《中国生物制品学杂志》2001年第14卷总目录

论 著 噬菌体展示短肽模拟腺病毒表位的研究（１） 腺病毒载体介导的ＨＳＶ－ｔｋ基因杀伤肿瘤细胞的研究（４） 荷瘤小鼠骨髓来源的树突状细胞诱导产生的抗肿瘤 免疫反应（７） 中国流行株ＨＩＶ－１　Ｇａｇ与ＩＦＮ－α２ｂ重组质粒的构 建与实验免疫研究（１０） 利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白（１４） ＨＣＶ Ｃ区基因片段的克隆、表达及纯化（１７） 人角质细胞生长因子的克隆及表达（２１） 抗轮状病毒ＩｇＹ的研制（２４） 口服双歧杆菌、酷酸梭菌活菌制剂（肠康平）的药效作 用（２７） 应用ＰＣＲ…     

反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6生长的影响

目的探讨反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞Ｃ６增殖及凋亡的作用。方法将可在真核细 胞表达大鼠反义 ｃ－ｍｙｃ基因的质粒 ｐＣＥＰ４ＡＳＣＭＲ以脂质体 ＦｕＧＥＮＥ６为介导,转染到大鼠脑恶性胶质瘤细胞 Ｃ６株 中,经ＭＴＴ检测,软琼脂集落生长,吖啶橙染色,琼脂糖电泳等方法分析实验结果。结果反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒 ＤＮＡ具有抑制瘤细胞增殖的作用,并能引起瘤细胞凋亡;脂质体ＦｕＧＥＮＥ６有助于提高质粒ＤＮＡ的转染效率。结论 反义ｃ－ｍｙｃ基因质粒可抑制ｃ－ｍｙｃ基因的过度表达,促使肿瘤细胞凋亡,达到治疗脑神经胶质细胞瘤的目的。     

EXPERIMENTAL INVESTIGATION OF KINETIC AND TRANSPORT PARAMETERS IN A WALL－COOLED FIXED－BED REACTOR

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮＯＦＫＩＮＥＴＩＣＡＮＤＴＲＡＮＳＰＯＲＴＰＡＲＡＭＥＴＥＲＳＩＮＡＷＡＬＬ－ＣＯＯＬＥＤＦＩＸＥＤ－ＢＥＤＲＥＡＣＴＯＲＺｈｅｎ－ＭｉｎＣＨＥＮＧａｎｄＷｅｉ－ＫａｎｇＹＵＡＮ（ＵＮＩＬＡＢＲｅｓｅ...     

中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究

目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体,构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ,通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖,诱导特异性 ＣＴＬ反应,当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平,构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。     

噬茵体展示短肽模拟腺病毒表位的研究

目的为了获得含有中和抗体相关的３型腺病毒模拟表位短肽的噬菌体克隆,并观察其对该病毒 感染Ｈｅｌａ细胞的保护效应,为设计新疫苗提供新的思路。方法用３型腺病毒中和抗体筛选噬菌体随机十五肽 库,经三轮筛选后,随机挑取了２２个噬菌体克隆,分别加入３型腺病毒感染的Ｈｅｌａ细胞,用结晶紫染色法观察Ｈｅｌａ 细胞的病变程度。并选择一个有明显保护作用的阳性噬菌体克隆进行测序。结果８／２２个克隆噬菌体短肽对３ 型腺病毒感染 Ｈｅｌｄ细胞具有保护作用。其中一个有明显保护作用的噬菌体短肽的序列为： ｌｅｕ－ Ｖａｌ－ Ｇｌｙ－ Ｉｌｅ－ Ｔｒｐ －Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｈｉｓ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｌａ,即ＬＶＧＩＷＨＲＬＰＧＡＨＲＧＡ。结论噬菌体短肽可以模拟中和 抗体相关的腺病毒表位,对３型腺病毒感染Ｈｅｌａ细胞有一定的保护作用。     

EHV-1_(CN)与IL-2基因共表达核酸疫苗诱导产生CTL的观察

目的 观察ＨＩＶ－１ＣＮ　ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因共表达核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ－２诱导产生ＣＴＬ。方法 脂质体介导共表达中国流行株ＨＩＶ－１Ｇａｇ－ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因的核酸疫苗质粒ｐＧＩＬ－２转染ＢＨＫ－２１细 胞,以间接免疫光法鉴定其表达。取ｐＧＰＩＬ－２免疫鼠脾细胞,检测ｐＧＰＩＬ－２诱导的细胞毒性Ｔ细胞杀伤活性。 结果ｐＧＰＩＬ－２可有效地诱导ＣＩＬ的产生,并可杀伤ＨＩＶ－１ＣＮ嵌合基因转染的靶细胞。结论 为进一步设计中国流行株ＨＩＶ－１核酸疫苗提供了重要实验依据。     

高合金钢中铬钒连续测定的方法研究

高合金钢中铬钒连续测定的方法研究周淑芝，孙福民，谭舒平ＣＯＮＴＩＮＵＯＵＳＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＯＦＣＨＲＯＭＩＵＭＡＮＤＶＡＮＡＤＩＵＭＩＮＨＩＧＨＡＬＬＯＹＳＴＥＥＬ１前言目前测定高合金钢中铬钒的方法很多，主要是将铬钒同时测定，然后将铬变成六...     

1-苯基-3-甲基-4-(α-呋喃甲酰基)-5-吡唑酮与中性磷萃取剂对钍(IV)的协同萃取

研究了１－苯基－３－甲基－４－（α－呋喃甲酰基）－５－吡唑酮（ＨＰＭＦＰ,ＨＡ）与氧化三正辛基膦（ＴＯＰＯ,Ｂ）或氧化三苯基膦（ＴＰＰＯ,Ｂ）的甲苯溶液从硝酸介质中对钍（ＩＶ）的协同萃取行为．用斜率法确定了ＨＡ－ＴＰＰＯ－Ｃ６Ｈ５ＣＨ３体系萃取钍（ＩＶ）的协萃配合物组成为ＴｈＡ４·ＴＰ－ＰＯ,求得了体系的协萃平衡常数,比较了在不同稀释剂中ＨＡ－ＴＰＰＯ对钍（ＩＶ）的萃取能力     

酸渣的综合利用

酸渣的综合利用石慕尔ＣＯＭＰＲＯＨＥＮＳＩＶＥＵＴＩＬＩＺＡＴＩＯＮＯＦＡＣＩＤ－ＳＬＵＤＧＥ１．前言在炼油厂烷基化生产和石油产品的硫酸精制等过程中，会产生大量的酸渣。若将其当作燃料使用，则对炉子和管道产生腐蚀而引起穿孔；若将其作为垃圾处理，长期堆放...     

1—2折流换热器流体温度沿程变化及其LMTD的计算

１－２折流换热器流体温度沿程变化及其ＬＭＴＤ的计算梁日忠ＴＨＥＶＡＲＩＡＴＩＯＮＯＦＦＬＵＩＤＴＥＭＰＥＲＡＴＵＲＥＡＬＯＮＧＳＩＤＰＡＳＳＡＮＤＴＨＥＣＡＬＵＡＴＩＯＮＯＦＬＭＴＤＩＮ１－２ＢＡＦＦＬＥＨＥＡＴＥＸＣＨＡＮＧＥＲ１前言换热器设计中，...     

双歧杆菌介导HSV-tk/GCV系统治疗大鼠膀胱癌的疗效

目的观察双歧杆菌介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(Herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(Gancyclovir,GCV)系统治疗大鼠膀胱癌的疗效,并初步探讨其可能的作用机制。方法采用N-甲基亚硝基脲(N-methyl-nitrosourea,MNU)膀胱灌注法建立大鼠膀胱癌模型,将模型大鼠随机分为3组,分别经尾静脉注射生理盐水、携带空载体pGEX-5X-1的双歧杆菌和携带重组质粒pGEX-tk的双歧杆菌(含婴儿双歧杆菌4.4×109个/ml),再联合腹腔灌注GCV(50 mg/kg)治疗,治疗结束后称量各组大鼠膀胱重量;TUNEL染色法检测各组大鼠膀胱组织细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠膀胱肿瘤组织细胞色素C(Cyt-C)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果治疗后,双歧杆菌重组质粒组大鼠膀胱重量明显低于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001),膀胱组织细胞凋亡指数明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001),膀胱肿瘤组织Cyt-C和caspase-9基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001)。结论双歧杆菌介导的HSV-tk/GCV治疗系统治疗大鼠膀胱癌疗效显著;该治疗系统可能通过以Cyt-C为中心的内源性凋亡途径导致膀胱癌细胞凋亡。     

鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。     

重组腺病毒Ad-CMV-TK的构建及其对Lewis细胞的抑制作用

目的构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,并检测Ad-CMV-TK/GCV系统对小鼠Lewis肺癌细胞的抑制作用。方法PCR扩增HSV-TK基因,以复制缺陷型腺病毒为载体构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,在HEK293细胞中包装,CsCl2梯度离心法纯化后,感染Lewis肺癌细胞,Western blot检测HSV-TK蛋白的表达;MTT法检测Ad-CMV-TK/GCV系统对Lewis细胞的体外抑制作用;同时检测Ad-CMV-TK/GCV系统对C57荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果重组腺病毒Ad-CMV-TK感染的Lewis细胞可特异地表达HSV-TK蛋白,Ad-CMV-TK/GCV系统在体外能明显抑制Lewis细胞的生长,当GCV浓度为100μmol/L时,Lewis细胞的存活率仅为16%;在体内能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,与Ad-Blank/GCV对照组和PBS对照组相比,差异具有统计学意义。结论已成功构建了重组腺病毒Ad-CMV-TK,Ad-CMV-TK/GCV系统在体内及体外对小鼠Lewis肺癌细胞均有明显的抑制作用,为进一步研究其抗肿瘤机制及应用奠定了基础。     

特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤效应

目的检测特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。方法采用肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞共培养,分析其免疫表型,并用MTT染色法检测其对肿瘤细胞的杀伤力。结果所获得DC-CIK细胞的CD3异质性T细胞群,对肾透明细胞癌786-0和前列腺癌PC-3细胞的杀伤率分别为70.64%和65.65%。结论DC-CIK细胞对肾透明细胞癌786-0细胞和前列腺癌PC-3细胞具有较强的杀伤效应。     

人类小细胞肺癌细胞转染野生型p53基因发生的凋亡

为了探索p5 3抑癌基因在临床应用中的潜在价值 ,以带有突变型p5 3基因的人类小细胞肺癌细胞株 (LTEP P)为研究对象 ,开发了一种新型的基因转染方法。将构建有野生型p5 3基因cDNA的质粒与阳离子脂质体和转铁蛋白结合成三元复合物 ,再用于LIEP P细胞的基因转染。通过显微观察、吖啶橙荧光染色、琼脂糖凝胶电泳和切口末端标记试验 ,证实细胞发生了凋亡。表明在体外实验中 ,该三元复合物可有效地转染肿瘤细胞 ,而野生型p5 3基因能够诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

超声微泡联合pDsRed2-N1-CD/UPRT融合自杀基因治疗肺癌的机制

目的研究超声微泡联合pDsRed2-N1-CD/UPRT融合自杀基因治疗肺癌的机制。方法采用PCR法扩增大肠杆菌CD和UPRT基因,克隆入pDsRed2-N1载体,构建pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌,提取质粒,酶切及测序鉴定。将质粒与超声微泡融合,将混合物转染A549细胞,测定CD/UPRT基因的直接杀伤效应和旁效应;并检测不同强度的超声对超声微泡与质粒混合物中质粒结构、转染细胞形态及转染效率的影响。结果 pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒经酶切及测序证明构建正确。荧光显微镜下可观察到质粒在超声微泡中的分布。转染A549细胞后,随着5-FU浓度的增加,细胞生长抑制率也增加,可高达58%;在相同剂量的5-FU作用下,增加转染细胞的比例,相应的细胞生长抑制率也随之增加,可高达78%。低能量的超声波对pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒结构无明显改变,电泳条带变化不大,对转染细胞形态也无明显影响,超声介导基因转染率最高可达30%。结论超声微泡能增强CD/UPRT基因对肿瘤细胞的直接杀伤和旁效应,起到治疗肿瘤的作用;低能量的超声微泡能提高CD/UPRT基因对细胞的转染效率,且不会损伤细胞及目的基因的DNA。     

表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用

目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化。结果Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100MOI,作用时间为48h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);AnnexinV染色结果显示,Ad-HN感染48h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性。结论Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应。     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对小鼠乳腺癌4T1细胞生物学行为的影响

目的探讨联氨基姜黄素(Hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小。将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10%(v/v)PBS、10%(v/v)NP、10%(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平。结果透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒。HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P<0.01);与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P<0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P<0.05)。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡。