芝麻蛋白酶解物的抗氧化活性研究

对芝麻蛋白酶解物进行非油体系及油体系的体外抗氧化活性研究.结果表明,随酶解物添加量的增多,其总还原能力、对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力也随之变强;酶解物可以有效地抑制猪油、亚油酸和Fe2+诱发卵黄脂蛋白过氧化体系的氧化;在卵磷脂蛋白体系中,酶解物的抗氧化效果与维生素C的效果相近.     

山羊乳酪蛋白抗菌肽分离纯化及结构鉴定

为制备山羊乳酪蛋白抗菌肽,阐明抗菌肽的构效关系,采用LS-106大孔吸附树脂、凝胶色谱和高效液相色谱(HPLC)对山羊乳酪蛋白酶解物进行逐级分离纯化,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)为指标,对分离组分进行抑菌试验,采用预测软件、质谱与圆二色谱对分离抗菌肽的一、二级结构进行预测和鉴定。试验结果表明:(1)大孔吸附树脂分离酶解液,其中体积分数为60%的乙醇洗脱组分抑菌作用较强。(2)凝胶色谱将60%乙醇洗脱组分分离成3个色谱峰,峰3抑菌作用较强。(3)HPLC将峰3分离为2个组分F3-1和F3-2,其中F3-1对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为297.9μg/mL,MBC为1191.6μg/mL;F3-2对大肠杆菌的MIC和MBC分别为309.2,1236.8μg/mL,对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为154.6μg/mL,MBC为618.4μg/mL。(4)F3-1和F3-2的一级结构分别为Leu-Gly-Gly-Val-Gln-Glu-Pro-Asp-Pro-Asn-Thr-Asp-Val-Arg(1497.76)和Val-Val-Asn-Leu-Glu-GluLys-Leu-Pro-Gly(1242.66)。F3-1和F3-2均属阴离子抗菌肽,虽然其抑菌作用稍弱于阳离子抗菌肽,但是其二级结构为无毒性的无规则卷曲结构,与α-螺旋结构抗菌肽相比,在食品、药品和化妆品等安全应用方面潜力巨大。     

山羊乳酪蛋白酶解条件优化及其抗菌活性研究

为制备山羊乳酪蛋白抗菌肽,以新鲜无抗山羊乳为原料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶在最适条件下酶解山羊乳酪蛋白,以沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为指标,筛选最适水解酶,并通过单因素实验和正交实验确定水解酶水解山羊乳酪蛋白的最适条件。结果表明:木瓜蛋白酶是酶解山羊乳酪蛋白的最佳蛋白酶,其酶解物对沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;确定了木瓜蛋白酶水解山羊乳酪蛋白的最佳工艺。     

山羊乳酪蛋白酶解工艺及抗氧化性研究

为了制备山羊乳酪蛋白活性肽,选用中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶,采用对比和正交试验方法,研究了山羊乳酪蛋白单酶和复合酶的酶解工艺,测定了山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数,优选出了山羊乳酪蛋白的酶解工艺参数。结果表明：山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数为8.5379 mmol/g。单酶中胰蛋白酶和中性蛋白酶对山羊乳酪蛋白的水解度较大,木瓜蛋白酶较小。胰蛋白酶对山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺：加酶量2500 U/g,pH 7.5,50 ℃下酶解2 h。中性蛋白酶和胰蛋白酶复合以及中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶三种酶复合的水解度较大,其水解度、平均肽链长度和平均相对分子量分别为17.34%、21.16%,5.77、4.73和692、567 u。     

牦牛乳酪蛋白酶解物对H_2O_2诱导的氧化损伤HepG2细胞蛋白羰基含量及抗氧化酶活性的影响

为探究牦牛乳酪蛋白酶解物缓解氧化应激损伤的作用,利用过氧化氢(H_2O_2)建立氧化损伤细胞模型,以细胞蛋白质羰基含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性为指标评价牦牛乳酪蛋白酶解物的活性。结果表明,利用酶解物处理H_2O_2损伤的HepG2细胞,能够缓解H_2O_2诱导的蛋白质羰基含量升高,并增加细胞内SOD、CAT、GSHPx的活性,从而提高机体抗氧化能力,缓解H_2O_2引发的氧化应激状态。研究证明,牦牛乳酪蛋白酶解物具有缓解氧化应激损伤的作用,为牦牛乳资源的进一步开发利用及乳源活性肽应用于抗氧化功能食品提供了依据。     

绿豆蛋白酶解物抗氧化活性与其结构、氨基酸组成的相关性

本试验以碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶四种不同来源的蛋白酶酶解绿豆蛋白,测定酶解物的抗氧化能力,结合傅里叶红外光谱技术（FTIR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、圆二色谱（CD）以及氨基酸分析仪,分析酶解物的氨基酸组成以及抗氧化活性与结构变化的相关性。结果表明,绿豆蛋白4 h中性蛋白酶酶解物抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除率、羟自由基清除率分别达到71.03%、51.94%,TBARS值达到0.4045 mg/L,Fe2+螯合率达到52.31%;结合SDS-PAGE、FTIR、CD等分析得出:绿豆蛋白酶解物的抗氧化能力与其分子量大小、二级结构构象及氨基酸组成变化紧密相关,与绿豆蛋白相比,绿豆蛋白酶解物的α-螺旋结构含量增加了4.12%、β-折叠结构含量降低了19.99%,而抗氧化活性与其α-螺旋含量的增加、β-折叠含量的降低密切相关;影响抗氧化活性的疏水氨基酸增加了0.208 g/100 g,芳香氨基酸增加了0.207 g/100 g,分子量低于10 kDa的小分子量酶解物具有更好的抗氧化性。综合以上研究结果证实绿豆蛋白酶解物活性与其α-螺旋、β-折叠的相关性较大。     

金华火腿副产品蛋白酶解物的功能特性与抗氧化活性研究

目的:研究以金华火腿副产品为原料制备的蛋白酶解物的功能特性与抗氧化活性.方法:分析金华火腿副产品蛋白酶解物在不同pH值条件下的乳化活性、乳化稳定性、起泡力以及泡沫稳定性;通过体外试验考察不同浓度的酶解物的自由基清除能力、还原力以及抑制脂质过氧化能力.结果:在体系pH9.0时,金华火腿副产品蛋白酶解物显示出较好的乳化与起泡性能.酶解物的抗氧化活性与其浓度有一定的相关性,当酶解物质量浓度为7.5 mg/mL时,超氧阴离子的清除效果最理想;当酶解物质量浓度为10 mg/mL时,DPPH自由基清除率为32%,还原力为0.79.与空白对照组相比,不同浓度的蛋白酶解物均能够抑制亚油酸的自氧化,且随着浓度的增加,抑制效果明显.结论:在碱性条件下,金华火腿副产品蛋白酶解物具有较好的功能特性.金华火腿副产品蛋白酶解物具有一定的体外抗氧化活性.     

乳清蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究在不同的酶种类、[E/S]、酶解时间下,乳清蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,在胃蛋白酶37℃,[E/S]为0.15%,水解温度水解时间2 h;胰蛋白酶[E/S]为0.4%,水解温度50℃,水解时间2 h的条件下,乳清蛋白的酶解物有较强的抗氧化活性。     

牛乳酪蛋白抗氧化乳基料的制备及其分离纯化

为制备具有低过敏性和抗氧化作用的牛乳酪蛋白活性肽乳基料,以水解度和·OH清除率为指标,先后采用大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化酪蛋白酶解物。结果表明：胰蛋白酶和中性蛋白酶组合酶解牛乳蛋白6h,其产物具有较高的水解度(36.80%)和较好的抗氧化活性,·OH清除率的半抑制浓度(IC50)值为3.12mg/mL;酶解物通过LS106大孔吸附树脂分离、纯化后,体积分数为75%的乙醇洗脱液具有较高的抗氧化活性,其·OH清除率的IC50值为0.14mg/mL;体积分数75%的乙醇洗脱组分经凝胶过滤色谱分离、纯化后,得到4个不同相对分子质量肽段,其中抗氧化活性较强肽段的相对分子质量为355.38～854.89,其·OH清除率的IC50值为0.09219mg/mL,与酶解物相比其抗氧化活性扩大33.84倍;相对分子质量小于3238.05的多肽占纯化后多肽总量的60.32%,30.09%多肽是由2～8个氨基酸组成的寡肽。牛乳酪蛋白经复合酶酶解后其抗氧化活性明显提高,过敏性明显降低,喷雾干燥后可以直接制备乳基料。     

麦胚蛋白酶解物对小鼠抗氧化作用的研究

研究不同剂量麦胚蛋白酶解物WGPHs对小鼠抗氧化作用的影响。80只昆明系小鼠,雌雄各半,分为基础饲料对照大组和高脂饲料对照大组,各大组随机分为四小组,分别为对照组、WGPHs低剂量组、WGPHs中剂量组、WGPHs高剂量组。对照组灌胃生理盐水,其余三组分别按100、500、1000mg/kg·d的剂量灌胃WGPHs水溶液。各组连续灌胃30d后,处死小鼠,检测小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果表明:WGPHs在显著提高小鼠血清SOD和GSH-Px活性(p<0.05)的同时能显著降低血清MDA含量(p<0.05),其作用效果随着WGPHs剂量的增加而增大,WGPHs可增强小鼠的抗氧化作用。     

羊乳酪蛋白酶解物的改善睡眠作用

该文研究了羊乳酪蛋白酶解物（Goat Milk Casein Hydrolysates,GMCH）促进睡眠的功效及作用机制。采用保健食品规范方法（睡眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验）判定GMCH高、中、低剂量组（700、400、100 mg/kg）改善小鼠睡眠的功效。进一步通过旷场实验深入探究GMCH对小鼠行为学的影响,最后测定小鼠下丘脑中睡眠相关神经递质分泌含量。结果表明,GMCH无直接睡眠作用,与空白组相比,GMCH低、中、高剂量组小鼠睡眠潜伏期分别缩短42.86%、56.63%、91.18%,睡眠时间分别延长34.46%、48.83%、63.19%,入睡率分别提高20.00%、60.00%、80.00%。在旷场中的运动总路程缩短,中央停留次数、中央停留时间和静止总时间均增加。下丘脑中GABA含量显著升高64.72%、41.16%、56.19%,5-HT含量显著升高25.87%、33.50%、43.67%、DA含量显著降低7.02%、12.85%、13.72%,NE含量显著降低18.73%、23.37%、29.41%。综上,GMCH具有改善小鼠睡眠的作用,有一定镇静作用,可能通过调节小鼠下丘脑中的神经递质水平起到促睡眠作用。     

羊乳酪蛋白酶解物对秀丽线虫衰老的改善作用

该研究利用秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）模型研究了羊乳酪蛋白酶解物（Goat Milk Casein Hydrolysates,GMCH）的抗衰老及体内外抗氧化作用。通过对比GMCH实验组和大肠杆菌对照组秀丽线虫的寿命、运动能力、脂褐素水平等指标来研究GMCH的抗衰老作用,通过自由基清除实验以及测定线虫体内抗氧化酶活性评价GMCH的体内外抗氧化活力,同时测定秀丽线虫在过氧化氢、百草枯及热应激条件下的寿命。结果表明,与对照组相比,喂食0.1 mg/mL羊乳酪蛋白酶解物的线虫的平均寿命延长9.33%,体内脂褐素水平降低了65.00%,同时GMCH对线虫的生殖能力和运动能力没有负面影响,对线虫氧化应激和热应激有一定的保护作用;GMCH具有一定的体外抗氧化能力并且能够提高线虫体内抗氧化酶活力,与对照组相比,实验组SOD活力提高43.30%、CAT活力提高124.40%、GSH活力提高176.90%、MDA含量降低78.70%。综上所述,GMCH能够延长线虫的寿命,降低线虫体内脂褐素积累,提高线虫在应激条件下的抵抗能力和体内抗氧化酶活力,具有较好的抗衰老活性。     

酪蛋白水解物的酶法修饰与ACE抑制活性变化

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物,其水解度为11.2%,IC50为47.1μg/mL。再应用相同的酶对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰,考察底物浓度、温度和酶添加量对类蛋白反应的影响,并制备5个不同的修饰产物测定其ACE抑制活性和IC50值。结果表明,修饰产物的ACE抑制活性随修饰程度(游离氨基减少量)的增加而提高,并且都高于未经修饰的酪蛋白水解物。当游离氨基减少量为154.65μmol/g(蛋白)时,修饰产物的IC50值可降至0.6μg/mL。毛细管电泳分析结果显示类蛋白修饰后水解物的多肽组成情况发生明显变化。研究结果证明酪蛋白水解物的ACE抑制活性可以通过类蛋白反应的修饰作用而提高。     

苹果酵素复合型羊乳的制备及抗氧化活性研究

苹果酵素具有良好的抗氧化活性,为了增加发酵羊乳的抗氧化活性,作者采用苹果酵素与复合发酵剂发酵羊乳,并研究其理化指标及抗氧化活性.依据发酵羊乳的理化指标和感官评价指标,确定苹果酵素添加质量分数、发酵剂类型和发酵剂添加质量分数:苹果酵素添加质量分数4％,B发酵剂添加质量分数为1％时,发酵羊乳蛋白质含量为3.85 g/hg,...     

高活性酪蛋白抗氧化肽的制备方法研究

采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解,得到抗氧化活性较好的酪蛋白水解物,并且水解物在木瓜蛋白酶作用下进行类蛋白反应制备出高活性酪蛋白抗氧化肽。第一步制备酪蛋白水解时酶添加量为500 U/g酪蛋白、温度45℃、底物浓度5%、反应时间2 h。第二步类蛋白反应的最优条件为：酶添加量为500 U/g水解物、温度30℃,底物浓度50%、作用时间5.5 h。毛细管电泳结果确认,类蛋白反应修饰后抗氧化肽的组成情况发生变化。抗氧化活性分析结果表明,类蛋白反应修饰后的酪蛋白抗氧化肽对两种自由基的清除能力显著提高。     

具有免疫调节作用的酪蛋白水解产物制备条件的确定

以酪蛋白为原料,利用酶解法制备具有免疫调节作用的水解产物。用MTT 法测定不同水解条件下胰蛋白酶水解酪蛋白的水解产物对小鼠脾脏细胞免疫刺激指数,并以免疫刺激指数作为指标,确定出最佳的水解条件。结果表明,酪蛋白在不同水解条件下的水解产物,用1640 培养液配成浓度为10μg/ml,采用MTT 法测定小鼠脾脏淋巴细胞免疫刺激指数最大值为2.77,其水解条件为底物浓度4%、酶与底物比为1:90。     

酪蛋白水解肽对家兔细胞因子的影响

为了探索酪蛋白水解肽对家兔血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的影响,采用胰蛋白酶水解得到酪蛋白水解物溶液,经超滤后得酪蛋白水解肽。将所得水解多肽以3种方式(口服、腹腔注射、耳静脉注射)对家兔给药,分别在给药3、2、2h后,用ELISA试剂盒测定血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的浓度。结果表明,各种作用方式IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β在家兔体内的含量都明显上升,但腹腔注射酪蛋白水解多肽较其他方式作用明显,而IL-1β、IL-1ra、IL-12、IFN-γ的含量降低,最明显的作用方式为腹腔注射,说明酪蛋白水解肽通过肠黏膜系统对细胞因子网络起着重要的调节作用。从给药途径看,腹腔注射的作用效果最为显著,其次是静脉注射,口服灌胃虽达到显著水平,但变化相对较小。说明酪蛋白水解肽主要是通过肠黏膜发挥作用,可通过制备肠溶性保健食品调节人体亚健康,同时为营养组学得研究奠定基础。     

三种氨基酸添加下酶法修饰酪蛋白水解物的ACE抑制活性

采用碱性蛋白酶水解酪蛋白,制备水解度为12.4%、IC50为42.19μg/mL的酪蛋白水解物。在添加外源氨基酸的情况下对水解物进行类蛋白反应修饰,并响应面法研究氨基酸添加量、酶添加量、反应温度及3种氨基酸的影响。结果表明:氨基酸添加量、反应温度、氨基酸种类对修饰反应影响显著,而酶添加量的影响不大;分别添加苯丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸制备3个酪蛋白水解物修饰产物,其IC50降低至21.03～25.13μg/mL,表明添加外源氨基酸可提高修饰产物的体外ACE抑制活性,但添加不同氨基酸的影响不显著。