发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr-Asp-Asp的稳定性研究

以DPPH和ABTS自由基清除率为考查指标,探究不同储存时间、pH值、金属离子、储存温度及人工模拟消化系统对兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr(DDDY)和Asp-Tyr-Asp-Asp(DYDD)抗氧化活性的影响,并进一步研究2种发酵多肽的稳定性。结果表明：随着储存时间的延长,DDDY和DYDD的DPPH和ABTS清除率均明显下降,DPPH清除率在储存16 h后分别下降了约73.43%和73.22%;DDDY和DYDD在酸性或弱酸性环境下的稳定性较好,当pH值为2.0～12.0时,其ABTS清除率分别下降了约66.00%和70.81%,而对DPPH清除率的影响不大;金属离子会明显提高2种发酵多肽的ABTS清除率,其中受Na⁺、K⁺和Fe³⁺这3种金属离子影响较大;过高和过低的储存温度均会降低2种发酵多肽的DPPH和ABTS清除率,其中DYDD的ABTS清除率受储存温度影响较大;DDDY和DYDD的抗氧化活性在人工模拟消化系统中随着消化作用时间的延长均明显降低。2种发酵多肽的稳定性受环境影响较大,未来可通过包...     

粉葛与葛根多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

该研究通过脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型,对粉葛粗多糖（FGC）、葛根粗多糖（GGC）以及粉葛均一多糖（FGJ）的抗炎作用进行比较。用CCK8试剂盒检测FGC、GGC以及FGJ对细胞活力的影响;相关试剂盒检测细胞产生NO、TNF-α、IL-6的分泌情况;蛋白印迹法检测NF-κB、Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达,QPCR检测TNF-α、IL-6的mRNA表达,通过流式检测活性氧的产生。结果显示,在浓度为10、20、40 μg/mL时,FGC、GGC以及FGJ对细胞均没有毒性（p>0.05）。各浓度的FGC、FGJ不能抑制LPS诱导产生的的NO、TNF-α、IL-6（p>0.05）,GGC在浓度为40 μg/mL时,对NO、TNF-α、IL-6的抑制率达到38.46%、52.90%、55.87%,可以抑制细胞内ROS释放,在10、20、40 μg/mL时抑制率达到37.28%、41.05%、54.09%,在浓度为40 μg/mL时,对iNOS、COX-2、p-p65、p-IκBα的抑制率达到29.27%、95.04%、27.18%、28.45%,对Nrf2、HO-1蛋白的表达有促进作用,在浓度40 μg/mL时显著地抑制IL-6与TNF-α的mRNA表达,抑制率达到57.70%、81.68%。结果证明,GGC与FGC、FGJ相比抗炎活性更加明显,并且其抗炎作用是通过NF-κB与Nrf2/HO-1两条通路来实现的。     

兜唇石斛发酵多肽抗氧化活性与氨基酸结构的关系

前期采用微生物固态发酵法获得兜唇石斛多肽DPP,通过液相质谱发现DDDY、DYDD、MAK、AVTF、RSS、MLCA六条多肽序列。为进一步研究DPP抗氧化功能与其氨基酸结构的关系,该研究借助QSAR模型,采用体外抗氧化实验、人肝癌细胞（HepG2）的CAA试验和红细胞溶血试验评价多肽的抗氧化能力,通过相关性分析研究氨基酸结构对抗氧化肽活性的影响。结果表明：六条合成多肽及母肽均具有抗氧化活性（P<0.05）。其中MLCA表现出最强的DPPH、ABTS+自由基清除能力、铁还原力和红细胞溶血保护能力,IC50分别为0.89、0.99、1.34、0.68mg/mL;AVTF的细胞抗氧化活性最强,EC50为0.02mg/mL。供氢供电子氨基酸以及疏水性氨基酸有助于DPP的抗氧化活性。N端氨基酸为Met,N端第二位为Leu、Val或C端第三位为Leu是各位点的有利氨基酸残基。另外,还发现Ala可以促进多肽的抗氧化作用,Tyr位置的改变对多肽的抗氧化能力的影响较小。该研究为深入探究抗氧化肽的构效关系提供了理论依据,为抗氧化肽的进一步研究奠定基础。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

山楂酸调控STAT3磷酸化保护LPS致RAW264.7细胞炎症反应的研究

探讨山楂酸对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的保护作用及其对信号转导和转录活化因子3(STAT3)磷酸化的抑制作用.采用Griess法检测一氧化氮(NO)的生成,ELISA法检测细胞中白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和白介素10(IL-10)的释放量;Western blot法检测诱导型一氧化氮合...     

基于Caco-2单层细胞模型的兜唇石斛多糖的转运机制研究

以兜唇石斛多糖(DAP)为研究对象,借助人小肠上皮细胞Caco-2(the human colon carcinoma cell line)单层细胞模型,体外模拟DAP在小肠中的转运情况。在前期得到的DAP为基础,探究DAP的粘度对其转运情况的影响,同时建立Caco-2细胞的模型,采用MTT法测定DAP对Caco-2细胞存活率的影响,并考察了DAP在小肠的吸收转运的特征。实验表明:DAP的粘度与其在Caco-2细胞中的转运能力呈负相关趋势,粘度越大,转运速率越慢;在测定TEER值及荧光素钠渗透情况,观察Caco-2细胞的形态,建立了良好的细胞模型;DAP的存在下,Caco-2细胞的存活率为91.8%以上,因此DAP对Caco-2细胞存活无影响;DAP在Caco-2不同单边层的转移率分别为0.35%±0.02%和0.32%±0.02%,表观渗透率分别为(0.42±0.02)×10-6 cm/s和(0.19±0.18)×10-6 cm/s,表明DAP在小肠中不易被吸收。本研究所得结果为进一步研究DAP在肠道中的吸收机制奠定基础。     

毛酸浆果提取物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

该文探讨了毛酸浆果提取物（Physalis pubescens L. Fruits Extract,PPFE）对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用。采用噻唑蓝比色法（MTT）确定细胞毒性和增殖活性,格里斯法（Griess）、酶联免疫法（ELISA）、荧光探针法、中性红吞噬实验测定体外培养的巨噬细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、活性氧（ROS）含量以及吞噬率;流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡情况,荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TNF-α、IFN-γ以及IL-6等细胞因子mRNA表达水平。结果显示：运用UHPLC-Q-TOF-MS测定PPFE化学成分分析,共鉴定出14种黄酮类物质。PPFE作用RAW264.7细胞的安全浓度在25~250 μg/mL范围内,与空白组相比,毛酸浆果提取物质量浓度为25 μg/mL时免疫增强效果最佳,其细胞增殖率、NO释放量、吞噬率、相对活性氧水平、TNF-α、IFN-γ、IL-6的分泌量分别为130.53%、27.79 μmol/L、189.88%、137.75%、150.54 pg/mL、119.36 pg/mL、15.41 pg/mL。PPFE治疗组的细胞周期的G0/G1期、S期、G2/M期百分比分别为53.08%、17.40%、29.52%。细胞凋亡率与空白组相比降低了52.80%,同时极显著（p<0.01）上调TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达。综上可知,PPFE通过调节RAW264.7细胞吞噬功能、分泌免疫因子、细胞周期分布及凋亡情况,以及上调细胞因子mRNA表达水平,增强RAW264.7细胞免疫调节作用。     

绿豆寡肽对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用

目的:将绿豆寡肽(MBPs)用于脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7的炎症反应中,观察其对炎症是否有抑制作用。方法:用LPS构建细胞炎症模型,采用WST-1法检测细胞增殖能力,中性红法检测细胞吞噬能力,试剂盒法检测巨噬细胞髓过氧化物酶(MPO)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)含量,ELISA法检测巨噬细胞细胞因子TNF-α、白介素-1α(IL-1α)、白介素-6(IL-6)的分泌量。结果:MBPs能显著缓解LPS对巨噬细胞增殖的抑制作用并下调其吞噬能力(P0.05);MBPs能显著改善LPS诱导巨噬细胞MPO、LDH、GSH的水平(P0.05);MBPs能显著抑制促炎性细胞因子TNF-αIL-1α、IL-6水平的上升。结论:MBPs通过调节巨噬细胞趋化吞噬能力、胞内酶解消化和降低促炎性细胞因子的水平达到缓解LPS诱导巨噬细胞炎症的作用,且呈现量效关系,具有一定的抗炎活性。     

混合乳杆菌对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用

利用细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞形成炎症模型,评价混合乳杆菌对RAW264.7细胞的抗炎效果.在LPS刺激的RAW264.7细胞培养基中,添加混合乳杆菌,分析一氧化氮(Nitric oxide,NO)、前列腺素E2(PGE2)、白介素(Interleukin,I...     

琼胶寡糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用

目的:研究琼胶寡糖对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法:采用傅里叶红外光谱法、核磁共振和高效液相色谱法解析琼胶寡糖的分子结构;采用LPS诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,测定琼胶寡糖对RAW264.7细胞活力、细胞内一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和活性氧簇(ROS)水平的影响;采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶p38的表达和磷酸化水平。结果:分子结构鉴定结果显示琼胶寡糖具有β构型半乳糖糖环结构,分子质量范围为1 065.5~1 308.2 u。琼胶寡糖可以提高LPS诱导巨噬细胞系RAW264.7炎症反应后的细胞活力,在0~250 μg/mL剂量下呈浓度依赖性地降低细胞内NO、TNF-α和ROS水平,对LPS诱导MAPK家族激酶JNK、ERK、p38磷酸化水平的升高具有抑制作用。结论:琼胶寡糖能够抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应,可能与阻碍MAPK信号转导有关。     

基于RAW264.7细胞模型的不同茶类抗炎功能特性

茶叶根据经典加工工艺不同分为红茶、绿茶、青（乌龙）茶、白茶、黄茶、黑茶。为探讨不同加工工艺形成的不同茶类的抗炎功能特性,本研究以云南大叶种绿茶、红茶、普洱黑茶、金观音乌龙茶、福鼎大白白茶、君山银针黄茶为材料。采用硝普化钠法和脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞为体外炎症模型评价抗炎活性。结果发现,绿茶、白茶及黄茶对一氧化氮（NO）的清除能力较强,半抑制浓度（IC50）值在99.27¹04.83μg/m L范围内;在六种茶类中,黄茶对脂多糖诱导RAW264.7细胞产生炎症反应的抑制作用最强,其抑制NO产生的IC50值为398.13μg/m L,在浓度为500μg/m L时,其对肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的抑制率分别为69.25%、87.68%;黄茶可在基因转录和翻译水平上,显著下调i NOS基因的转录和翻译。相关性分析表明,茶多酚含量与清除NO的IC50值、抑制细胞产生NO的IC50值、TNF-α以及IL-6产生量均呈显著负相关。表明六种茶类均具有抗炎活性,黄茶对促炎症因子（NO、TNF-α、IL-6）的抑制效果最佳,可通过下调i NOS基因的转录和翻译水平,减少NO产生,从而发挥抗炎功效。      

鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽（DFP）,通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。采用噻唑蓝（MTT）实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分。选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮（NO）浓度及细胞因子如白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌能力,同时还研究了DFP对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于1 kDa的DFP-5对巨噬细胞RAW264.7作用后,可显著（P<0.05）提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且在DFP-5质量浓度为25 μg/mL时效果最好。细胞周期结果表明,DFP-5能够促进RAW264.7细胞的生长,且主要作用在G0/G1期。以上结果表明,鹿胎肽具有增强免疫能力的潜在作用。     

Comparison of Immunomodulatory Effects of Fresh Garlic and Black Garlic Polysaccharides on RAW 264.7 Macrophages

Garlic has a long history to be used for medicine and food purposes. Black garlic, the fermented product of fresh garlic, is considered with better biological activities, such as antioxidant activity, and is developed as an increasingly popular functional food. Polysaccharides are the major components of fresh and black garlic, and immunomodulatory activity is one major pharmacological effect of polysaccharides. Therefore, chemical characteristics and immunomodulatory effects of polysaccharides from fresh and black garlic are investigated and compared in vitro for the 1st time, in order to reveal their molecular and pharmacological differences. It is demonstrated that the molecular weights of polysaccharides from the 2 sources and molar ratios of monosaccharides after acid hydrolysis are greatly variant. The effects of polysaccharides from 2 sources on RAW 264.7 macrophages functions, including promotion of phagocytosis, release of NO, and expressions of several immune‐related cytokines (including interleukin [IL]‐6, IL‐10, tumor necrosis factor alpha, and interferon gamma), were different from each other. The results indicated that fresh garlic polysaccharide exhibited stronger immunomodulatory activities than that of black garlic. Moreover, it is revealed that fructan might be the bioactive component in garlic and it is indicated that during the fermentation treatment, fructan constituents of garlic has degraded, and basically no immunomodulatory effect can be found in black garlic polysaccharides.     

Structural characterisation and immunomodulatory effects of polysaccharides isolated from Dendrobium aphyllum

A crude polysaccharide extract of Dendrobium aphyllum (cDAP, yield 38.15 ± 0.20%) was generated. The D. aphyllum polysaccharide (DAP, M_w 471.586 kDa), purified by DEAE‐Sepharose and Sephadex‐G200 Fast Flow, was composed of mannose (71.3%) and glucose (28.7%), according to GC–MS analysis. Its backbone was composed of β‐d ‐mannopyranose and β‐d ‐glucopyranose residues, as revealed by infrared spectroscopic analysis. Its glycosidic bond was mainly 1, 4‐linked, and the O‐acetyl groups were mainly linked to mannose residues, according to periodate oxidation and Smith degradation analysis. The DAP units polymerised into a filiform‐shaped spatial pattern, as characterised by atomic force microscopy and scanning electron microscopy. DAP treatment enhanced cytokine secretion (nitric oxide, interleukin‐6 and tumour necrosis factor‐α) and pinocytic and phagocytic capacities of RAW 264.7 mouse macrophages. The complement receptor 3 and mannose receptor were identified to be the receptors of DAP on RAW 264.7 cells, indicating that the Akt/mTOR/MAPK and IKK/nuclear factor‐?B pathways could be involved in DAP‐activated immunomodulation.     

Nitric oxide-scavenging compounds in Agrimonia pilosa Ledeb on LPS-induced RAW264.7 macrophages

The extract of Agrimonia pilosa Ledeb, with a high polyphenol content, inhibited nitrite accumulation as an indicator of nitric oxide (NO) in LPS-induced RAW264.7 macrophages. The NO inhibitory compounds in the extract were isolated using open column chromatography and HPLC, and five phenolic compounds, namely aromadendrin (AD), dihydrokaempferol 3-O-β-D-glucoside (DK3-O-glc), quercitrin (QC), aglimonolide-6-O-β-D-glucoside (AG6-O-glc) and loliolide (LL), were determined by ¹H, ¹³C NMR and LC/MS analyses. This is the first time that these compounds have been isolated from this plant. 4-Ethyl-2-hydroxyamino-5-nitro-3-hexenamide (NOR3), as a NO donor, was used in the presence of these compounds and then the nitrite-level, as an index of NO, decreased, indicating that these compounds would potentially have a NO-scavenging activity. An ESR study of the system containing NOR3 and 2-(4-carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide (carboxy-PTIO), as a NO detection reagent, with or without the compound, provided the evidence that these compounds directly scavenged NO and the scavenging activities of three flavonoids (AD, DK3-O-glc and QC) were remarkably high in comparison to those of the other phenolic compounds. These results indicated that one of the suppression mechanisms in cells would be the NO-scavenge of phenolic compounds.     

海鲈鱼免疫肽的制备及对RAW264.7细胞双向免疫调节作用研究

为探究海鲈鱼免疫调节肽(Lateolabrax maculatus immunomodulatory peptides,LIP)的免疫和抗炎活性,以小鼠脾淋巴细胞刺激指数为指标,通过单因素和响应面优化实验确定LIP的最佳制备条件。利用RAW264.7巨噬细胞模型,探究LIP的免疫调节活性。并构建脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨LIP的抗炎活性。研究结果表明,LIP的优化制备条件为料液比1.0∶3.8(g/mL)、酶质量分数2.14%、木瓜蛋白酶酶解时间56min,此条件下的LIP对小鼠脾淋巴细胞刺激指数为2.57。巨噬细胞免疫活性研究结果表明,LIP具有良好的免疫调节作用。当LIP质量浓度为400μg/mL时,LIP主要是通过促进了RAW264.7细胞的增殖活性、吞噬能力、一氧化氮和胞内活性氧的生成、一氧化氮合酶表达以及促炎因子分泌。研究结果表明:LIP具有免疫调节作用;400μg/mL的LIP还可抑制一氧化氮合酶和环氧化酶-2的mRNA过度表达,降低一氧化氮、前列腺素E₂和促炎因子的过度分泌,展现出良好的抗炎作用。研究结果表明,LIP可以发挥“提高免疫应答”和“抑制过度免疫应答”的双向调节作用。研究旨在为开展双向免疫调节功能性食品的研究提供理论基础。