双酶法制备具有促皮肤成纤维细胞活性的马鹿茸胶原蛋白肽

胶原蛋白作为细胞外基质的主要成分与细胞的增殖、分化等密切相关。为探究制备具有促进皮肤成纤维细胞增殖功能的马鹿茸胶原蛋白肽的适宜工艺条件,本研究以马鹿茸为原料,采用Alcalase和胰蛋白酶进行酶解,以水解度、多肽得率和正常人皮肤成纤维细胞(NHDF细胞)增殖率为目标值进行单因素实验和正交实验,确定适宜的工艺条件。实验结果表明,马鹿茸胶原蛋白肽适宜制备条件为:先在底物浓度1%,酶底比2%,p H 9.0,温度60℃条件下采用Alcalase进行酶解;再在底物浓度1%,酶底比6%,p H 8.0,温度42℃条件下采用胰蛋白酶酶解,酶解产物最终水解度为21.7%,多肽得率是86%,细胞增殖率为22.75%。Alcalase-胰蛋白酶双酶分步水解马鹿茸胶原蛋白可获得促进正常人皮肤成纤维细胞增殖率较高的胶原蛋白肽。     

鱼鳞胶原多肽的制备研究

利用单因素实验优化热水法提取鱼鳞胶原蛋白工艺,使用正交实验优化胶原多肽酶解工艺。最佳提取工艺为:温度70℃,时间6h,料液比1∶20,胶原蛋白的得率为32.55%;酶解最佳工艺为:pH9.5,温度55℃,时间2.0h,酶量0.3%,最大水解度达23.17%;用氨基酸自动分析仪和凝胶渗透色谱法测定胶原多肽氨基酸分布情况和分子质量,结果表明:氨基酸组成符合胶原蛋白特征,胶原多肽分子质量大部分在1000u以内。     

酶解法制备鹿茸多肽的研究

研究酶解法制备鹿茸多肽的条件,采用双酶水解的方法制备鹿茸多肽。在相同的条件下,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解鹿茸蛋白。以水解度和多肽得率为指标,确定了胰蛋白酶和复合蛋白酶为最佳酶系组合。通过单因素实验和正交实验得出最佳的酶解工艺条件:温度48℃、pH7.2、底物浓度7.5%、酶与底物浓度比6000U/g,两种酶比例为1:1,水解时间4h。在此条件下用胰蛋白酶和复合蛋白酶对鹿茸蛋白水解,水解度为32.5%,多肽得率为72.8%。     

酶解法制备鹿角盘胶原蛋白的工艺

确定鹿角盘胶原蛋白的酶解法制备工艺。采用正交试验考察法,优选出最佳提取工艺,用高效凝胶色谱法,筛选最佳酶解条件。鹿角盘胶原蛋白的最佳制备工艺为:料液比(g/mL)1:10,水煮5 h,提取4次,胰蛋白酶与底物(鹿角盘粉)比是1:10 000,酶解时间为1.5 h。验证试验结果表明,鹿角盘胶原蛋白收率为22.31%,蛋白含量为66.32%。     

鲢鱼鳞胶原多肽的酶法制备及性质研究

用微生物胶原蛋白酶对鱼鳞胶原蛋白进行酶解制备胶原多肽。采用正交试验优化提取工艺,优化的工艺参数为:40℃、6h和pH=7.5。SDS-PAGE结果显示,所制得的多肽分子质量主要分布在20.0 ku以下,表明胶原蛋白酶对胶原蛋白产生了明显的降解作用。对鱼鳞胶原多肽的性质进行分析,其外观为浅咖啡色,略有腥味,pI约为4.7,微生物学指标符合特级全脂乳粉标准。该鱼鳞多肽的自由基清除能力(S.A.)为15.89%,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为1.0 mg/mL和0.5 mg/mL。表明鲢鱼鳞胶原多肽在食品添加剂方面有一定的应用潜力。     

超声辅助核桃饼脱脂和多肽制备工艺的优化

采用超声辅助核桃饼脱脂,并以脱脂核桃粉为原料制备核桃蛋白,采用碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备多肽。通过单因素实验和正交实验对超声辅助核桃饼脱脂和核桃多肽制备工艺条件进行优化,并对最优条件下制备的核桃多肽的特性进行分析。结果表明:超声辅助核桃饼脱脂最优条件为料液比1∶20、超声功率500 W、超声时间140 min,在最优条件下脱脂率为91.23%,蛋白损失率为11.32%;酶解制备核桃多肽的最优工艺条件为酶解温度50℃、酶解pH 9、加酶量3.0%、酶解时间5.0 h,在最优条件下水解度达到22.63%,多肽得率为88.24%。核桃多肽粗蛋白质含量约为95%,相对分子质量小于1 000 Da的多肽占比达91.61%。     

梅花鹿鹿筋胶原蛋白提取工艺条件优化

为应用胃蛋白酶酶解法从鹿筋中提取制备胶原蛋白。采用单因素试验和正交试验筛选出鹿筋胶原蛋白提取的最佳条件为醋酸体积分数5.5%、料液比1:7(mL/g)、浸提时间14h,胃蛋白酶与底物比1:1000(g/g)、酶解时间24h。验证实验结果表明,采用本方法提取的鹿筋胶原蛋白收率为74.56%,蛋白含量为65.54%。本实验优选所得梅花鹿鹿筋胶原蛋白提取工艺,方法简便,提取率高。     

不同生长阶段鹿茸中胶原含量比较及提取条件优化

以梅花鹿鹿茸为原料,研究不同生长阶段鹿茸中胶原含量及胶原提取效果并确定适宜提取条件。采用胃蛋白酶法提取胶原,采用Box-Behnken中心组合试验设计优化胶原提取条件。结果表明：二杠茸中胶原含量和得率均高于毛桃茸和三杈茸,分别为65.8mg/g和4.53%;胶原提取适宜工艺条件为提取时间52h、酶用量5%、液料比23:1(mL/g),在此条件下鹿茸胶原得率为5.92%。     

酶法制备东北林蛙皮胶原多肽及体外抗氧化活性

目的:研究东北林蛙皮胶原多肽的酶法制备工艺和其体外抗氧化活性。方法:首先对6种蛋白酶进行筛选,确定试验用蛋白酶,然后用正交试验的方法对最适蛋白酶的水解条件进行优化,最后用2种体系(超氧阴离子和DPPH法)评价最适工艺条件下提取的林蛙皮胶原多肽的抗氧化活性,并用凝胶层析法测定林蛙皮胶原多肽的相对分子质量分布。结果:以水解度为指标,确定碱性蛋白酶最为最适蛋白酶,其水解林蛙皮胶原蛋白的最佳工艺为水解时间5 h、底物浓度6%、酶与底物比(E/S)15%;林蛙皮胶原多肽对O_2~-和DPPH自由基都有很强的清除活性,IC_(50)分别为1.022 mg/mL和0.041 mg/mL;林蛙皮胶原多肽相对分子质量变异很大,大多集中在(1000~5000)u之间。结论:碱性蛋白酶水解林蛙皮胶原蛋白后得到的林蛙皮胶原多肽具有很强的抗氧化活性,值得深入研究和开发。     

响应面法优化鲟鱼皮胶原蛋白多肽的酶解工艺

为了解决胶原蛋白多肽制备得率低的问题,以鲟鱼-甲骨板皮胶原蛋白多肽得率为主要指标,在单因素试验基础上,进一步利用响应面模型试验确定加酶量、提取时间、液料比3个因素的最优条件,并建立了关系模型。试验结果表明:影响鲟鱼鱼皮胶原蛋白多肽得率的3个因素主次顺序为:液料比酶解时间加酶量,最优提取工艺为:0.5 mol/L的乙酸与原料之间的液料比为14.02,加酶量为1.69%,提取时间为8.51 h。在此条件下胶原蛋白多肽得率为78.86%,且产物主要为小分子胶原蛋白,峰值分子量为3719 u。     

不同方法提取鮟鱇鱼皮胶原蛋白的比较和分析

为高效获得胶原蛋白,以鮟鱇鱼鱼皮为原料,以风味蛋白酶添加量、碱性蛋白酶添加量、超声时间、酶解时间、酶解温度和pH值为试验因素,采用超声-双酶法和双酶法提取胶原蛋白,利用正交试验确定胶原蛋白的最佳提取工艺并对结果进行比较分析,得出较好的提取方法。结果表明,超声-双酶法提取胶原蛋白最佳提取工艺为:风味蛋白酶添加量3 000 U/g,碱性蛋白酶添加量5 000 U/g,超声时间70 min,酶解时间5 h,酶解温度50℃,在此条件下得到胶原蛋白提取率为(8.86±0.64)%;双酶法提取胶原蛋白最佳提取条件为:风味蛋白酶添加量5 000 U/g,碱性蛋白酶添加量5 000 U/g,酶解温度55℃,p H8.0,在此条件下得到胶原蛋白提取率为(4.55±0.20)%,其中风味蛋白酶添加量比超声-双酶法多2 000 U/g,且胶原蛋白提取率比超声-双酶法低4.31%。综上可知,选取超声-双酶法提取鮟鱇鱼皮胶原蛋白。     

正交试验优化哈蟆油蛋白双酶法水解工艺

目的：考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法：以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果：最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比（m/m）1∶2 000、酶解时间2 h、碱性蛋白酶与底物比（m/m）1∶100、酶解时间6 h,酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5 000所占的比例为94.85%,哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49.85%。结论：胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地降低哈蟆油蛋白的相对分子质量,利于人体吸收。     

利用鲨鱼软骨制备钙螯合胶原肽及其性质的研究

以鲨鱼软骨为原料,通过单因素实验和正交实验优化胶原肽螯合钙的酶解制备工艺。结果发现,当酶解时间、酶添加量、底物浓度分别为1 h,0.25%,25 mg/m L时,制备的鲨鱼软骨胶原肽的钙螯合能力可达1087.01 mg/100 g蛋白。制备的钙螯合胶原肽小于5000 u的组分约占84%,天冬氨酸和谷氨酸占总氨基酸的比例为17.07%,疏水性氨基酸占总氨基酸的比例为41.24%,而必需氨基酸占总氨基酸的比例只有22.81%。根据红外光谱和扫描电镜结果,发现鲨鱼软骨胶原肽螯合钙的微观结构均匀致密,不仅具有胶原蛋白的特征,还含有硫酸软骨素的特征。     

酶解罗非鱼骨提取胶原多肽的工艺优化

以罗非鱼骨为研究对象,研究其胶原蛋白酶解为胶原多肽的工艺。通过单因素和正交试验,以水解度和胶原蛋白提取率为考核指标,确定了酶解罗非鱼骨的最佳用酶为碱性蛋白酶,最佳工艺条件为:酶解4 h,加酶量4 000U/g,pH 10.5,底物浓度4.5%。在此条件下,鱼骨的水解度为28.81%,胶原多肽提取率为45.02%。试验为深入研究和开发罗非鱼骨胶原多肽及其相关产品提供了理论和技术基础。     

胶原蛋白的提取及其纳米纤维的制备与表征

为提高羊皮中胶原蛋白的提取率和利用率，采用酸酶复合法提取羊皮胶原蛋白，再利用静电纺技术制备胶原基纳米纤维。以羊皮胶原蛋白提取率为评价指标，考察料液比、乙酸浓度、胃蛋白酶浓度和酶解时间四个因素对羊皮胶原蛋白提取效果的影响，确定单因素最优水平；在此基础上，采用正交试验设计对羊皮胶原蛋白提取的工艺条件进行优化，并通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描、SDS-PAGE图谱和扫描电镜等生化技术探讨酶解过程对胶原蛋白结构性质的影响；然后将胶原蛋白和聚乳酸复合静电纺丝，制备得到胶原基纳米纤维。结果表明，酸酶复合法提取羊皮胶原蛋白最佳工艺为：料液比1:25 g/mL、乙酸浓度1.2 mol/L、胃蛋白酶用量1.0%、酶解时间72 h，在此条件下羊皮胶原蛋白提取率为38.42%±0.49%；紫外光谱扫描显示羊皮胶原蛋白于230 nm附近出现最大紫外吸收峰；红外光谱扫描、SDS-PAGE图谱分析表明羊皮胶原蛋白主要有α₁、α₂、β三种亚基成分组成，属于Ⅰ型胶原蛋白，且胶原蛋白的空间结构保留完整；扫描电镜直观表明了羊皮胶原蛋白的纤维网络结构保留较完整；静电纺丝得到的胶原...     

小分子鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化性测定

以黑鱼鱼鳞为原料通过碱酶两步法制备高提取率小分子胶原蛋白肽。采用单因素试验筛选碱法提取条件:氢氧化钠浓度0.75 mol/L,温度50℃,提取时间4.5 h,蛋白提取率为96.45%。以水解度为考察指标,通过单因素试验确定酶法制备小分子胶原蛋白肽条件:酶用量6%,时间3h,pH9,温度50℃。此条件下蛋白质水解度为22.87%。凝胶电泳图分析结果显示相对分子质量在17.7 ku以下的多肽占总体的93.72%,其中低于6.5 ku的小分子肽占总体的56.51%,且具有较好抗氧化性。     

两步酶解法制备小龙虾副产物多肽及其抗氧化性研究

该研究采用两步酶解法制备小龙虾副产物多肽,先用碱性蛋白酶水解提取小龙虾副产物中粗蛋白,利用单因素和正交试验确定粗蛋白的最佳制备条件：2%碱性蛋白酶,酶解2 h,料液比1∶20（g/mL）,酶解温度55℃、pH8.5,虾副产物蛋白得率最高为64.32%;胰蛋白酶二次酶解虾副产物粗蛋白制备多肽,以蛋白水解度为标准,利用正交试验优化得到酶解制备多肽的工艺条件：2%胰蛋白酶、酶解4 h,料液比1∶15（g/mL）,酶解温度37℃、pH8.0的条件下,虾副产物蛋白水解度为45.2%。二次酶解产物比一次酶解产物的总抗氧化能力强;Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）图谱显示二次酶解多肽的分子质量主要集中在3.3 kDa以下;多肽中含有18种氨基酸,其中必需氨基酸占总氨基酸的64.36%。小龙虾副产物多肽可用于功能食品及调味品的开发。     

骨胶原蛋白的酶解工艺条件

采用胰蛋白酶酶解骨胶原蛋白制备胶原多肽,通过单因素和响应面试验,以水解度为指标,确定胰蛋白酶酶解胶原蛋白的最佳工艺条件。结果表明：最优工艺条件为pH6.91、反应温度60℃、酶添加量200mg/g 胶原蛋白、底物水平0.1/61.5(g/mL)、水解时间为4h;此条件下的胶原蛋白水解度达到29.36%。酶解后胶原蛋白的溶解性及乳化性均显著提高。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。     

鱼胶原蛋白酶解工艺及其活性肽抑制ACE酶的研究

本研究通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶水解鱼胶原蛋白制备胶原多肽的工艺。采用高效液相色谱法测定海水鱼与淡水鱼胶原多肽血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性来表征其降血压功能。研究表明:胃蛋白酶制备鱼胶原多肽的最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,初始p H为2.5,酶与底物比例为1∶125(w/w),底物质量分数为3%(w/v),水解时间为12 h,此时鱼胶原蛋白溶液的水解度为19.17%。研究发现海洋鱼胶原蛋白和淡水鱼胶原蛋白的酶解上清液均具有较高的ACE抑制活性,半抑制浓度IC50分别为1.34 mg/m L和1.52 mg/m L。利用超滤离心管获得的不同分子量组分中,分子量小于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅰ和淡水胶原多肽CP-Ⅲ的ACE抑制活性的半抑制浓度IC50分别为0.43 mg/m L和0.60 mg/m L,而相应分子量大于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅱ和淡水胶原多肽CP-Ⅳ的半抑制浓度IC50分别为1.78 mg/m L和1.69 mg/m L。