高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留

本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法.该方法的检出限为2ng/mL,10min内可以得到检测结果.本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致.该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选.     

水产品中恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测及其前处理

目的:结合胶体金标记技术和免疫层析技术建立胶体金免疫层析毛细管检测技术,用于水产品中恩诺沙星残留的快速现场检测。方法:以间接竞争的实验原理,通过优化检测区抗原、质控区二抗、金标一抗检测浓度初步建立胶体金免疫层析毛细管检测方法,并进一步确定其检测灵敏度、特异性、重复性等及前处理的优化操作。结果:该方法检测恩诺沙星的视觉检测限为5 ng/mL,半定量检测限为1.29 ng/mL。在大菱鲆、鲅鱼、舌鳎、南美白对虾阴性样品中的平均添加回收率在78.3%~129%之间,相对标准偏差均小于10%。特异性实验表明,除对环丙沙星外,对其他相似物的特异性较好;环丙沙星的视觉检测限为10 ng/mL,半定量检测限为4.37 ng/mL,满足国标检测的限量要求。同时,针对免疫层析毛细管检测的前处理方法进行初步探究,最终确定采用常温条件下磺基水杨酸提取的前处理方法。结论:恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测技术具有简单、快速、易操作、重复性好的优势,为食品药物残留检测领域提供了检测新方法。同时,选择新型试剂作为胶体金免疫层析毛细管检测技术的前处理方法,该方法可以为多种快检技术的前处理提供理论基础与技术支撑。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

胶体金免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的方法。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立金黄色葡萄球菌肠毒素B的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测;在牛奶样品中添加金黄色葡萄球菌肠毒素B作为模拟污染样品进行检测。结果该法可在5～10min内完成定性和半定量检测,检出限为8ng/ml,线性范围8～1000ng/ml。结论建立的检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素B,并可实现定量,适用于现场快速检测。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法快速检测食品中的米酵菌酸

制备特异性识别米酵菌酸的单克隆抗体,并以胶体金标记用作示踪物,建立胶体金免疫层析快速检测方法。研究胶体金标记体系pH值、抗原、抗体质量浓度、离子强度、表面活性剂以及样品前处理方法等对胶体金层析卡性能的影响。结果表明:在最适条件下,所建立的胶体金免疫层析方法对米酵菌酸的定量检出限为1.2 μg/kg,线性范围1.8~7.2 μg/kg,定性检出限16.0 μg/kg。该方法特异性良好,与食品中常见的毒素无交叉反应,对银耳、木耳和米粉等样品的添加回收率在80.2%~101.2%之间,相对标准偏差小于6.4%,且结果与LC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速和低成本等特点,可以满足食品中米酵菌酸现场大批量筛查的需求。     

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的：旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法：应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果：该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论：该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。     

基于金纳米颗粒信号放大ELISA检测食品中恩诺沙星

以金纳米颗粒（gold nanoparticles,AuNPs）为信号放大载体,利用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记的二抗为信号探针,建立一种基于AuNPs的信号放大酶联免疫检测方法（AuNPs signal amplification enzyme-linked immunosorbent assay,AuNPs-HRP-IgG ic-ELISA）,检测食品中恩诺沙星（enrofloxacin,ENR）。该方法对ENR的检测限（IC15）为5×10－4?ng/mL,半数抑制浓度（IC50）为0.24?ng/mL,检测范围为0.16～500?ng/mL,与建立的传统ELISA方法（IC50=8.76?ng/mL）相比,显著提高了检测灵敏度,并且该方法与环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星交叉反应率均小于0.1%,具有良好的特异性。该AuNPs-HRP-IgG?ic-ELISA方法的实用性得到了样品添加回收实验和商业化ELISA检测试剂盒的验证,其在牛奶样品中的加标回收率可达80.52%～102.66%,适用于实际牛奶样本中ENR的快速灵敏检测,也为建立其他食品危害物质的精准检测技术开发提供参考。     

粳稻谷中总砷和无机砷含量的测定及分布情况

本文采用ICP-MS法和LC-AFS法分别测定粳稻谷中的总砷和无机砷含量.结果表明:总砷在0?10 ng/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,检出限为0.020 7 ng/mL;As3+和As5+在0?50 ng/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,As3+检出限为0.24 ng/mL,As5+检出限为0.44 ng/mL...     

基于谷胱甘肽识别系统的胶体金比色法快速检测水中重金属铅离子

基于谷胱甘肽的胶体金比色法建立简单快速检测水中重金属铅离子的方法。利用谷胱甘肽能够抑制高浓度的盐溶液聚集,同时在加入Pb~(2+)的情况下,又能够使胶体金发生聚集,从而使胶体金的颜色发生变化。在优化条件下,比色法检测铅离子的线性范围为10.36~1 036 ng/mL,检出限为2.072 ng/mL,加标回收率为99.1%~103.6%,相对标准偏差小于4%。该方法检测灵敏度高,稳定性和重复性较好,可作为测定水中重金属铅离子含量的快速检测方法。     

基于适配体-阳离子化合物诱导纳米金聚集比色法快速检测苏丹红

本研究以苏丹红Ⅲ适配体为识别元件,以未修饰的纳米金传感信号,以聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)作为纳米金聚集的诱导剂,构建了一种简单、经济、快速的苏丹红比色检测方法。在优化条件下评估本方法的检测灵敏度、准确性和特异性,最后应用于食品中苏丹红快速检测,并将检测结果与国标法(GB/T 19681-2005)对比验证。结果显示,在PDDA浓度20 nmol/L、适配体浓度5 nmol/L、反应时间4 min等优化条件下,纳米金吸光度比值(A_650nm/A_530nm)与苏丹红Ⅲ浓度呈良好线性关系(R=0.986),线性检测范围为3.13～50 ng/mL,可视化检测限为3.13 ng/mL,检测时间约为5 min。特异性分析显示,本方法对苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ有高的特异性,与柠檬黄、日落黄、分散橙11等无交叉反应。将本方法应用于食品中苏丹红检测,加标回收率为85.4%～102.5%,相对标准偏差为3.37%～6.75%。本方法具有操作简便、快速、结果易读等优点,适用于批量样品中苏丹红的现场快速检测。     

铅胶体金免疫层析试纸条研制及其在小龙虾中的应用

目的 利用胶体金免疫层析技术对重金属铅检测试纸条进行研制,并探究其在小龙虾样品中的应用。方法 使用胶体金和重金属铅单克隆抗体制备免疫探针。优化反应体系,构建重金属铅免疫层析检测试纸条。验证该试纸条的检测限、特异性、准确性和稳定性,并对小龙虾样品进行检测。结果 所研制的重金属铅胶体金免疫层析试纸条的检测限为6 ng/mL,检测时间为15 min。该试纸条可特异性识别铅,而对其他常见重金属无交叉反应。结论 本实验研制的试纸条性能良好,能够准确判定小龙虾中重金属铅是否超标。     

Ultrasensitive and simultaneous detection of 6 nonsteroidal anti-inflammatory drugs by colloidal gold strip sensor

In this work, an oxicam group–selective monoclonal antibody against 6 nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAID; meloxicam, lornoxicam, piroxicam, sudoxicam, droxicam, and tenoxicam) was prepared. Also, a spacer arm with carboxyl group was derived at the hydroxyl of meloxicam to generate the meloxicam hapten. The half-maximal inhibitory concentrations (IC₅₀) were, respectively, 0.31 ng/mL for meloxicam, 0.49 ng/mL for lornoxicam, 2.90 ng/mL for piroxicam, 1.95 ng/mL for sudoxicam, 3.08 ng/mL for droxicam, and 5.36 ng/mL for tenoxicam. A colloidal gold immunochromatographic strip based on the monoclonal antibody was developed for the detection of these 6 NSAID in milk. The results could be obtained by the naked eye in 10 min, and the cut-off values and the visual limits of detection in real samples were 5, 5, 10, 10, 25, and 25 ng/mL, and 0.25, 1, 0.5, 0.5, 1, and 1 ng/mL, respectively. This immunochromatopgraphic strip is a suitable tool for on-site detection and screening of oxicam NSAID in milk samples.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定水中甲拌磷及其代谢物残留量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定水中甲拌磷及其代谢物残留量。方法样品经二氯甲烷提取净化后,采用液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。结果甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜在质量浓度2~100 ng/mL范围内线性关系良好(r≥0.9996),检出限为2 ng/L,定量限为5 ng/L。在5、10、50 ng/L加标水平下,加标回收率为73.2%~85.9%,相对标准偏差为1.5%-6.2%。结论本方法适用于检测水中甲拌磷及其代谢物残留量,为水产养殖水中甲拌磷及其代谢物污染源排查及生态环境评价提供可靠的检测技术手段。