双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术探讨

采用正交试验法对双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白技术进行优化,研究体系中PEG2000含量、酒石酸钾钠含量及p H值三个因素对钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯化的影响,确立了双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的优化条件:双水相体系总质量为20 g,加入C-PC粗提液5m L时,PEG2000的浓度为17%(w/w),酒石酸钾钠的浓度为21%(w/w),p H值为6.5。结果表明,双水相萃取纯化钝顶螺旋藻藻蓝蛋白所得的PC纯度3.11,C-PC的回收率为93.07%。     

双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素

本文建立了一种从紫花油豆中快速高效分离凝集素的方法,采用PEG-盐双水相体系进行分离,以上相蛋白得率和纯化倍数作为评价指标,分别考察了(NH4)2SO4质量分数、PEG600质量分数和体系p H值三种显著单因素,同时用SDS-PAGE电泳对其进行检测,探究凝集素在PEG600/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配规律。结果表明:双水相体系分离凝集素的最优条件为(体系共5m L):3m L25%(w/w)的(NH4)2SO4溶液、1m L 90%(w/w)的PEG600溶液、1m L的粗蛋白提取液、调p H值为7.5,此时上相蛋白得率为42.32%,纯化倍数为3.08。     

双水相萃取分离重组毕赤酵母碱性木聚糖酶

利用双水相萃取技术对来源于重组毕赤酵母的碱性木聚糖酶进行了初步分离。研究了聚乙二醇(PEG)分子量、PEG浓度、盐种类及浓度、Na Cl加入量和p H等因素对萃取效果的影响。结果表明,在PEG 4000浓度为20%,Na2HPO4浓度为18%,Na Cl浓度为0,p H6.0的条件下,获得最佳萃取效果,其结果为:分配系数(K)8.51,酶的活力回收率(Y)87.2%,纯化倍数(PF)2.54。     

双水相体系萃取啤酒酵母中乙醇脱氢酶工艺

研究构建聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系对乙醇脱氢酶(ADH)进行提取。探讨了PEG分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度、粗酶添加量对ADH纯化倍数的影响。结果表明,在(NH_4)_2SO_4浓度为18%、PEG800浓度为22%、粗酶添加量为5%所组成的双水相体系下,ADH的纯化倍数可达3.815。     

类芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的分离与纯化

类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CH-3是一株高产β-甘露聚糖酶的菌株。本研究采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对CH-3菌株产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化,以选出纯化率高且残余酶活力高的方法。结果发现,乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法纯化效果较差,聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系的纯化效果较好,PEG浓度为20%(m/m)时,上相测得的总酶活力最高,可以达到221 U/m L。在(NH4)2SO4浓度为18%(m/m)时,上相测得总酶活力最高,可以达到264 U/m L,同时酶萃取率达最大值为86.2%。因此,最优的双水相体系是20%(m/m)PEG和浓度为18%(m/m)(NH4)2SO4。     

生姜蛋白酶的双水相法萃取研究

以生姜为原料,研究双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件。利用单因素试验与正交试验进行优化,得到最佳萃取方案为PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%。此双水相体系的上相酶活回收和纯化倍数都是最高,分别达279.05%和1.86。     

双水相法萃取黑曲霉C2J6脂肪酶条件的优化

为提高黑曲霉C2J6发酵液中脂肪酶的分离纯化效率,采用PEG2000/(NH_4)_2SO_4双水相法进行萃取。探讨PEG2000质量浓度、(NH_4)_2SO_4质量浓度、p H、Na Cl质量浓度对脂肪酶萃取的影响,利用Box-Behnken响应面法优化萃取条件。结果表明:在PEG2000质量浓度35%、(NH_4)_2SO_4质量浓度21.60%、p H 6.90的条件下,脂肪酶萃取率高达85.92%,酶活力47.53 U/mL,比粗酶活力提高了3.02倍。此法简捷、高效,为黑曲霉脂肪酶的进一步纯化奠定基础。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

苦苣皂甙的PEG/MgSO_4双水相萃取优化及其抗氧化评价

对PEG(聚乙二醇)/Mg SO4双水相萃取苦苣皂甙进行研究,比较双水相萃取的皂甙与其它常用提取方法提取的皂甙的抗氧化性。选取PEG4000浓度、Mg SO4浓度、p H、温度为独立变量,苦苣皂甙回收率为指标,采用Box-benhnken响应面法优化,得到回归模型。结果表明:各变量的影响顺序为PEG4000浓度p H萃取温度Mg SO4浓度;由回归分析得到最佳工艺条件是:PEG4000质量分数21%,Mg SO4质量分数16%,萃取温度51℃,p H 6,此时苦苣皂甙回收率为95.12%。双水相萃取所得皂甙与其它方法所得皂甙的提取率相差不大。苦苣皂甙抗氧化活性强弱与皂甙浓度呈量效关系,且与提取方法有关;双水相萃取所得皂甙抗氧化活性最强。     

双水相萃取技术提取牛乳过氧化物酶

利用双水相萃取技术从牛乳乳清中提取乳过氧化物酶。以乳过氧化物酶酶活回收率和纯化倍数为指标,研究双水相体系的盐相、PEG分子质量、PEG浓度、硫酸镁含量及体系pH值对乳过氧化物酶分布在上相或下相的影响。研究结果表明,当双水相体系的pH值为8.5时,选择10%硫酸镁和16%PEG 6 000,可将乳过氧化物酶富集在盐相,乳过氧化物酶的酶活回收率和纯化倍数分别为153.59%和1.99倍。     

双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系,对双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶进行了研究,探讨了PEG分子量、PEG浓度和(NH4)2SO4浓度对α-淀粉酶的分配系数、酶活回收率和相体积比的影响。实验表明,由PEG40021%～22%(W/W)和(NH4)2SO414%～17%(W/W)所组成的双水相体系,在室温下对α-淀粉酶的酶活回收率可达94.84%,分配系数可达17.10。     

PEG/盐双水相体系萃取小麦酯酶的研究

采用PEG/NaH2PO4双水相体系分离提取小麦中的植物酯酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度、pH、无机盐类型及浓度对萃取效果的影响进行了分析.确定了双水相组成体系为:23%PEG1000(质量比)和16%NaH2PO4(质量比),pH=4,在此体系中小麦的植物酯酶主要分布在上相,分配系数K=4.33,纯化倍数达到2.85,回收率95%.     

龙须菜多酚类物质的双水相系统纯化及抗氧化研究

采用PEG/Mg SO4的双水相系统纯化龙须菜多酚,探究萃取机理及其抗氧化活性。以龙须菜为原料,龙须菜多酚萃取率为指标;通过单因素和响应面法设计,研究不同分子量PEG和用量、Mg SO4用量、温度、p H对龙须菜多酚回收率的影响,通过分析龙须菜多酚还原力和DPPH,评价不同浓度龙须菜多酚的抗氧化活性,并参照VC和BHT抗氧化进行比较。再通过对其糖类和蛋白质分配系数的测定排除两者对与多酚回收率的影响。结果显示最佳条件:PEG 6000浓度为25%,Mg SO4浓度为10%、萃取温度32℃,p H 6,得到龙须菜多酚萃取率为84.12%±0.47%。龙须菜中总糖以及蛋白质对于该双水相系统的干扰较小,龙须菜多酚有较强的还原能力和清除DPPH自由基能力,龙须菜多酚是一个潜在的天然安全和有效的抗氧化剂。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取大豆脂肪氧合酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对大豆中脂肪氧合酶进行分离萃取研究;通过综合考察酶分配系数、相比和回收率,探讨了(NH4)2SO4、PEG2000、Na Cl浓度以及p H对脂肪氧合酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明在单一因素下的最佳工艺条件为:(NH4)2SO415%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、Na Cl 1%(wt%)、p H5.8;正交实验优选出的最佳工艺条件为:(NH4)2SO417%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、p H5.2,可获得酶的分配系数最高可达9.710,萃取率为87.6%。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。     

双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究

通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%.