不同蛋白酶酶解大豆蛋白的过程变化规律研究

选择6种蛋白酶(Alcalase、胰蛋白酶、Protex.7L、Protamex、Flavourzyme和木瓜蛋白酶),对酶解大豆蛋白制备大豆蛋白水解液的过程变化规律进行了研究.以水解度、可溶性蛋白得率、多肽得率、寡肽得率及游离氨基酸得率为指标对酶解过程进行分析.结果表明,Alcalase水解大豆蛋白的能力最强,生成的多肽、寡肽以及游离氨基酸的量最多;胰蛋白酶酶解产物的分子量偏大;Flavourzyme水解出的游离氨基酸含量占可溶性蛋白的比例较高.     

多酶复合水解法生产高水解度大豆寡肽的工艺优化

为提高大豆蛋白的水解度,生产低分子量大豆寡肽,采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解,并采用中心组合试验和Box-Behnken试验对复合酶的组成和酶解工艺进行了优化。研究结果表明:复合酶的最佳组成为碱性蛋白酶38.4%、风味蛋白酶27.2%、中性蛋白酶34.4%。最佳水解条件为pH 8.79、温度50.46℃、底物浓度10%g/ml,在此条件下酶解6 h,大豆分离蛋白的水解度可达28.7%,寡肽收率高达83.56%,所得大豆寡肽产品中肽含量高达81.3%,数均分子量低至850,各理化指标均符合国标GB/T22492-2008对一级大豆寡肽产品的质量要求。     

双酶水解罗非鱼碎肉制备肉味香精前体物研究

利用风味蛋白酶组合其他蛋白酶酶解罗非鱼碎肉,以蛋白水解液的水解度,游离氨基酸含量和肽分子量分布为指标综合评价水解效果.结果表明:木瓜蛋白酶+风味蛋白酶组合水解的水解液中游离氨基酸的总得率最高,其中鲜味氨基酸,含硫氨基酸均高于复合蛋白酶+风味蛋白酶组合和中性蛋白酶+风味蛋白酶组合的水解产物;分子量分布无明显的差异,罗非鱼水解液的肽片段的分子量明显小于畜禽肉类和植物蛋白的水解液,其分子量Mw＜ 1000u的肽段占97％以上,小肽的比例显著高于畜禽肉的水解液.     

鸡肉蛋白酶解工艺及水解产物成分研究

为了研究鸡肉蛋白的酶解工艺条件,采用复合酶解的方法,研究了酶种类及酶解工艺条件对水解度的影响。结果显示鸡肉蛋白的最佳水解条件:pH为7.0,料液比为1:2,酶解温度为58℃,复合蛋白酶(添加量0.33%)酶解2 h后,不灭酶,加入风味蛋白酶(添加量0.67%)再酶解2 h;并在此酶解条件下,研究测定了鸡肉蛋白酶解液中游离氨基酸成分和含量,以及酶解液中肽分子量分布的情况。酶解液中游离氨基酸种类齐全且含量丰富;酶解液的肽相对分子质量都集中在1000u以下,酶解过程中多肽不断减少,寡肽不断增加;酶解3.5 h后,相对分子质量小于1000 u的小分子肽和氨基酸含量可达99.85%。     

双酶分步水解大豆分离蛋白制备缩氨酸

以大豆分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶分步水解技术,结合膜分离技术与传统的纯化工艺制备大豆缩氨酸。通过单因素和正交试验得到最佳制备条件：碱性蛋白酶在pH值为9.0、酶用量为5%（W/V）、底物浓度为5%、温度为55℃条件下水解4h后灭酶,风味蛋白酶pH值为6.5、酶用量为5%（W/V）、温度为50℃,水解时间6h,水解度达到25.3%。在此条件下酶解液中Da〈1 000的多肽得率为49.12%。对其进行氨基酸分析,得出氨基酸总量和游离氨基酸的含量分别占寡肽溶液的3.21%和0.28%。     

酶解法提取柞蚕蛹油的工艺研究

本实验以新鲜柞蚕蛹为原料,采用生物酶水解法制备柞蚕蛹油.结果表明:采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶水解柞蚕蛹,得油率较高.最佳酶解条件为:底物蚕蛹蛋白的质量分数为2.5%,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶的加入量分别是底物蛋白浓度的1%;酶解温度为:50℃;pH值=9;酶解时间:8小时.在此条件下,蛹油得率为:5.6%.同时,经双酶水解的蚕蛹蛋白水解液,通过截留分子量为一万的超滤膜过滤,可得到蚕蛹生物活性肽.     

双酶水解罗非鱼碎肉制备肉味香精前体物研究

利用风味蛋白酶组合其他蛋白酶酶解罗非鱼碎肉,以蛋白水解液的水解度,游离氨基酸含量和肽分子量分布为指标综合评价水解效果。结果表明:木瓜蛋白酶+风味蛋白酶组合水解的水解液中游离氨基酸的总得率最高,其中鲜味氨基酸,含硫氨基酸均高于复合蛋白酶+风味蛋白酶组合和中性蛋白酶+风味蛋白酶组合的水解产物;分子量分布无明显的差异,罗非鱼水解液的肽片段的分子量明显小于畜禽肉类和植物蛋白的水解液,其分子量Mw<1000u的肽段占97%以上,小肽的比例显著高于畜禽肉的水解液。      

小麦面筋蛋白酶解制备合适分子量小肽的研究

为制备合适分子量分布的小肽(<1000u),以小麦面筋蛋白为原料,利用蛋白酶对小麦面筋蛋白进行酶解,通过分析酶解物中的蛋白质水解度与多肽含量之间的关系,酶解物中多肽分子量分布以及氨基酸含量来比较碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶对小麦面筋蛋白的酶解作用,同时结合动物实验来探究多肽分子量分布与酶解物的功能性关系。结果表明,不同的蛋白酶对小麦面筋蛋白的酶解效果存在差异,其中胃蛋白酶处理组中总多肽含量最高,其次是碱性蛋白酶处理组;当四种蛋白酶酶解物的蛋白质水解度保持在12%左右时,碱性蛋白酶处理组中小肽(<1000u)的得率超过80%,胰蛋白酶处理组中小肽的得率在65%左右,且这两组蛋白酶酶解物可以显著地促进实验动物的消化能力和免疫功能,同时四种蛋白酶的酶解物中氨基酸总量与没有酶解的对照组相比均有提高,但游离氨基酸含量差异不大,说明四种蛋白酶酶解小麦面筋蛋白的酶解程度适中,没有被过度水解。      

双酶分步酶解谷朊粉制备短肽的研究

本文通过比较酶种类、加酶量、底物浓度、酶解温度、酶解时间对短肽得率和水解度的影响,采用二次回归正交旋转组合设计优化分步酶解制备谷朊粉短肽的最佳工艺。在复合蛋白酶(Protamex)水解谷朊粉91.50 min后加入中性蛋白酶(Neutrase)继续酶解121.50 min,Protamex添加量为665.00 U/g底物,Neutrase添加量为5 290.00 U/g底物,水解温度50℃,质量浓度12%,在此条件下,短肽得率为69.88%,水解度25.74%。经高效液相色谱测定,分子质量小于1 000 Da的水解产物占100%。采用Protamex与Neutrase分步酶解谷朊粉制备谷朊粉短肽,与现有制备谷朊粉短肽方法相比,避免了后续脱盐步骤,简化工艺,且具有制备条件温和,TCA-NSI和DH高,纯度高,分子量集中分布于1 000 Da以下等特点。     

组合酶对复合骨素酶解液呈味物质的影响

为探究组合酶对牛骨素和鸡骨素的复合骨素酶解液呈味物质的影响,选取四种组合酶(木瓜蛋白酶+风味蛋白酶、菠萝蛋白酶+风味蛋白酶、碱性蛋白酶+风味蛋白酶、复合蛋白酶+风味蛋白酶)制备复合骨素酶解液,测定四种复合骨素酶解液的水解度、游离氨基酸、呈味核苷酸、味精当量(Equivalent umami concentration,EUC)、肽分子量分布等呈味物质指标,并进行对比分析。结果表明:碱性蛋白酶+风味蛋白酶(Alkaline proteinase+Flavourzyme,A+F)和复合蛋白酶+风味蛋白酶(Protamex+Flavourzyme,P+F)酶解液的水解度最大,分别为10.67%和11.27%;对呈味游离氨基酸组成分析发现,A+F酶解液鲜味氨基酸、苦味氨基酸、无味氨基酸含量最高,A+F和P+F酶解液总游离氨基酸含量最高;四种酶解液中肌苷酸较另两种核苷酸含量高,A+F酶解液总核苷酸含量最高;比较四种酶解液味精当量,A+F酶解液EUC值最大;A+F和P+F酶解液中分子量<1000 Da肽段含量最高,制备复合骨素酶解液的呈味效果更好;主成分分析表明A+F组合酶综合得分最高,A+F组合酶为美拉德反应提供丰富反应底物。     

酶解花生蛋白制备功能性多肽条件优化研究

为优化Alcalase 蛋白酶酶解花生蛋白制备功能性多肽的工艺条件,采用响应面分析法,以水解度、短肽得率为响应值,研究温度、pH 值、底物质量分数、酶底比对制备功能性多肽工艺的影响。综合考虑成本和工艺要求等问题,最终确定酶解花生蛋白制备功能性多肽的工艺条件为温度55℃、pH8.4、底物质量分数4.31%、酶底比3.39%、时间4h。该条件下水解度(DH)及三氯乙酸可溶性氮溶解指数(TCA-NSI)分别为23.40% 和74.88%,与理论值的相对误差在0.5% 以内,优化工艺稳定,DH 及TSA-NSI 较高,实验结果与模型预测值相符。     

蚕蛹蛋白的酶法水解工艺及其口服液的制备

为了制得蚕蛹免疫活性蛋白肽口服液,对蚕蛹蛋白酶解工艺进行了优化。本文选用菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶这五种酶对脱脂蚕蛹蛋白进行酶解,以水解度和小鼠脾细胞的增殖为检测指标,得出碱性蛋白酶对脱脂蚕蛹蛋白的酶解效果最好,并通过单因素和响应面实验确定蚕蛹蛋白肽酶解的最佳工艺条件为:酶解温度55℃,加酶量6%,酶解时间2 h,pH8,水和底物比20:1,此条件下水解度为19.96%±1.02%,免疫活性OD₄₉₀为0.2512±0.0125。并进行蚕蛹蛋白肽免疫活性口服液的研制,通过感官评定得到最佳工艺为:蔗糖量8%,柠檬酸量1%。     

蚕蛹多肽制备工艺及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白,以水解度和清除DPPH·能力为指标对酶解过程进行分析,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果,其水解产物有较高抗氧化活性,对DPPH·、超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)都具有较强的清除能力。     

蚕蛹蛋白肽酶水解条件优化

为了降低蚕蛹过敏风险,提高蚕蛹优质蛋白利用价值并制备免疫活性肽,对蚕蛹蛋白进行了酶解优化。本文选用菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶这5种酶对脱脂蚕蛹蛋白进行酶解。通过对小鼠脾细胞增殖和水解度的检测,选取最佳蛋白酶。在此基础上对最佳蛋白酶的四个单因素（酶和底物量,初始p H,水解温度和底物浓度）进行优化,从而确定最佳的酶解条件。结果表明,5种蛋白酶中碱性蛋白酶对脱脂蚕蛹蛋白的酶解效果最好。对碱性蛋白酶进一步优化,通过Box-Behnken实验和回归分析获得碱性蛋白酶酶解脱脂蚕蛹蛋白的最佳条件为加酶量=6.0%,温度=55℃,酶解时间=2.00 h,p H=8.0,水∶底物=20∶1,测得的水解度为19.96%±1.02%,免疫活性OD490 nm为0.2512±0.0125。      

复合酶制备鱼蒸煮液水解肽及其抗氧化活性研究

目的:研究鳀鱼蒸煮液的最佳酶解工艺条件,并分析所制备水解肽的分子量分布和抗氧化特性。方法:以三氯乙酸氮溶解指数(Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)为酶解效率的评价指标,在单因素实验基础上,运用中心组合设计法优化水解肽的制备工艺,并对酶解产物的分子量分布及抗氧化活性进行分析。结果:鳀鱼蒸煮液的最佳酶解条件为酶解时间45 min、酶解温度54.5 ℃、酶解pH8.2、碱性蛋白酶与中性蛋白酶比例1:1,在此条件下TCA-NSI可达76.51%。所制备的水解肽中分子量低于1500 Da的多肽含量可达81.941%。水解肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC₅₀分别为2.45、1.37和3.45 mg/mL,表明其具有较强的抗氧化活性。结论:采用复合酶法可高效酶解鳀鱼蒸煮液,并获得具有较强抗氧化活性的水解肽,可为鳀鱼蒸煮液高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

高谷氨酰胺低聚小麦肽制备用酶的筛选

本文研究了胰酶(Pancreatin)、碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutrase)、胃蛋白酶(Pepsin)、酸性蛋白酶(Acidic protease)、复合蛋白酶(Protamex)和风味蛋白酶(Flavourzyme)等8种蛋白酶对小麦蛋白的水解作用。以获得高谷氨酰胺低聚小麦肽为目标,通过分析水解过程中谷氨酰胺肽释放规律变化,筛选出Alcalase和Protamex为最佳水解酶。与其余蛋白酶制剂相比,Alcalase和Protamex可实现对小麦蛋白的有效降解、并最大限度减少蛋白酶对酰胺基团的破坏作用,产物有效谷氨酰胺含量可达20%以上,其中分子量低于3000 Da的水解产物高达95%,尤其是Alcalase酶解产物中分子量小于1000 Da的水解产物含量达到75%。与以往研究相比,本试验以分子量分布替代DH作为蛋白酶筛选的重要依据,从而更加准确反映蛋白酶解特性和难易程度,避免了游离氨基酸的干扰。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

绍兴腐乳发酵过程中蛋白质水解及其对成品白点影响的研究

研究了绍兴腐乳发酵过程中蛋白质水解与酪氨酸含量变化的规律,分析了不同发酵时间腐乳样品的氨基酸态氮、三氯乙酸-氮溶指数（TCA-NSI）、游离氨基酸、蛋白质水解度（DH）、酪氨酸含量及蛋白质分子量变化。结果表明:绍兴腐乳发酵过程中坯料中酪氨酸随着氨基酸态氮、TCA-NSI、游离氨基酸、DH的增加而增加;1⁴0d内主要是7S和11S蛋白质的分解,40d以后主要是小分子蛋白质的进一步分解。相关性分析表明,游离酪氨酸的含量与DH的Pearson相关系数最高。同时对成熟腐乳的研究发现有白点腐乳的TCA-NSI、DH和游离酪氨酸显著高于无白点腐乳,这表明了腐乳中白点的形成是由蛋白质过度水解造成的。本研究为绍兴腐乳白点的控制提供了参考。      

世界大洋性鱿钓渔业研究评述

为实现鱿鱼加工下脚料鱿鱼皮的高值化利用,本研究采用酶法制备鱿鱼皮蛋白肽。以多肽浓度和三氯乙酸可溶性氮指数（Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI）为评价指标,采用单因素和响应面试验优化酶解工艺参数,并对所制备蛋白肽的氨基酸组成、分子量分布、蛋白肽序列、抗氧化活性及其体外模拟消化特性进行表征。结果表明,最佳酶解工艺条件为酶解温度43.50 ℃、酶解时间100 min、酶解pH7.50、胰蛋白酶与碱性蛋白酶比例2:1、加酶量4000 U/g,在此条件下其TCA-NSI可达89.02%±0.66%。所制备的鱿鱼皮蛋白肽其氨基酸组成均衡,必需氨基酸指数（Essential amino acid index,EAAI）可达0.90。此外,鱿鱼皮蛋白肽含有43个多肽序列,其中38个肽段的分子质量低于1800 Da,其DPPH自由基、ABTS⁺自由基和羟自由基清除率的IC₅₀分别为0.61、0.28和1.95 mg/mL,且经体外模拟胃肠消化后仍能维持较好的抗氧化活性。本研究结果为鱿鱼加工下脚料的开发利用和精深加工提供了理论依据。

     

不同酶解条件下酪蛋白酶解产物特性的阶段性研究

以底物浓度（[E]）、酶用量（[E]/[S]）、水解温度（T）、水解时间（t)和pH值5个因素作为因变量，采用五元二次正交旋转组合设计确定酪蛋白的水解条件，分析了不同酶解条件对酪蛋白水解度、蛋白回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量的影响。结果表明，在不同酶解条件下获得的酶解产物的水解度、蛋白质回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量差异较大，且酶解产物的水解度与蛋白质回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量间均呈显著相关关系。