荧光免疫层析法快速测定牛奶中头孢氨苄残留量

采用荧光免疫层析法结合现场检测仪建立牛奶中头孢氨苄残留的快速定量检测方法。方法 利用反向微乳技术合成稀土铕荧光纳米颗粒,与头孢氨苄单克隆抗体结合制备荧光检测探针,以头孢氨苄卵清蛋白全抗原和羊抗小鼠抗体分别作为检测线和质控线制备免疫层析试纸条,结合现场检测仪建立牛奶中头孢氨苄残留的快速定量检测方法。结果 试验结果表明,该方法对头孢氨苄的检测限为0.16 ng/ml,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.6 ng/ml,线性范围为0.16～5 ng/ml,标准添加回收率为100%～115%之间,与头孢菌素类及青霉素等其他12种抗生素的交叉反应率均＜0.01%,与ELISA方法比较,测定结果相关性良好。结论 本试验所建立的荧光免疫层析法快速检测牛奶中头孢氨苄残留,具有简便、快速、灵敏、直观的优点,可用于抗生素残留的筛查,极具推广和应用价值。     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测稻谷中的镉

本研究制备了一种用于稻谷中镉检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Cd-EDTA的单克隆抗体,基于竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明：定量检测卡的灵敏度为0.088 ng/mL,标准曲线线性范围为0.1ng/mL～5.0 ng/mL,检出限和定量限分别为0.026 mg/kg和0.064 mg/kg,对有证标准物质的正确度在81.0%~91.7%之间,对实际样本的检测与ICP-MS检测结果一致性较高。该法重复性较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位大量样本的快速初步筛查。     

基于免疫磁珠前处理的荧光免疫层析法定量检测牦牛肉中金刚烷胺

研究旨在提供一种基于免疫磁珠分离、富集和净化前处理,检测牦牛肉中金刚烷胺残留的荧光免疫层析定量分析方法.通过对免疫磁珠偶联液、抗体偶联量、偶联时间、微球的抗体标记量、金刚烷胺抗原和羊抗鼠二抗包被浓度等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠前处理的时间分辨荧光免疫层析方法(TRIFA),并对其方法的灵敏度、准确度和精密度进行了...     

胶体金免疫层析法和气相色谱法测定动物产品中氯霉素残留

对动物产品中氯霉素残留检测的胶体金免疫层析法和气相色谱法进行比较研究。向样品中分别添加0.3、0.5、1.5μg/kg三个添加水平的氯霉素标准品,用两种方法进行检测。胶体金免疫层析法对0.5μg/kg以上均能检出,气相色谱法平均回收率分别为78.1%、85.3%和88.3%,变异系数为5.3%～9.0%,最低检测限为0.3μg/kg。对108个样品用胶体金免疫层析法筛选出3个阳性样品,经气相色谱法验证皆为阳性,105个阴性样品经气相色谱法检测皆为阴性,未发现假阳性和假阴性。结果表明：胶体金免疫层析法具有快速,简便,特异,灵敏度高的特点,适合基层检验机构对动物产品中氯霉素残留现场快速筛选;气相色谱法灵敏度高,适用于阳性样品的精确定量。     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测粮谷中重金属铅的研究

本研究制备了一种基于竞争抑制原理的粮谷物中铅快速检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Pb-EDTA的单克隆抗体,从而建立了免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明:定量检测卡的灵敏度为0.61 ng/mL,标曲线性范围为1～16 ng/mL,检出限和定量限分别为8.70μg/kg和22.39μg/kg,对有证标准物质的检测回收率在93.2%～104.0%。该法精密度较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位,便于大量样本的快速初步筛查。     

牛奶中泰乐菌素和替米考星的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、同时针对牛奶中泰乐菌素和替米考星残留的检测方法.应用竞争抑制免疫层析原理,研制出泰乐菌素和替米考星胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定.结果表明,该试纸条对牛奶中泰乐菌素和替米考星的检测限分别为25 μg/L和50 μg/L.假阳性率低于5％,假阴性率为0,检测时间10 min,与其他大环内酯类抗生素无交叉反应.该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中泰乐菌素和替米考星残留的快速检测.     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的 建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法.方法 采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条.样品经磷酸盐处理...     

荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中酪蛋白

目的研究用荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中的酪蛋白。方法本文以酪蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔制备抗酪蛋白的多克隆抗体,将纯化后的多克隆抗体通过EDC介导法与荧光微球进行偶联,将滤纸、样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装成试纸条,用此荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中的酪蛋白。结果试纸条在25 min内就能判定结果,最低检测限为100 ng/mL,该方法与BSA、OVA均无交叉反应,具有很好的特异性。检测酪蛋白浓度为100.0、500.0、1000.0 ng/mL的样品,试纸条的批内回收率分别为(89.03±5.2)%、(93.47±6.9)%和(91.2±7.8)%,批间回收率分别为(87.69±6.2)%、(92.73±8.3)%、(89.82±8.5)%。结论初步建立了一种快速、方便、高灵敏度的荧光微球免疫层析方法用以检测牛乳制品中的过敏原——酪蛋白。     

胶体金免疫层析法半定量检测鸡肉中磺胺嘧啶残留

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体,磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该试纸条可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测,灵敏度为5ng/ml,与其它磺胺类药物无交叉反应,在鸡肉中的回收率为71%～95%;用试纸条与高效液相法对来自动物试验的56份鸡肉样品进行对比检测。以我国磺胺嘧啶残留限量标准(100ng/g)为标准,二者符合率为100%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价

构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu³⁺螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度。结果表明,每100 μL荧光微球结合纯单抗50 μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/mL,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100 μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/mL,线性范围为0.5~25.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000 μg/kg)平均加标回收率为91.4%~109.3%,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754。TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量。     

免疫亲和柱-高效液相色谱法检测乳制品中氯霉素

建立免疫亲和柱富集净化、高效液相色谱-紫外法快速测定牛奶和奶粉中氯霉素残留物。样品用乙酸乙酯提取,经免疫亲和色谱柱纯化,应用液相色谱-紫外法检测。结果表明,牛奶和奶粉添加氯霉素,回收率为79.6%~108.6%,变异系数小于10%;方法检测灵敏度0.1μg/L。该方法能够特异性的纯化牛奶和奶粉样品中的氯霉素,免疫亲和柱(IAC)净化是一种简单,快速,准确的方法。     

荧光定量技术快速检测生乳中磺胺类药物残留

目的 利用荧光定量技术分析检测生乳中磺胺类药物残留,评价该方法的可行性.方法 取生乳空白样品进行加标回收实验(磺胺恶唑13.50、27.00μg/L;磺胺喹恶啉5.00、10.00μg/L;磺胺嘧啶0.82、1.64μg/L),取200μL样品与金标抗体结合,50℃孵育3 min,取120μL样品加到检测卡,反应10 ...     

高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留量的研究

为了快速、简便、灵敏地测定牛奶中的氯霉素残留，建立了高效液相色谱分析法，牛奶样品先用含1％高氯酸的乙酸乙酯沉淀蛋白质和提取氯霉素，提取液浓缩干后用0.5mol/L高氯酸溶液溶解，以正己烷去除脂溶性杂质，在波长278nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素，本方法最低检出浓度为1．1μg/kg，氯霉素浓度在20μg/kg－100μg/kg范围内，方法平均回收率为88．0％－97．7％，RSD为5．3％－6．4％，本方法适于牛奶中氯霉素残留的监测。     

Multiresidue determination of tetracyclines,sulphonamides and chloramphenicol in bovine milk using HPLC-DAD

A high-performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of tetracycline, oxytetracycline, chlortetracycline, sulfamethazine, sulfaquinoxaline, sulfamethoxazole and chloramphenicol in milk has been developed. The determination of these antimicrobials was carried out using HPLC-DAD with a C₁₈ hybrid column and gradient elution with a mobile phase composed of an aqueous phase of 0.075 mol L⁻¹ sodium acetate, 0.035 mol L⁻¹ calcium chloride and 0.025 mol L⁻¹sodium EDTA, pH 7 and an organic phase of methanol:acetonitrile, 75:25 v/v. Sample preparation involved protein precipitation followed by solid-phase extraction using a polymeric cartridge. The method was validated and applied for the analysis of pasteurised milk samples commercialised in Brazil. The limits of quantitation for all antimicrobials, with the exception of choramphenicol, were below the maximum residue limit, which indicates that the method is appropriate for the determination of these antimicrobials in milk.     

High throughput detection of antibiotic residues in milk by time-resolved fluorescence immunochromatography based on QR code

ABSTRACT

Herein, we have successfully established a novel, rapid, and simple lateral-flow immunoassay based on time-resolved fluorescence and biotin-streptavidin to detect the residues of various antibiotics in milk. The fluorescence signal and sensitivity of immunochromatography were enhanced through biotinylated antibody coupled with streptavidin europium microspheres. Moreover, due to the use of a QR Code and fluorescent reader, quantitative detection and real-time data uploading can be achieved. Under the optimal conditions, the various antibiotic residues were detected in the milk samples. The results showed that the limits of detection of tylosin, lincomycin and doxycycline were 0.10, 0.06, and 0.27 ng/mL, respectively. The recoveries of the spiked milk samples were 88.9%~127%, with coefficients of variation less than 11%, and the test strip can be stored at room temperature for 12 months. This study shows that the proposed time-resolved fluorescence immunoassay is sensitive, rapid and reliable, and has the potential to be used for detection of veterinary antibiotic residues in food safety fields.     

GC-MS分析法在猪肉氯霉素残留检测中的应用

建立了猪肉中残留氯霉素(CAP)的GC-MS分析方法。样品中CAP用乙酸乙酯提取,脂肪用正己烷去除,BondElut-C18柱纯化样品,BSTFA-TMCS衍生后用NCI源选择m/z为466的特征离子为目标离子,在SIM模式下进行GC-MS分析。被检测CAP质量浓度在0.08~100μg/kg内,方法的线性关系良好,相关系数为0.998。方法的最低检测限达到0.08μg/kg。用此方法对市场上销售的猪肉样品进行测定,结果显示:只有一份样品CAP残留量为(0.236±0.007)μg/kg,另4份猪肉样品中未检出CAP残留。应用本方法测定新鲜猪肉中CAP残留,基本上满足了灵敏、快速、准确可靠的分析方法要求。     

水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法

该研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的鱼、虾和蟹中氯霉素残留的荧光定量免疫层析检测方法,以满足水产品中氯霉素残留检测的需求。通过将氯霉素鼠单克隆抗体G375-5与羧基化铕微球进行偶联标记,氯霉素抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T)和控制线(C);根据T线信号值与C线信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线;针对鱼、虾、蟹样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并将其在实际水产样品中与HPLC法进行结果对比。结果表明,该研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法对水产品中氯霉素的定量限为0.1μg/kg,添加回收率为73.5%～114.2%,变异系数3.9%～11.5%,与国标仪器方法检测结果的一致性较高。因此,该研究所建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法在水产品氯霉素的快速检测工作中具有较高的应用价值和应用前景。     

赭曲霉毒素A时间分辨荧光侧流层析试纸条的研究

目的 构建一种基于时间分辨荧光纳米微球的赭曲霉毒素A (ochratoxin A, OTA)侧流层析试纸条。方法 基于免疫层析原理, 以时间分辨荧光纳米微球为信号探针, 降低非特异性荧光的干扰, 提高检测灵敏度, 并通过优化样品提取液和样品稀释液, 进一步提高现场检测OTA的灵敏度和准确性。结果 OTA在1~50 μg/kg范围内, T线和C线荧光强度的比值与OTA浓度的对数值具有良好的线性关系, 相关系数r2为0.9981~0.9998。不同基质中OTA的检出限(limit of detection, LOD)和定量限(limit of quantitation, LOQ)分别为0.401 μg/kg~0.614 μg/kg和0.970 μg/kg~1.617 μg/kg, 加标回收率为89.53%~118.37%, 相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)小于12% (n=3), 且与呕吐毒素、伏马菌素B1、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的交叉反应率均小于5%, 特异性良好。基于荧光定量快速检测技术平台OTA侧流层析试纸条可在8 min内快速准确地定量检测出待测样本中OTA的含量。结论 本研究所制备的时间分辨荧光侧流层析试纸条可实现玉米、小麦和饲料中OTA的快速定量检测, 并具有成本低、灵敏度高、操作简便、准确高、重复性好、特异性好的优点, 可满足国内外OTA检测的技术要求, 为真菌毒素快检技术的发展提供技术支撑。