籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定

目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。     

冷应激前后大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶基因的定量

目的研究急性冷刺激对大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因表达量的影响。方法取健康大鼠10只,随机分为2组:冷应激组和正常对照组,每组5只。正常对照组饲养环境为24℃,冷应激组大鼠环境温度为4℃,应激时间为12 h。实验后分别取两组大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠组织样品,应用实时荧光定量PCR检测应激前后大鼠四种内脏器官ENO1 m RNA表达量。结果冷应激组肺脏与十二指肠ENO1 m RNA表达水平显著高于正常对照组(P0.05);肾脏与肌肉ENO1 m RNA表达水平显著下降(P0.05)。结论急性冷刺激可通过影响肺脏、肌肉、肾脏及十二指肠ENO1基因表达调节代谢燃料的选择和应激反应程度。     

冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平

目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组(24℃,正常饲喂7 d)和冷应激组(置4℃,应激12 h),提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8~2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组(P0.01),正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组(P0.05)。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。     

TSA促U937细胞凋亡机理的初步研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)诱导白血病细胞株U937细胞凋亡的规律及初步研究其作用的分子机理。方法应用细胞培养、Annexin V/PI双标流式细胞术观察TSA对U937细胞诱导细胞凋亡的效应及规律,用Western blot检测TSA作用U937细胞一定时间后蛋白表达的变化。结果TSA能以时间、剂量依赖性方式诱导U937细胞凋亡。400nmol/L的TSA处理24h后,U937细胞Bcl-2蛋白表达开始下降。TSA作用48h后,该蛋白表达下降更明显。这与TSA诱导U937细胞凋亡的时间规律相一致。结论TSA能诱导U937细胞凋亡。TSA对U937细胞的杀伤机制可能与抗凋亡蛋白Bcl-2的下调有关。     

月桂酸酯季铵盐阳离子表面活性剂的生物降解研究

在pH=6.5~7.0、降解温度25~30℃、振荡速率60~75 r.min-1的条件下,研究了月桂酸酯季铵盐阳离子表面活性剂(2-羟基-3-月桂酰氧基丙基)十二烷基二甲基氯化铵(HDAC)在专性好氧菌作用下,不同初始质量浓度、接种量对HDAC降解速率及降解率的影响,提出了HDAC不同质量浓度范围内的降解动力学方程:当HDAC的初始质量浓度600 mg/L时,HDAC对生物降解反应符合零级动力学特征;当HDAC的初始质量浓度为800~1 000 mg/L时,HDAC对生物降解反应符合一级动力学特征。     

曲古抑菌素A与罗格列酮联合应用对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体罗格列酮(ROZ)联合应用对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法首先用不同浓度的TSA和ROZ分别作用于SGC-7901细胞,MTT法检测二者对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合作用浓度。将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA+ROZ组,加入相应的药物处理48h后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并应用流式细胞仪检测细胞周期情况,RT-PCR检测PPARγ和CyclinD1基因mRNA的转录水平。结果对SGC-7901细胞增殖抑制作用不显著的低剂量TSA(40nmol/L)与ROZ联用时,能显著增强ROZ对细胞增殖的抑制作用,TSA+ROZ组G0/G1期细胞比例较单用TSA或ROZ组明显增加,且CyclinD1基因mRNA转录水平明显下降;TSA作用于细胞后,PPARγ基因mRNA转录水平较对照组明显升高,而ROZ单独作用后,细胞PPARγ基因mRNA转录水平无改变。结论TSA可明显增强ROZ对SGC-7901细胞增殖的抑制效应,提示HDAC在SGC-7901细胞内可能具有抑制PPARγ的作用。     

新型脯氨醇N-氧化物类HDAC 抑制剂的设计合成

癌症是严重威胁人类健康的疾病之一。传统的治疗药物毒副作用大,选择性差,多耐药性等缺陷。因此,开发小分子HDACs抑制剂靶向治疗药物成为近年来抗肿瘤药物研究的热点。设计并完成了新型脯氨醇N-氧化物类HDAC抑制剂的合成路线,以4-溴丁酸,6-溴己酸,8-溴辛酸为起始原料最终得到6个结构全新的酰胺类HDAC抑制剂,目标化合物经过¹H-NMR、¹³C-NMR、HRMS的图谱分析确证。该合成方法简单易得,为后续HDAC抑制剂进一步的研究提供了方法。     

PRRSV 2b蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选

目的通过酵母双杂交筛选技术从猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)c DNA文库中筛选与猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)2b蛋白互作的宿主细胞蛋白。方法将PRRSV 2b基因扩增产物克隆至p GBKT7质粒上,构建重组钓饵载体p GBKT7-2b,转化至Y2H Gold酵母感受态中制备钓饵菌株后,进行自激活和毒性检测;将PAM c DNA文库菌株与钓饵菌株进行杂交融合,经DDO/X/A平板筛选后,对筛选的菌株进行PCR鉴定及测序分析。结果构建的钓饵菌株无毒性和自激活现象;共获得LGALS1、RPL12、LGALS3和RPS20 4种蛋白。结论成功构建了可用于双杂交筛选的钓饵菌株,筛选出4种与PRRSV 2b蛋白互作的PAM蛋白,其中LGALS1出现概率最高。     

短暂前脑缺血再灌注对大鼠海马中脑源性神经营养因子启动子与组蛋白去乙酰化酶3结合的影响及其作用机制

目的 评价短暂前脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)对大鼠海马中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)启动子与组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)结合的影响，并探讨其作用机制。方法 采用Pulsinelli四血管夹闭法建立SD大鼠的I/R模型(I/R组)，同时设假手术组(Sham组)。尼氏染色法观察大鼠海马中神经元存活情况；染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)法检测大鼠海马中BDNF启动子(Bdnf-p1、Bdnf-p2、Bdnf-p4和Bdnf-p6)与HDAC3的结合情况；qPCR法检测大鼠海马中反义脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor antisense,BDNF-AS)的表达情况。结果 与Sham组比较，I/R组大鼠海马CA1区神经元数目大幅减少，CA3和DG区神经元数目变化较小。I/R组大鼠海马CA1区中Bdnf-p1和Bdnf-p2与HDAC3结合...     

以3,5-二芳基取代吡唑为Cap的新型选择性HDAC6抑制剂:设计、合成及抑酶活性评价

为发现新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone deacetylase inhibitors, HDACis）,基于现有代表性选择性HDAC6抑制剂的结构特征,采用构象限制型的3,5-二芳基取代吡唑为Cap单元构建目标分子,经Claisen-Schmidt反应、环合、亲核取代、水解、缩合、羟胺解反应合成了9个化合物,并通过氢谱和质谱对其进行结构确证。抑酶活性测试结果显示,化合物4-((3,5-二（4-氯苯基）-1H-吡唑-1-基)甲基)-N-羟基苯甲酰胺（5a）对HDAC6具有良好的抑制活性(IC₅₀=0.25μmol/L)和一定的亚型选择性。     

人乌头酸脱羧酶1基因及其编码蛋白的生物信息学分析

目的 对人乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,ACOD1)基因的转录调控因素及其编码蛋白的分子功能进行分析。方法 采用多种生物信息学软件对人ACOD1基因启动子区域转录因子结合位点、甲基化CpG位点、单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphism,SNP）位点进行预测,对人ACOD1基因编码的蛋白进行GO(Gene Onotology)蛋白功能注释分析及蛋白互作网络分析。结果 人ACOD1基因启动子区域存在3个启动子序列,17个转录因子结合位点,无甲基化CpG位点,并存在12个SNP位点;人ACOD1蛋白具有多种分子功能并参与多种生物过程,可能与白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、C-C基序趋化因子-4(C-C motif chemokine-4,CCL-4)、干扰素调节因子1(interferon regulatory factor 1,IRF1)和C-X-C基序趋化因子10(C-X-C motif chemokine 10,CXCL10)等蛋白具有相互作用关系。结论 本文为进一步研究人AC...     

西达本胺将展开临床试验

深圳微芯生物科技有限责任公司自主研发的抗肿瘤先导化合物西达本胺（CS55），近日获得美国发明专利授权并即将进行临床试验。西达本胺是苯甲酰胺类口服组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂。组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类抗肿瘤新药，可在肿瘤细胞中引起对基因表达的选择性调控。     

三相法分离番薯过氧化物酶

采用三相法(TPP)分离纯化番薯过氧化物酶(SPP),以番薯过氧化物酶的酶活回收率和纯化倍数为优化目标,分别利用单因素法和响应面分析法对其影响因素进行考察。建立了最佳提取条件:以叔丁醇作溶剂、硫酸铵饱和度为66%、粗提物与叔丁醇体积比为1. 0∶1. 13、温度为26℃、pH=5. 0,在最优提取条件下,其酶活回收率和纯化倍数分别达133. 5%和3. 5。SDS-PAGE电泳分析结果显示SPP酶蛋白主要为一条带,其分子质量约为40 kDa左右。三相法操作简便、耗时短、成本低,此外分离过程增强了SPP酶与底物的亲和力,提高了酶活回收率,有利于工业化应用。     

天平草中抗肿瘤活性成分的计算机虚拟筛选研究

运用计算机辅助药物设计寻找天平草植物中抗肿瘤的活性成分。在知网数据库中搜索其主要化学成分，在Sybyl软件中，将化学成分与抗肿瘤相关的16个靶点进行分子对接，通过对接打分函数（Total Score≥7）筛选出活性成分。采用Discovery Studio软件分析了结合较好的蛋白与小分子化合物的相互作用力，结果表明，11β,13-二氢莴苣素8-O-对甲氧基苯乙酸酯与谷氨酸受体3(GRM3)结合最好；3β-羟基-12(13)-烯-齐墩果烷-11-酮与法尼基转移酶（FTase）结合最好；豆甾-5-烯-3β-醇-7-酮与组蛋白去乙酰化酶（HDAC）结合最好。     

虾肉的蛋白酶酶解过程研究

以蛋白水解度为主要目标，通过实验研究了虾肉的酶解过程。比较了不同蛋白酶制剂对虾肉的酶解效果，确定了一种适宜于酶解虾肉的碱性蛋白酶，并通过实验优化了相应的工艺控制条件。得到的最佳工艺条件为：水肉比1：1-2：1，碱性蛋白酶质量分数0．3％（酶活力4．75×10^4U／mg），pH8-9，温度55-60℃，酶解时间4h。在此条件下，虾肉蛋白的水解度可达28％以上。此外，实验结果还表明加热预处理不能提高虾肉蛋白的水解度。     

创新贡献奖之突出贡献奖

正周明国南京农业大学植保学院教授周明国主要科学技术成就和贡献:1带领团队发现2个杀菌剂原创性新靶标及其药剂结合位点,探明靶标蛋白药敏性的关键氨基酸及药-靶互作的精确性。国际杀菌剂抗性行动委员会(FRAC)基于本发明将杀菌剂作用于"有丝分裂"的作用方式修改     

人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析

目的　制备纯化人组织激肽释放酶 ,并检测其生物活性 ,为中试放大及纯化工艺奠定基础。方法　使用麦芽糖 (MBP)融合分泌载体pMBP P ,构建并筛选出 1株工程菌株 ,在 6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白。目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后 ,采用电位滴度法测定其活力。结果　筛选出的工程菌株表达相对分子质量约 70 0 0 0的激肽释放酶融合蛋白 ,大小与预计大小相符。纯化后共获得 2 8mg蛋白 ,并具有水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力。结论　成功进行了人组织激肽释放酶融合成熟蛋白的小量制备 ,经纯化后的产物具有生物活性 ,为中试放大、纯化工艺研究奠定了基础。     

石油、化工分离及传质技术交流会议报告

1 有机液体物料精馏干燥过程的设计——吉林化工第九设计院情报室 本文指出了精馏干燥过程的优点,给出了部分互溶液体物料的汽-液平衡关系,对精馏干燥过程设计中应该注意的若干问题作了说明。     

基于酶解-膜分离集成的胶原蛋白肽分子量控制技术

采用酶解-膜分离集成工艺制备分子量范围可控的胶原蛋白多肽,研究反应过程中酶种类、截留分子量和过滤体积等因素对酶解-膜分离集成工艺的影响.结果表明,用截留分子量为3 k Da的超滤膜处理的透过液分子量主要分布在4.0,1.6和0.6k Da,比例分别为13.7%,34.8%和51.4%;用截留分子量为8 k Da的超滤膜处理的透过液分子量主要分布在8.3,4.0,1.6和0.6 k Da,比例分别为14.5%,22.7%,37.7%和25.1%;酶解-膜分离集成工艺蛋白转化速率比酶解过程提高15%,表明酶解-膜分离集成可以加快大分子蛋白转化率,并使酶解产物分子量均一可控.     

动物蛋白水解复合酶的研究

以酶解牛骨蛋白为对象,研究动物蛋白水解复合酶的配制并考察其适应性.实验结果表明,由中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味酶等3种酶按酶活性1∶3∶2组合配制而成的复合酶,其酶解动物蛋白效果高于单一酶.