能力（存活率为57.4%），且抑制大肠杆菌效果较好（抑菌圈直径为22.0 mm）。     

野生苎麻微生物脱胶优势菌的选育及其应用

为实现对野生苎麻的生物脱胶,采用平板稀释法从沤麻液中分离得到37株菌株,并采用平板透明圈法和DNS酶活测定法筛选野生苎麻生物脱胶用优势菌株。实验结果表明,TJ03菌株的透明圈与酶活值均为最大,其水解透明圈与菌落面积的比值为19.98,果胶酶酶活和甘露聚糖酶酶活分别为9.54、8.63 U/mL。最后对TJ03的脱胶条件进行了研究,得到其最佳脱胶条件为:初始pH值7.5,浴比1∶25,接种量15%,发酵时间4 d,发酵温度35℃。在上述条件下,野生苎麻生物脱胶后残胶率为14.09%,实现了纤维从韧皮中分离。     

纳豆菌的分离、鉴定及产蛋白酶液态发酵条件的优化

利用奶粉豆粕培养基,采用稀释平板分离法,以H/C(透明圈直径/菌落直径)为指标,从日本传统食品纳豆中分离出9株蛋白酶产生菌。将这些初筛菌株进行发酵培养,采用Folin-酚法测定酵上清液的蛋白酶活性,选出蛋白酶活性最高的菌株H2,并依据形态特点和主要生理生化特征,鉴定为芽孢杆菌纳豆亚种(Bacillussubtilis sub.Natto)。最后以蛋白酶活性为指标,考察培养基初始pH值、温度、装液量、接种量和种龄等因素对H2菌株液态发酵的影响。结果表明,该菌株液态发酵产蛋白酶的适宜条件是:培养基初始pH值7、培养温度40℃、装液量40 mL/250 mL、接种量3%、种龄25 h。