皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。     

迷迭香提取物的抗肿瘤作用

目的:研究迷迭香乙醇提取物对人肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC7721的生长抑制作用.方法:分别用HE染色法和溴化二苯偶氮盐(MTT)检测法,观察其形态学变化和对肿瘤细胞的增殖抑制作用.结果:显微镜下可见A549、SMMC7721形态明显改变,200 mg/mL迷迭香提取物作用48h时,其抑制率分别(93.06±1.56)%、(84.39±1.96)%.结论:迷迭香提取物对A549、SMMC7721细胞均有抑制作用.且呈量效关系.     

米糠黄酮的制备工艺及抗肺癌活性研究

探究超声辅助酶法制备米糠黄酮的最佳工艺,以及制备的米糠黄酮对人肺癌细胞(A549)生长的抑制作用。通过单因素和响应面试验,研究超声辅助酶法制备米糠黄酮的最佳条件;制备的米糠黄酮处理A549细胞,通过形态学观察、MTT法检测细胞存活率及Hoechst33258检测凋亡作用,初步考察其抗肺癌活性。超声辅助酶法提取米糠黄酮的最佳条件为：料液比1:19(g/ml)、加酶量125 U/g、乙醇浓度60%、超声时间19 min,在此条件下提取率为0.52±0.03%;通过细胞形态学观察、MTT细胞活力检测及Hoechst33258检测凋亡检测结果显示米糠黄酮对A549细胞生长有一定的抑制作用。实验结果表明,超声辅助酶法提取米糠黄酮是一种有效的提取方法,制备的米糠黄酮对A549细胞生长有较好的抑制作用。     

油枣中黄酮类化合物抗肿瘤活性研究

通过细胞增殖试验、细胞迁移试验和细胞凋亡试验，研究油枣中不同黄酮类化合物的抗肿瘤活性。细胞增殖试验结果表明:油枣中5种黄酮类化合物对胰腺癌细胞BXPC-3、肠癌细胞HT-29、肺癌细胞A549均有不同程度的抑制作用。其中，槲皮素对胰腺癌细胞BXPC-3、肠癌细胞HT-29的抑制作用最为明显，抑制率分别达到79.08%和89.09%；金丝桃苷对肺癌细胞A549的抑制作用最为明显，抑制率为74.32%。细胞迁移试验结果表明:槲皮素对胰腺癌细胞BXPC-3有较强的抑制迁移能力，而对肠癌细胞HT-29、肺癌细胞A549效果不明显。通过TUNEL染色观察肿瘤细胞的凋亡，试验结果表明:油枣黄酮类化合物对肿瘤细胞的抑制作用是由细胞凋亡引起的。     

两种桃金娘科不同属植物叶挥发油成分GC-MS分析及其抗肺癌A549、H460细胞增殖活性

为了比较分析莲雾叶、白千层叶挥发油成分的异同,并研究其对人肺癌A549、H460细胞增殖活性的影响,本研究利用水蒸气蒸馏法提取莲雾叶、白千层叶挥发油成分,以气相色谱-质谱联用(GC-MS)法比较分析其化学成分,采用MTT法评价其对人肺癌A549、H460细胞增殖活性的影响。GC-MS分析结果显示,从莲雾叶挥发油中分离鉴定了38种化合物,主要成分为石竹烯、à-芹子烯、β-桉叶烯、(+)-δ-杜松烯和蓝桉醇等;从白千层叶挥发油中分离鉴定了28种化合物,主要成分为桉树脑、(ñ)-2,6,6-三甲基双环[3.1.1]庚-2-烯、α-松油醇、D-柠檬烯和表蓝桉醇等;两种挥发油含有13种共有化合物,其保留时间基本一致,相对含量相差0.3~27倍;两种挥发油中含量较高的五种化合物的结构、相对含量均不相同。MTT法测试结果表明,作用24 h后,莲雾叶挥发油在浓度为40 mg/L时,对人肺癌细胞A549的细胞增殖能力产生显著的抑制作用(p<0.05),在浓度为60 mg/L时,对人肺癌细胞H460的细胞增殖能力产生极显著的抑制作用(p<0.001),并呈剂量依赖性,抑制作用随着浓度的增大而增强,其IC₅₀值分别为49.99、65.70 mg/L;白千层叶挥发油对人肺癌A549、H460细胞均无明显生长抑制作用(p>0.05)。综上所述,莲雾、白千层同属于桃金娘科,但其干燥叶挥发油所含化合物种类及相对含量以及对人肺癌细胞A549、H460的细胞增殖能力所产生的影响均不相同。     

平盖灵芝提取物对肺腺癌A549细胞增殖抑制作用研究

目的探讨平盖灵芝不同极性部位提取物对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。方法采用噻唑蓝（MTT）法测定。结果平盖灵芝氯仿部位提取物高剂量组(100μg/mL)对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率为30.43%,与空白组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论平盖灵芝氯仿部位提取物对肺腺癌A549细胞增殖有一定抑制作用,其有效成分及作用机制有待进一步研究。     

姜黄挥发油诱导肺癌细胞凋亡及机理研究

对姜黄挥发油诱导人肺癌A549细胞的凋亡影响及作用机制进行研究。采用二甲基噻唑蓝比色法(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测姜黄挥发油对A549的细胞增殖的抑制作用,采用吖啶橙(acridine orange,AO)染色法、流式细胞仪法、划痕和集落形成试验探究姜黄挥发油诱导细胞凋亡的作用机制。结果表明,姜黄挥发油以时间和剂量依赖性关系抑制癌细胞的增殖。姜黄挥发油浓度在100 mg/L时就能够使细胞结构发生变形,细胞核发生皱缩,同时与空白对照组相比,加入经不同浓度姜黄挥发油处理后的A549细胞,其早期和晚期凋亡细胞数量均有所增加,其迁移能力也受到了不同程度的抑制。     

薤白多糖抑瘤及神经营养活性研究

采用MTT法对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)在体外抑制人肺癌细胞A549和人胃癌细胞BGC-823的增殖作用进行了研究。结果显示,AMP40-2对人肺癌细胞A549的生长具有一定的抑制作用。对人胃癌细胞BGC-823的增殖实验结果表明,薤白多糖AMP40-1、AMP40-2均能不同程度的抑制BGC-823细胞的增殖,且抑制作用与多糖之间存在不同程度的正相关量效关系和时效关系。通过大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12培养体系,对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)进行了神经营养活性研究。结果表明,薤白多糖AMP40-2对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞具有一定的促分化作用。     

紫甘薯花色苷制备及其抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖研究

目的:制备紫甘薯花色苷提取物并分析其主要成分,研究其对3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的抑制作用。方法:应用响应曲面法优化提取条件;用高效液相色谱法(HPLC)分析其主要成分;以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,利用MTT法得到最佳铺板密度,得到细胞生长曲线,从而在最佳密度和对数生长期检测不同浓度紫甘薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响。结果:花色苷提取物总量达到39.79 mg/g;选择细胞接板密度为5×103 cfu/mL,细胞铺板12h之后继续培养24 h,紫甘薯花色苷从最低质量浓度15.625μg/mL时即相对于空白组能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的作用(P0.05)且具有剂量效应关系,紫甘薯花色苷半数抑制浓度IC50为(413.853±2.617)μg/mL。结论:体外细胞实验显示紫甘薯花色苷具有抑制脂肪细胞生长增殖,提示紫甘薯花色苷具有预防肥胖的作用。     

莲房原花青素体外抗肿瘤作用研究

目的:研究莲房原花青素(LSPC)的相对分子量分布及体外抗肿瘤作用。方法:用ESI-MS分析LSPC,MTT法检测人肺癌LETP-2、胃腺癌SGC-7901、黑色素瘤A3753种细胞增殖,采用平板集落实验测定3种癌细胞集落形成。结果:LSPC的分子量范围为290.1～1154.3,是以二聚体为主的低聚原花青素;一定浓度的LSPC对3种瘤细胞均有抑制作用,当LSPC浓度为100μg/mL作用72h时对3种瘤细胞生长抑制率分别为62.6%、49.8%、77.0%;集落形成抑制率分别为77.0%、43.2%、95.3%。结论:LSPC体外对LETP-2、SGC-7901、A3753种瘤细胞有显著的抑制作用。     

硒对啤酒酵母细胞生长的影响

目的研究不同硒浓度对啤酒酵母细胞生长的影响,确定适宜的硒添加量。方法用分光光度计测定不同硒浓度时酵母细胞培养液在不同时间的吸收度,绘制生长曲线,比较硒浓度不同时酵母细胞的生长情况。结果亚硒酸钠的添加浓度小于20μg/mL时,有促进酵母菌生长的作用;亚硒酸钠浓度高于30μg/mL时,对酵母菌生长有明显的抑制作用;亚硒酸钠浓度在20μg/mL时酵母菌可以正常生长。结论亚硒酸钠的添加浓度应在20μg/mL左右。     

丝素蛋白β-折叠含量影响细胞生长的研究

分析在乙醇处理前后丝素蛋白(SF)与丝素肽(SFP)二级结构含量变化,及对细胞生长的影响。采用醇溶法提取制备SF,由中性蛋白酶酶解得SFP,40%乙醇分别处理SF与SFP,得ET-SF、ET-SFP。将SF、SFP、ET-SF、ET-SFP分别采用过滤除菌处理后再分别在1 mg/mL、0.5 mg/mL浓度条件下,检测其对人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌上皮细胞(Caski)的生长影响,利用相对增值率评价其毒性,圆二色谱法检测二级结构含量。结果表明:乙醇处理前后SF为非浓度依赖型,对细胞生长均有促进作用且趋势相同;乙醇处理前后SFP为浓度依赖型,对细胞均有抑制作用,当β-折叠含量增加,SFP对细胞毒性作用增加。     

西沙诺尼果汁提取物对肿廇细胞增殖的抑制作用

以我国海南西沙诺尼果汁为原料,经分离提取,得到以多糖、氨基酸、黄酮类和甾醇类物质为主要成分的6种组分。通过MTT方法比较不同组分对人肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT116和宫颈癌细胞HeLa增殖的抑制作用。试验结果表明:诺尼果汁中的黄酮类组分和甾醇类组分能抑制肿廇细胞增殖,并呈剂量依赖性。其中5号甾醇类组分抗肿瘤活性最强,对HCT116和HeLa细胞IC50分别为20.9和22.1μg/mL,说明诺尼果汁具有辅助治疗癌症的潜力。     

姜黄素超分子包合物的体外抗肿瘤活性评价

对姜黄素超分子包合物的体外抗肿瘤活性进行评价。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测包合物(40、80、160、320、640 μg/mL)对不同肿瘤细胞(A375黑色素瘤细胞、A549肺癌细胞、Hela宫颈癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞)处理不同时间(24、48、72 h)后对其细胞存活率的影响,并进一步运用Annexin-V/PI双染检测包合物抑制肿瘤细胞增殖的原因。结果表明,四种细胞的存活率均随着包合物浓度和处理时间的增加呈下降趋势,并且包合物对A375细胞的增殖具有最强的抑制作用,其IC₅₀达到最低,为476.4 μg/mL。进一步的检测发现,当包合物处理A375细胞后,细胞凋亡的数量随着包合物浓度的升高而升高,从对照组的3.3%上升到35.0%,这表明,包合物通过诱导细胞凋亡来抑制A375细胞增殖。     

工程蝇蛆体内活性物质体外抗肿瘤作用的研究

对工程蝇蛆体内活性物质及体外抗肿瘤作用进行了研究。选用SephadexG-50初步分离蝇蛆体内活性物质;采用MTT法测定K562细胞的生长抑制率;通过倒置显微镜观察K562细胞的形态变化。实验结果表明:峰1组分半致死浓度IC50为100μg/mL,峰2组分半致死浓度IC50为80μg/mL。随所添加活性物质浓度的增大,肿瘤细胞受抑制作用增强;活性物质作用于K562细胞前后其细胞形态发生明显变化,受抑制细胞由一个完整细胞变为多个凋亡小体,因此可以说明工程蝇蛆体内活性物质在体外对K562细胞具有抑制生长的作用。     

蔬菜种子中5种异硫代氰酸酯类化合物对人肺癌细胞抑制作用的研究

以人肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法检测5种异硫代氰酸酯对A549细胞生长的抑制作用,计算其IC50值。采用倒置显微镜观察细胞形态变化。通过研究5种异硫代氰酸酯对A549细胞的影响,探讨这些化合物的抗癌作用及其结构与活性之间关系。结果表明,5种单体对肿瘤细胞均有不同程度的剂量依赖性抑制作用,并且能使A549细胞的形态发生改变;对A549细胞的抑制活性是:萝卜子素萝卜硫素≈3-(甲磺酰基)丙基异硫代氰酸酯3-(甲硫基)丙基异硫代氰酸酯3-丁烯基异硫代氰酸酯,IC50值分别为(15.43±0.82)μmol/L,(22.09±0.94)μmol/L,(29.82±1.36)μmol/L,(47.40±3.51)μmol/L,(79.57±3.05)μmol/L。萝卜子素的有效浓度为3.125～100μmol/L;萝卜硫素、3-(甲磺酰基)丙基异硫代氰酸酯、3-(甲硫基)丙基异硫代氰酸酯、3-丁烯基异硫代氰酸酯的有效浓度均为6.25～100μmol/L。说明异硫代氰酸酯的特征基团-N=C=S为主要活性基团,侧链上的磺酰基和硫基可能是异硫代氰酸酯的活性辅助位点。侧链上含有磺酰基的异硫代氰酸酯类化合物具有较强的抑制肿瘤活性。     

绞股蓝热处理产物中活性成分的纯化与鉴定及其对A549细胞的抑制活性

目的:提取、分离、鉴定绞股蓝热处理产物中抑制肺癌A549细胞的活性成分。方法:绞股蓝叶在温度125℃、压力0.24MPa条件下,加热处理3h,用80%乙醇加热回流提取3h,利用活性跟踪方法,通过大孔树脂HP-20及反相柱等分离手段,分离抑制肺癌A549细胞的活性成分,并用核磁共振波普(1H-NMR、13C-NMR)、电喷雾质谱(ESI-MS)等数据鉴定有效成分。结果:绞股蓝热处理产物中分离得到2个达玛烷类皂苷,分别为绞股蓝皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI,而且它们对肺癌A549细胞具有质量浓度依赖性的抑制活性(P<0.05),其IC50值分别为(48.43±1.33)μg/mL和(34.35±0.88)μg/mL。结论:热处理绞股蓝产物可提高对肺癌A549细胞的抑制作用,其中有效成分为达玛烷类皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI。     

不同产地三叶木通果胶的理化性质、抗氧化活性及对癌细胞A549和K562-2生长的抑制作用

为探明不同产地三叶木通果胶的理化性质及生物活性的差异,该研究采用酸提醇沉法对来源于贵州凯里及河南南阳的三叶木通果皮果胶进行提取,比较两者之间理化性质、清除羟自由基(·OH)和DPPH自由基能力及对人肺癌细胞(A549)和人慢性髓系白血病细胞(K562-2)抑制效果。结果表明,酸提醇沉法提取的两产地三叶木通果胶均为高酯果胶,其半乳糖醛酸的含量及酯化度均高于商品果胶,对·OH、DPPH自由基均有一定清除作用;在低质量浓度时(≤0.5 mg/mL),两产地果胶清除·OH能力无显著差异,随着果胶液浓度的增大,河南南阳果胶清除·OH及DPPH自由基能力显著高于贵州凯里果胶。MTT法测试结果显示,两产地果胶对癌细胞珠A549和K562-2的生长均有一定的抑制作用,贵州凯里果胶对A549和K562-2的抑制率略高于河南南阳果胶。三叶木通果皮果胶在医药及保健方面具有更好的开发前景,该研究为不同产地的三叶木通开发利用提供一定的理论依据。     

灵芝孢子油番茄红素复合物的抗肿瘤作用

该研究旨在考察灵芝孢子油番茄红素复合物（LZFQ）体内外抗肿瘤活性,探讨其对肿瘤细胞的作用机制。用MTT法对人非小细胞肺癌细胞（A549）、人胃癌细胞（BGC823）、人乳腺癌细胞（MCF-7）和人结肠癌细胞（HCT116）细胞活力进行检测,建立裸鼠移植瘤模型研究LZFQ的体内抑瘤作用,通过流式细胞术检测细胞凋亡变化及凋亡相关蛋白的表达,对其抗肿瘤机制进行初步探讨。体外细胞活力实验表明LZFQ对4种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,对A549细胞的抑制最明显（IC50=0.49 mg/mL）。流式细胞术实验表明,LZFQ可以浓度依赖性的诱导细胞凋亡。Western blot实验表明,LZFQ浓度依赖性地降低抑凋亡蛋白Bcl-2的水平、并提高促凋亡蛋白Bax及Caspase-3的水平。裸鼠移植瘤实验中,LZFQ给药剂量为2.00 g/kg（高剂量组）、1.00 g/kg（中剂量组）和0.50 g/kg（低剂量组）时,对裸鼠移植瘤的抑制率分别为60.58%、51.92%和43.27%,其中高、中、低剂量组与模型组比较均有显著差异（p<0.01）。机制研究表明,LZFQ可以浓度依赖性诱导细胞凋亡,并通过影响凋亡相关蛋白的表达诱导细胞凋亡。该研究结果表明LZFQ具有一定的抗肿瘤作用,可为灵芝孢子油类产品的研发提供实验依据。     

硒酸壳聚糖通过线粒体途径诱导A549细胞凋亡的初步研究

本文研究了硒酸壳聚糖(SC)对非小细胞肺癌A549增殖抑制及诱导凋亡作用,并进一步研究了SC对其凋亡前后蛋白差异表达。采用MTT法检测了SC对A549细胞的增殖抑制作用;并用激光共聚焦分别观察了Hoechst33342/PI染色后A549细胞形态的变化以及钙黄绿素染色后细胞线粒体MPTP的开放状况;流式细胞仪检测了SC对A549细胞线粒体跨膜电位的影响;利用2-DE结合MALDI-TOF质谱技术检测了细胞凋亡相关蛋白的差异表达。结果表明:SC对A549细胞具有显著的增殖抑制作用,并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性;SC可使A549细胞发生形态改变,使细胞变得不规则,染色质固缩和边集;经SC处理后,细胞的线粒体膜通道逐渐开放;经MALDI-TOF鉴定发现了2个差异表达的蛋白,即抗增殖蛋白(prohibitin isoform 1),细胞内热休克蛋白(heat shock protein)。