脱硫枯草芽孢杆菌的筛选

为了有效脱除石油及其产品中的有机硫,从天津大港油田被原油污染的土壤中驯化、分离出对二苯并噻吩具有一定脱除能力的枯草芽孢杆菌。该菌种可生长的pH范围是3－11,NaCl浓度27 g/L时可生长;在30℃,pH为7,NaCl浓度为10 g/L的条件下,生长状况较好。由油品的循环脱硫实验可知,该脱硫菌种可脱除催化裂化柴油中71.56%的硫,原油中67.22%的硫,可以直接应用于油品脱硫,有一定的实际应用价值。     

枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的发酵条件优化分析

为获得枯草芽孢杆菌产旷β-甘露聚糖酶的最佳发酵条件,分别对碳源、氮源、碳氮质量比、发酵时间和培养温度进行了单因素实验,在此基础上对发酵温度、接种量、培养基初始pH值和发酵时间四因素进行了L9（3^4）正交优化试验．结果表明枯草芽孢杆菌分泌β-甘露聚糖酶的最佳碳源为40g／L魔芋精粉,最佳氮源为5g／L酵母抽提物,两者最佳质量比为5：1,最佳发酵条件为30℃的条件下摇瓶培养28h;最佳发酵参数组合为发酵温度30℃、接种量5％、培养基初始pH6．5、发酵时间28h;各因素对枯草芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶的影响程度大小依次为发酵时间〉发酵温度〉接种量〉培养基初始pH,其中发酵时间对产酶的影响最为显著。     

枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的纯化和性质

本文以魔芋粉为碳源培养枯草芽孢杆菌S-88获得一种β-甘露聚糖酶粗酶液,粗酶液通过硫酸铵梯度盐析、超滤、HiprepTM 26/10脱盐柱脱盐、HiprepTM 16/10 DEAE FF阴离子树脂和G-75凝胶柱的纯化,该枯草芽孢杆菌S-88产的甘露聚糖酶的酶活力达到61697.52 IU/mL。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯化后酶的分子量为30 kda,比其它细菌产的β-甘露聚糖酶分子量(50 kda)小。β-甘露聚糖酶在pH 6.0和50℃的酶活性最大。它在pH 4.4~6.8之间有很好的稳定性,37℃水浴2 h酶活保持在80%以上。55℃以下水浴2 h,酶活力保持在90%以上,该酶有较好的耐热性,煮沸80 min该酶活力才能基本上消失。     

纳豆芽孢杆菌的诱变育种研究

通过实验研究了纳豆芽孢杆菌的育种方法,对初始纳豆芽孢杆菌进行了紫外及微波诱变,采用牛奶-琼脂板筛选菌种,得到了目的菌株QBNW467.研究表明,采用牛奶-琼脂板法筛选诱变后的纳豆芽孢杆菌方法可行,用该法筛选出的菌株QBNW467的固体发酵产酶活性可达2200 IU.g-1.     

枯草芽孢杆菌发酵产耐酸耐高温α-淀粉酶培养基优化

耐酸耐高温α-淀粉酶具有耐酸和耐高温的双重特性,可以进一步提高淀粉糖和相关行业生产效率、降低成本,近来其研究和应用受到广泛重视。采用单因素和正交试验对枯草芽孢杆菌液体发酵产酶的培养基组分进行优化,包含碳源、氮源、金属离子和产酶促进剂等。经过优化后的主要培养基组成为:麦芽糖10%、玉米淀粉2%;胰蛋白胨1%、尿素2%;0.4%的硫酸锰;0.1%的吐温80。经优化后的耐酸耐高温酶α-淀粉酶酶活由43.13 U/m L提高到了89.15 U/m L,发酵酶活提高了一倍左右。     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

枯草芽孢杆菌产木聚糖酶发酵条件的研究

通过单因素和正交试验,对芽胞杆菌产木聚糖酶的发酵条件进行了研究.结果显示最佳产酶条件是:2%麸皮、0.5%(NH4)2HPO40、.1%K2HPO4、0.02%MgSO4.2H2O、0.2%吐温80、1mmol/L微量元素(Fe2 ,Zn2 )、pH9.0、35℃和振荡培养48 h.其木聚糖酶活力可达到2.67 IU/mL.     

青霉素酰化酶（PGA）在枯草芽孢杆菌基因组上的整合表达

将巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶(PGA)基因整合进枯草芽孢杆菌的基因组,筛选获得可以使PGA稳定表达的枯草芽孢杆菌菌株,克服了枯草芽孢杆菌中质粒表达不稳定的缺点.分别构建了含不同PGA基因拷贝数的3种枯草芽孢杆菌菌株,同时分析了这些菌株中PGA表达量的差异.37℃试管培养36 h菌株B.subtilis/xhoI-,aprE-,vpr--的酶活力为3U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga为6 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga为14 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga,vpr::pga为23 U/L.结果表明,整合的拷贝数越多,PGA的表达量越高.     

产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌发酵条件的响应面优化

采用实验室前期构建的能够高产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌株,对其液体发酵条件进行优化。通过单因素实验和响应面Box-Behnken模型优化液体发酵培养参数,五因素三水平的响应面分析表明最佳发酵培养条件为:蛋白胨26.05 g/L,葡萄糖29.29 g/L,MgSO4 1.5 g/L,CaCl2 0.74 g/L,NaCl 10 g/L,pH 9.0,接种量3 %。在最优发酵培养条件下,纳豆激酶最高酶活达到2 186.17 IU/mL,比优化前提高了269 % ,这表明响应面法优化枯草芽孢杆菌工程菌能够明显的提高纳豆激酶活性,为该菌株规模化生产纳豆激酶提供了基础应用参考。     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16SrDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌．以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6-巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性（Ade^-＋MSO^r＋6-MP^r）的突变株GR600．以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607（Ade^-＋MSO^r＋6-MP^r＋km^r）,鸟苷产量高达20．82gm．     

枯草芽孢杆菌产果胶裂解酶培养基优化研究

通过Plackett-Burman试验设计,从葡萄糖、果糖、豆粕粉、氯化铵、乙酸铵、硫酸铵、蛋白胨、酵母提取物、K2PHO4、KH2PO4、CaCl2等11个相关因子中筛选出对枯草芽孢杆菌产果胶裂解具有显著影响的因子——果糖、豆粕和酵母提取物,选取因子豆粕和酵母提取物进行响应面设计分析,研究结果表明当豆粕和酵母提取物含量分别为100 g/L,25 g/L时,果胶裂解酶活性最大为22.69 U/mL。     

响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶

利用响应面法优化重组枯草芽孢杆菌pAUB-BmPGA／BS168发酵生产青霉素G酰化酶的条件。通过Plackett-Burman设计法对碳源、氮源、无机盐、温度等19个因素对发酵产青霉素G酰化酶的影响进行评价。筛选出发酵温度和酵母膏为影响产酶的显著因素。采用了中心组合设计实验对两种显著影响因素进行了优化,应用响应面分析确定了显著因素的最佳水平。结果表明,当温度为34℃,酵母膏为8．8g／L时,最终的酶活达到28．2U／mL,比初始发酵条件提高了1．19倍。在最佳条件利用15L的发酵罐对重组枯草芽孢杆菌进行扩大培养,最终酶活可达51．0U／mL,相对于摇瓶发酵又有大幅度的提高。     

杀镰刀菌素对枯草杆菌致死作用的研究

通过检测OD600、抑菌圈和发酵液澄清度的变化,考察了杀镰刀菌素对枯草杆菌的抑制杀菌作用。实验利用HPF荧光证实杀镰刀菌素致使枯草杆菌细胞内产生氢氧自由基（·OH）,添加抗坏血酸（VC）减少·OH的形成,提高枯草杆菌的存活率。应用基因芯片对5min转录变化分析发现sigW调控的基因及胞膜相关基因高表达,用透射电镜观察发现出现空囊体及大量细胞碎片。     

枯草杆菌超氧化物歧化酶制备的最佳工艺条件研究

以枯草杆菌为菌种摇瓶培养制备超氧化物歧化酶(SOD).对产酶条件进行研究,并采用有机溶剂二次沉淀法对SOD提取液进行纯化.实验结果表明:产酶的最佳温度为37℃,培养基最佳起始pH为7.8,发酵培养用250 mL锥形瓶以60 mL装液量时酶活力最高,最佳接种量为1.5%(体积分数),最佳培养时间10 h.在此条件下,SOD酶活力为2 186 U/(g.h).纯化方法可行,纯化倍数是提取液的9.2倍.研究结果为SOD提供了新的酶源.     

纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化

从日本食品纳豆样品中，分离得到11株具有纤溶酶活性的产酶菌株，对其中酶活力最高一菌株N-06进行菌落形态、菌体形态及生理生化特性鉴定，鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌。并对该菌株进行液体发酵研究，优化了N-06菌株的最佳液体发酵培养基的碳源、氮源以及碳氮比的组成，即葡萄糖1．5％，蛋白胨1．5％，碳氮比1：1。     

纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化

从日本食品纳豆样品中,分离得到11株具有纤溶酶活性的产酶菌株,对其中酶活力最高一菌株N 06进行菌落形态、菌体形态及生理生化特性鉴定,鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌。并对该菌株进行液体发酵研究,优化了N 06菌株的最佳液体发酵培养基的碳源、氮源以及碳氮比的组成,即葡萄糖1.5%,蛋白胨1.5%,碳氮比1∶1。     

响应面法优化海洋枯草芽孢杆菌HS-A38增殖发酵培养基

在摇瓶培养条件下,优化提高海洋枯草芽孢杆菌菌体浓度的发酵培养基组分。采用Plackett-Burman法确定了影响菌体浓度的显著性因子,即葡萄糖和ZnSO4;通过最陡爬坡实验逼近这两个重要因子的最大响应稳定区域,采用中心组合实验确定显著性因子的最佳水平,并用Design expert 7.13软件进行回归分析。优化后培养基的组成为:葡萄糖8.49g/L,豆粕粉12.0g/L,尿素0.625g/L,酵母膏4.0g/L,K2HPO44.0g/L,ZnSO40.053g/L。优化后的活菌浓度达到1.64×109 cfu/mL,与优化前菌体浓度(7.22×108 cfu/mL)相比,提高了1倍多。通过统计优化培养基组分可有效提高海洋枯草芽孢杆菌HS-A38的发酵液菌体浓度。