软枣猕猴桃多糖的分离纯化及抗氧化活性测定

对微波辅助提取的软枣猕猴桃多糖进行分离纯化并对各纯化组分的抗氧化活性进行测定。利用DE-AE-纤维素阴离子交换层析对软枣猕猴桃多糖进行初步分离,得到1个水洗组分和3个盐洗组分;利用Sephade-xG-100、G-200凝聚柱层析对其进行进一步分离纯化。结果表明:4个组分都为均一多糖且都不含有蛋白质;软枣猕猴桃多糖对DPPH自由基和羟基自由基具有一定的清除能力,对超氧阴离子自由基的清除能力很弱,盐洗组分的抗氧化活性明显优于水洗组分;0.1盐洗组分(0.1 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.2盐洗组分(0.2 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、0.3盐洗组分(0.3 mol/L NaCl溶液洗脱的组分)、Vc清除DPPH自由基的IC50分别为0.57、1.61、1.18、0.03 mg/mL;清除羟基自由基的IC50分别为1.5、5.6、2.7、0.2 mg/mL;0.1盐洗组分为软枣猕猴桃多糖中主要的抗氧化活性组分。     

灵芝子实体和孢子粉纯化多糖体外抗氧化活性研究

为研究同源灵芝子实体和灵芝孢子粉纯化多糖的体外抗氧化活性,利用DEAE-650离子交换树脂,对提取获得灵芝子实体粗多糖(GLP)和灵芝孢子粉粗多糖(GLSP)进行分离纯化,GLP水洗脱得到GLP-1,0.2 mol/L NaCl洗脱得到GLP-2,GLSP水洗脱得到GLSP-1,0.2 mol/L NaCl洗脱得到GLSP-2。分别考察了4种纯化多糖的ABTS+自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原能力,结果表明,不同灵芝纯化多糖的抗氧化能力不同,GLP-2的4种抗氧化活性均最高,四种抗氧化能力最高,分别为98.09%、75.88%、81.55%和0.728。     

莲藕多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

本实验从莲藕渣中通过水提醇沉法提取得到水溶性莲藕粗多糖NPh,采用DEAE Sephrose Fast Flow离子交换层析法纯化NPh,实验不同pH值及盐浓度对NPh的洗脱效果,确定了合适的纯化条件为以pH5.0 0.05mol/L HAc-NaOAc缓冲液作为起始缓冲液,起始缓冲液加0.5mol/L NaCl进行分步洗脱,洗脱速度为6.0ml/min,收集得到均-多糖组分NPhz.通过清除DPPH·自由基和保护红细胞氧化溶血的实验研究NPh2的抗氧化活性,结果显示,NPh不存在清除DPPH·自由基的作用,能够有效抑制红细胞氧化损伤.     

双孢菇菇柄多糖柱层析纯化及单糖组成

以双孢菇菇柄为试材,首先对经超声提取得到的菇柄多糖进行柱层析分离纯化,然后对柱层析得到的多糖组分别采用紫外光谱和柱层析进行纯度分析,并进行红外光谱分析和单糖组成分析。结果表明,脱蛋白双孢菇菇柄多糖经DEAE Sephadex A-25柱层析纯化共得到4个组分,收集其中两个较多的组分(蒸馏水和0.1 mol/L NaCl洗脱组分),经紫外光谱扫描无核酸和蛋白质,经Sephadex G-200柱层析鉴定均为单一峰。所得两种多糖组分经FT-IR红外光谱分析,均含有多糖特征吸收峰,且均为吡喃糖环β-异构体的多糖。菇柄蒸馏水洗脱多糖组分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖组成,0.1 mol/L NaCl洗脱组分是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖组成。     

三角帆蚌多糖的纯化工艺研究

利用离子交换及凝胶过滤层析方法对三角帆蚌粗多糖进行分离纯化.试验结果表明:采用弱阴离子交换色谱分离三角帆蚌粗多糖,用0.05 mol/L pH 7.9的Tris-HCl缓冲液以及0.1、0.2、1 mol/L NaCl洗脱液进行分段洗脱,得到4个组分;多糖含量较高的前2个组分经Sepharose 6B凝胶纯化,用双蒸水洗脱到2个组分,分别命名为MPa-1-1和MPa-2-1:经醋酸纤维素薄膜电泳法和高效液相凝胶色谱法鉴定,两者为均一纯多糖,测得MPa-1-1的分子质量为1589.62 kDa,MPa-2-1的分子质量为1741.80 kDa.     

大叶麻竹笋多糖分离纯化工艺

以水提醇沉法提取到的大叶麻竹笋粗多糖为原料,对其进行脱蛋白、透析脱色、DEAE-52纤维素柱层析分级、Sephadex-50葡聚糖凝胶柱分级处理,探究大叶麻竹笋多糖的分离纯化工艺。研究结果表明,木瓜蛋白酶结合Sevag法是最佳脱蛋白条件;进行DEAE-52纤维素柱分级,以纯水、0.05 mol/L和0.1 mol/L NaCl溶液洗脱获得了3 种主要的大叶麻竹笋多糖组分BSP1、BSP2、BSP3;再进行Sephadex-50葡聚糖凝胶分级,分别纯化得到了BSP1A、BSP2A、BSP3B 3 种多糖组分,这3 种多糖组分基本不含蛋白质和核酸,且纯度均达到了95.3%以上。     

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/mL时,在30 ℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L NaCl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/mL,0.2 mol/L NaCl洗脱多糖浓度为0.38 mg/mL。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。     

不同型式和洗脱剂对离子交换树脂纯化发菜多糖的影响

采用离子交换色谱对发菜多糖进行分离纯化,对OH-型和Cl-型交换色谱对发菜多糖分离纯化效果进行初步的比较。离子交换色谱柱(Ф2.6×30),采用DEAE-Cellulose离子交换树脂和NaCl梯度洗脱对发菜多糖进行纯化。使用PeakFit4.12对色谱峰的峰高、峰宽、保留体积、对称因子各参数进行比较。选择一种分离纯化效果较好的离子交换色谱类型,使用上样浓度为1mg/mL(上样体积50mL),分别采用0～1mol/LNaCl、CH3COONa、NH4Cl溶液为洗脱剂,洗脱流速为1.0mL/min,比较三者洗脱效果,进而确定其最佳洗脱剂和洗脱浓度。结果表明,OH-型离子交换色谱对发菜多糖有更好的分离纯化效果,NaCl的洗脱效果更好,最佳洗脱浓度为0.2mol/L。     

绿豆多糖制备及抗氧化特性研究

采用响应面法对绿豆仁中多糖碱液提取工艺进行优化,在此基础上进一步开展分离纯化及抗氧化特性研究。结果表明,碱法提取绿豆多糖(Alkali extraction mung bean polysaccharides,AEMP)最佳工艺参数为碱液浓度0.02 mol/L,液料比20∶1 mL/g,提取温度50℃,提取时间3 h,最终AEMP得率9.70 mg GE/g DW。进一步采用DEAE-2纤维柱和SephadexG-100凝胶柱分离纯化绿豆多糖,得到一个中性组分AEMP-1和一个酸性组分AEMP-2。抗氧化特性结果表明AEMP及其纯化组分对羟自由基和DPPH自由基均有良好清除效果,AEMP-2抗氧化活性最强,对羟自由基和DPPH自由基半数抑制浓度IC50值分别为4.71 mg/mL和1.03×10-1mg/mL。表明绿豆多糖具有良好的抗氧化特性。     

紫芝胞外多糖分离纯化及抗氧化性的研究

目的:探讨紫芝(Ganoderma Sinense)胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性.方法:采用乙醇沉淀法、聚酰胺脱蛋白法,DEAE-52阴离子交换色谱柱法分离纯化紫芝胞外多糖;通过对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力的测定确定抗氧化活性.结果:粗多糖经DEAE-52柱层析纯化得到三种多糖组分GSP1、GSP2和GSP3,均具有抗氧化活性.其中GSP2的抗氧化活性尤为明显,在1.6mg/mL时DPPH自由基清除率达到76.3％;在5mg/mL时羟自由基的清除率达到81.5％.结论:三种紫芝胞外多糖组分具有较强的抗氧化活性,其中GSP2最为明显.     

黄秋葵多糖提取条件优化及多糖纯度检测

以黄秋葵嫩果为原料,通过热水浸提法,乙醇沉淀的工艺获得水溶性黄秋葵多糖,采用DEAE-纤维素离子交换柱纯化多糖,探讨不同pH,不同NaOH浓度和不同NaCl浓度对黄秋葵多糖的洗脱效果,初步确定合适的纯化条件为:以pH 6.0多糖溶液上样,上样量25 m L,先用纯水洗脱,再分别用0.05,0.1,0.3,0.5和0.7 mol/L NaOH进行分步洗脱,洗脱速度为0.47 m L/min,纸层析检验0.05 mol/L NaOH洗脱得较均一多糖。     

杏鲍菇多糖的分离纯化、乙酰化修饰及其抗氧化活性

目的:分离纯化杏鲍菇多糖,对其进行乙酰化修饰,并研究修饰前后以及不同取代度对多糖抗氧化活性的影响。方法:水提醇沉法制备杏鲍菇多糖,经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephacryl-S400分子筛色谱柱分离纯化获得均一组分,采用乙酸酐法对其进行乙酰化修饰,制备三个不同取代度的乙酰化杏鲍菇多糖,采用体外抗氧化模型评价乙酰化杏鲍菇多糖的活性。结果:杏鲍菇多糖经分离纯化得到组分PEP-I-1,乙酰化修饰得到三个乙酰化产物Ac-PEP-I-1-a、Ac-PEP-I-1-b和Ac-PEP-I-1-c,取代度分别为0.132、0.406和0.537。杏鲍菇多糖修饰前后对自由基均具有清除作用,且呈现一定的剂量关系。结论:乙酰化修饰提高了杏鲍菇多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,取代度越大,清除能力越强;乙酰化修饰减弱了对DPPH自由基的清除作用,且取代度越大,清除能力越弱。     

黄粉虫粗多糖的初步纯化及体外抗氧化活性研究

以黄粉虫粗多糖为原料,通过单因素脱蛋白试验,利用响应面法优化脱蛋白工艺,经DEAE-纤维素阴离子层析柱纯化,对多糖进行体外抗氧化活性分析。结果表明：各因素对黄粉虫粗多糖蛋白去除率的影响程度为：脱蛋白次数>振摇时间>静置时间。当Sevage试剂加入量与粗多糖溶液体积比为1:1时,优化条件为：振摇时间17 min、静置时间19 min、脱蛋白次数2次,蛋白去除率达61.25%。与未除蛋白的粗多糖相比,除蛋白后黄粉虫多糖对DPPH自由基、羟自由基清除能力的IC₅₀减小,分别为3.052、7.276 mg/mL,说明多糖抗氧化活性增强。黄粉虫多糖经不同浓度NaCl溶液梯度洗脱纯化获得4个主要组分,其中0.5 mol/L NaCl洗脱的多糖体外抗氧化性综合能力最强。     

铜螯合亲和层析分离抗氧化活性蚕豆蛋白酶解物

采用铜离子螯合亲和层析柱对不同铜螯合能力的蚕豆蛋白酶解物组分进行分离,并探讨其抗氧化活性机制与铜螯合能力之间的关系。结果表明,金属亲和层析的最优条件为:平衡缓冲液为p H 5.0,浓度为0.05 mol/L的Na Ac-HAc;上样量为20 mg/m L的蚕豆蛋白酶解物1 m L;洗脱剂为0.04 mol/L咪唑。洗脱得到不能螯合铜的蚕豆蛋白酶解物组分F_1及能螯合铜的组分F_2,测定其总还原力、抑制羟自由基能力与铜螯合量,发现抗氧化活性的关系为F_2蚕豆蛋白酶解物F_1(P0.05),铜螯合量的关系也为F_2蚕豆蛋白酶解物(未经分离)F_1(P0.05),表明蚕豆蛋白酶解物的铜螯合活性越高,其抗氧化活性越高。     

红曲霉菌胞外多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性测定

目的:分离纯化红曲霉菌胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS),测定各组分的抗氧化活性并对其结构进行初步表征。方法:红曲霉菌发酵液经乙醇沉淀获得胞外多糖,经精制除杂和DEAE-纤维素柱层析法分离纯化获得多糖组分,再分别用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)、柱前衍生PMP-HPLC法测定相对分子质量(Mw)和单糖组成,测定多糖组分清除DPPH和羟自由基的能力,评价其体外抗氧化活性。结果:EPS经分离得到三个组分EPS-1、EPS-2和EPS-3,相对分子质量分别为8673、143537、238742 Da。EPS-1、EPS-2均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1∶0.301∶2.052∶3.614和1∶2.475∶1.950∶1.532,EPS-3由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1∶0.401∶0.066∶0.307∶2.974。三个多糖组分对DPPH·和羟自由基均有清除能力,并与多糖浓度呈现正相关。当多糖浓度为1 mg/m L时,三个组分对DPPH清除率分别为16.4%、15.9%和14.8%;对清除羟自由基的清除率分别为40.4%、39.6%、63.8%。结论:红曲霉菌胞外多糖各组分的相对分子质量和单糖组成比例均有差异;对羟自由基、DPPH·的清除作用也存在差异,这种活性差异可能与各组分Mw及结构差异相关。     

土党参多糖分离纯化及抗氧化能力分析

从土党参中分离纯化多糖并进行体外抗氧化能力分析。试验通过微波辅助提取、乙醇沉淀、Sevag去蛋白质、透析及DEAE-Cellulose 52柱层析、Sephadex G-100柱层析分离纯化土党参多糖,采用比色法测定其含量。以Vc为对照,检测多糖组分对DPPH·、·OH和O_2~-·自由基的清除能力,得出土党参多糖单组分的体外抗氧化能力。试验结果:微波提取土党参多糖得率为12.58%,在4次脱蛋白后,蛋白脱出率达到55.2%,多糖的损失率为26.4%。经柱层析分离纯化得到2个含量较高的多糖组分CLP-1和CLP-2。它们均对DPPH·、·OH和O_2~-·自由基有一定抑制作用并表现出量效关系。     

铁棍山药多糖纯化及抗氧化活性

对铁棍山药粗多糖进行纯化分离获得单体组分,并对其抗氧化活性进行评价。利用AB-8大孔树脂对铁棍山药多糖进行富集纯化,再利用DEAE-52纤维素层析柱和Sephadex G-100层析柱分离多糖粗品,利用DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和总还原能力测定评价分离得到的3种铁棍山药多糖组分的抗氧化活性。结果显示,AB-8大孔树脂可纯化铁棍山药粗多糖,使其纯度从53.13%提高到82.57%,获得多糖粗品,洗脱参数为:上样浓度为1.12 g/L,上样体积为4000 mL,上样流速为500 mL/h,洗脱液速度为750 mL/h,洗脱液体积为1000 mL,解吸率可达到95.62%。经过DEAE-52纤维素层析柱和Sephadex G-100层析柱分离得到3种铁棍山药多糖组分DOTP1、DOTP2和DOTP3,得率分别为0.34%、0.42%和0.36%,纯度分别为93.11%、91.22%和92.75%。DPPH自由基清除实验、ABTS自由基清除实验和总还原能力测定结果显示,铁棍山药多糖DOTP1的抗氧化活性优于DOTP2和DOTP3,而3种多糖组分的抗氧化活性都略优于阳性对照VE。研究所用纯化分离方案可实现铁棍山药多糖的分离纯化,得到的3种多糖组分具有较好的抗氧化活性。     

新疆沙枣多糖的提取分离及抗氧化活性研究

采用水提醇沉法提取新疆沙枣多糖,并采用DM-18型大孔树脂对粗沙枣多糖进行分离纯化,确定了最佳的分离条件。通过粗沙枣多糖和纯化后的沙枣多糖对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力进行比较。结果表明:在沙枣多糖样品溶液2.0 mg/m L,上样速率为1.5 BV/h,上样液p H值为7.0,上样量为3.0 BV、洗脱剂乙醇浓度为35%、洗脱剂用量为3.0 BV、洗脱速率为1.0 BV/h时,洗脱剂p H值为8时,DM-18型大孔树脂对沙枣多糖的动态吸附率和解吸率分别达到90.23%和92.37%,粗沙枣多糖的纯度为42.33%,纯化后的多糖纯度为70.56%。粗多糖和纯化后多糖对DPPH·、·OH、O2-·均有清除作用,纯化后多糖的抗氧化活性大于粗多糖。     

粉红女士苹果多糖分离纯化、结构表征及抗氧化活性研究

提取粉红女士苹果多糖半纯品并纯化,比较苹果多糖半纯品和纯品的表征性结构和抗氧化活性差异。以粉红女士苹果为试材,通过水提醇沉得多糖半纯品(PPS),用DEAE-52纤维素柱进一步分离纯化收集纯品组分,苯酚硫酸法、气相色谱法、高效凝胶渗透色谱法分别测定各多糖组分的含量、单糖组成和分子质量,进一步用傅里叶变换红外光谱和差示扫描量热法表征各多糖组分。结果表明:PPS上样量200 mg,以0.1,0.2 mol/L Na Cl水溶液依次在DEAE-52柱上洗脱得两种纯品组分(PPS-1和PPS-2)。PPS,PPS-1,PPS-2多糖含量分别为67.32%,89.74%,90.88%,重均分子质量分别为111.28,52.79,258.39 ku,单糖组成相同,其中PPS中半乳糖醛酸、PPS-1中阿拉伯糖和半乳糖醛酸、PPS-2中半乳糖和半乳糖醛酸分别占51.6%,69.9%和81.3%。PPS,PPS-1,PPS-2均具有植物多糖特征吸收峰,三者的热学特性与化学组成吻合。抗氧化试验表明,PPS还原力和清除DPPH·,ABTS+·能力高于PPS-1和PPS-2,三者清除·OH能力无显著差异。PPS较PPS-1、PPS-2制备简单,抗氧化活性高,可作为粉红女士苹果的高附加值产品运用到功能食品、医学和其它相关领域。     

分心木酸性多糖SJP-2的理化性质及其抗氧化活性研究

以分心木为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱色素、脱蛋白以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephadex-G50凝胶柱色谱分离纯化得到一种酸性多糖组分(SJP-2),再对该组分进行理化性质及抗氧化活性分析。结果表明:SJP-2不含蛋白,是一个低分散度,分子量较为均一的多糖,分子量为3.239×10~3g/mol;HPLC分析得知SJP-2为一种酸性多糖,其单糖组成及摩尔比例为阿拉伯糖∶半乳糖∶葡萄糖∶半乳糖醛酸=1∶2.62∶4.45∶18.53;抗氧化活性测得SJP-2清除DPPH自由基、羟自由基以及ABTS自由基的IC_(50)分别为0.094、0.945、0.591 mg/m L,还原能力在1.0 mg/m L时达到1.158,ORAC值为(1217.99±31.22)μmol TE/g,说明SJP-2具有较高的体外抗氧化能力。