重组人白细胞介素-6包含体溶解工艺研究

本文系统研究了影响大肠杆菌表达的重组人白细胞介素 6 (rhIL 6 )包含体溶解的因素 ,确定了rhIL 6包含体溶解的最佳工艺条件 ,即在 pH为 8 4的 5 0mmol/LTris HCL缓冲体系中 ,变性剂尿素和还原剂 β 基乙醇 (β ME)的浓度分别为 8mol/L和 5 0mol/L ,包含体含量为 1 0mg/mL ,在 4℃下溶解 1h。包含体溶解后蛋白含量可达到 1 3mg/mL左右 ,目标蛋白的溶解率达到 98% ,纯度为 5 0 %左右     

重组人白细胞介素-4融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达的影响因素

目的　提高人重组白细胞介素 4 (rhIL 4 )在大肠杆菌中的表达量。方法　研究rhIL 4的体外诱导条件 ,包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度、菌体密度对表达量的影响。结果　最佳表达条件是诱导时间为 4h ,诱导温度为 4 2℃ ,A6 0 0 为 0 7～ 1 0 ,而IPTG的浓度对表达量无显著影响。结论　诱导时间、诱导温度和菌体密度的优化能提高外源基因在大肠杆菌中的表达产量。     

高压匀浆破碎释放重组大肠杆菌提取包含体过程的研究

用高压匀浆机对重组大肠杆菌细胞进行破碎以释放重组人白细胞介素－6(rhIL-6)包含体,系统研究了高压匀浆过程中物理和化学因素的影响,包括匀浆次数,操作压力,料液的pH及悬浮体系的影响。从而选择操作压力为800MPa。悬浮体系为去离子水,经3次破碎,表达量为20％的 菌体可获得粗包含体的纯度约40%。此外,本文还对该高压匀浆破碎过程进行了动力学分析。     

重组人成骨蛋白-1复性条件的优化

目的优化重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性条件。方法将表达rhOP-1的大肠杆菌菌体在冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8mol/L尿素溶解,纯化后进行梯度透析复性。利用TotalLab软件分析目的蛋白二聚体的含量,用体内法和体外法测定其生物学活性。结果经纯化后,目的蛋白纯度达97%以上。最佳复性条件为4℃,pH9.0,蛋白浓度为0.4～0.8mg/ml,尿素浓度为2mol/L,L-Arg浓度为0.4mol/L;目的蛋白复性率达75%以上,复性后蛋白具有较高的生物学活性。结论已确定了rhOP-1包涵体梯度透析复性的最佳条件。     

人白细胞介素-6成熟肽基因重组及其在大肠杆菌中的表达

将PCR扩增的人白细胞介素-6（hIL-6）成熟肽基因与PJLA502表达载体重组，在大肠杆菌中高效表达出rhIL－6。经SDS－PAGE分析，rhIL－6表达量占菌体可溶性蛋白的40％以上。经免疫印迹证实，rhIL－6具有良好的抗原特异性。复性后，用MTT法测定IL－6依赖株7TD1细胞增殖活性，rhIL－6比活性达2．5×10~6u／mg蛋白。     

气相色谱—质谱选择离子法测定化妆品中防晒剂

应用气相色谱 -质谱选择离子法同时测定化妆品中 6种防晒剂 (水杨酸苯酯、水杨酸高 艹孟 酯、对羟基苯甲酮、对 -甲氧基肉桂酸 - 2 -乙基己酯、二苯甲酮、3- (4’ -甲基亚苄基 ) -樟脑 )。用甲醇为提取剂来进行超声快速提取 ,方法简单、快速、准确 ,6种防晒剂的平均回收率 (n =5 )在 94 .3- 10 6 .6 %之间 ,相对标准偏差 (n =5 )在 0 .36 - 1.72 %之间 ,最低检测限在 0 .0 1～ 0 .1ng之间     

应用反向亲和层析纯化基因工程产品

本文以ｒＩＬ6的纯化为例进行实验。用超声破碎的方法提取出菌体蛋白粗提物和非相关包涵体杂质蛋白(ｒＩＬ2包涵体),进而用常规免疫法制备兔抗菌体蛋白和包涵体杂质蛋白抗血清。从抗血清中用亲和层析法分离出抗菌体蛋白和包涵体杂质蛋白的特异ＩｇＧ,然后偶联ＣＮＢｒ激活的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ4Ｂ,制成抗菌体蛋白ＩｇＧ和抗包涵体杂质蛋白ＩｇＧ的亲和层析柱,即反向亲和柱Ⅰ和反向亲和柱Ⅱ。将反向柱Ⅰ和反相柱Ⅱ分别用01ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓＨＣ1(ｐＨ80)平衡,用8ｍｏｌ/Ｌ尿素溶液溶解包涵体,稀释复性后经过反向柱Ⅰ纯化,ｒＩＬ6含量达到79%…     

离子液体/缓冲液两相体系中热带假丝酵母不对称还原制备(S)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙醇

研究了1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[BMIM]PF6/缓冲液两相体系中,热带假丝酵母104细胞催化3,5-双三氟甲基苯乙酮不对称还原制备(S)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙醇的反应过程。通过考察影响生物还原反应的主要因素,如离子液体浓度、辅助底物种类和浓度、底物浓度、菌体浓度和转化时间等,发现上述因素对产率影响较大,但基本不影响产物手性醇的光学纯度。优化得到的较佳还原反应条件为:[BMIM]PF6体积分数5%,辅助底物为60 g L 1异丙醇,底物3,5-双三氟甲基苯乙酮浓度70 mmol L 1,菌体浓度350 g L 1,转化时间24 h。在优化条件下,产率达82.5%,产物(S)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙醇的对映体过量值大于99.9%。与水相转化相比,采用[BMIM]PF6/缓冲液两相体系进行3,5-双三氟甲基苯乙酮的生物不对称还原可有效提高底物浓度和产率,且反应时间缩短了6 h。     

响应面法优化管萼山豆根总生物碱提取工艺

采用微波控温辅助超声波的方法提取管萼山豆根茎中总生物碱,通过单因素法和响应面法优化了提取工艺,考察了管萼山豆根茎中总生物碱对1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、2, 2-联氮-二-3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸自由基(ABTS·)和超氧阴离子自由基(O2?·)的清除作用。结果表明,模型优化并修正的最佳工艺条件为:提取时间37.8 min,微波加热温度64.5℃,超声功率575 W,乙醇体积分数95%,在该条件下总生物碱得率为0.5418%,高于不采用微波超声辅助的0.2436%、超声辅助的0.4538%、乙醇回流的0.3884%。管萼山豆根茎中总生物碱在DPPH·、ABTS·、邻苯三酚浓度分别为0.1、7.0、8.0 mmol/L条件下,其半数抑制质量浓度(IC50)分别为0.891、0.552和0.390 g/L。     

高效液相色谱法测定食品中的天麻素

建立了测定食品中天麻素的方法。用水对样品进行超声提取 ,以 ZORBAX SB- C18(5 μm,4 .6× 2 5 0 mm)为分析柱 ,甲醇 - 0 .2 %磷酸溶液为流动相 ,流量 1.0 m L· min- 1 ,检测波长 2 2 1nm。天麻素最低检出限为 0 .6 ng,天麻素进样量在 0 .0 15～ 0 .6 μg范围内呈良好的线性 ,线性关系 r=0 .99993,平均回收率 98.6 % ,RSD=0 .87% (n=6 )。方法简便、快速、稳定、灵敏 ,可作为食品中天麻素的质量控制     

超声波对新疆紫草悬浮培养细胞生长和紫草素合成的影响

探讨了超声波功率、超声波处理时间对新疆紫草细胞生长和紫草素合成的影响. 研究结果表明,超声波对悬浮培养的新疆紫草细胞生长有促进作用,低功率长时间或高功率短时间的超声处理对细胞生长比较有利. 在优化条件下(200 W超声处理1 min),培养结束时的生物量比对照提高61%. 超声波也可以提高新疆紫草悬浮培养细胞的紫草素含量和产量,接种后即进行超声波处理,超声波功率密度为39.9 mW/cm3、超声时间为3 min时,细胞紫草素含量和产量最高,达到2.72%和294 mg/L,分别比对照组提高了64%和135%. 超声波是通过提高细胞苯丙氨酸解氨酶的活力来强化紫草素的生物合成途径.     

超声微波法制备维生素M-β-环糊精包合物

研究了超声微波法制备维生素M-β-环糊精包合物的最佳工艺条件,以维生素M-β-环糊精包合率为指标,通过单因素（超声功率、超声时间、配料比等）实验和正交实验优化包合工艺参数,紫外分光光度计测定吸光度,根据维生素M包合前后的吸光度来计算包合率。单因素实验结果表明：在25℃,维生素M的量为0．02g时,进行超声波辅助-β-环糊精包合维生素M,超声最佳时间为30min,最佳超声功率为200w,β-环糊精饱和溶液体积最佳为15mL。正交实验结果表明：在25℃,维生素M与β-环糊精包合物的包合率在超声时间为40min、超声功率为200w、β-环糊精饱和溶液为10mL时达到最大值2．36％。超声功率对包和率的影响最大,其次是β-环糊精饱和溶液的体积,影响最小的是超声时间。     

重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化

目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。     

超声强化多通道陶瓷膜微滤超细TiO2悬浮液

针对超声强化膜分离过程能耗高的问题,提出并设计了一种新型超声强化膜分离操作方式,并进行了超声强化陶瓷膜微滤超细TiO₂颗粒悬浮液的研究。考察了超声场参数、操作时间及溶液环境对多通道陶瓷膜微滤过程的影响规律,并分析了此操作方式强化陶瓷膜微滤颗粒悬浮体系的机理。结果表明,该操作方式能够获得较高膜通量恢复率及平均膜通量,同时超声能量消耗减小了90.0%以上;降低超声频率及提高功率,有利于膜通量恢复,在超声参数45 kHz和0.33 W·cm^-2条件下,膜通量恢复到初始值的94.0%;控制超声辐射时间0.167 min,微滤时间8 min时,平均膜通量提高了61.5%;降低悬浮液颗粒浓度及提高料液温度都有利于超声场强化陶瓷膜微滤过程。     

C型口蹄疫病毒VP1基因的串联与原核表达

目的构建C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,并鉴定其表达产物的免疫反应性。方法首先合成C型口蹄疫病毒C-S8C1株VP1基因的3个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点酶切后连接,构建出C型VP1双拷贝基因片段(VP1C)。将VP1C基因连接到原核表达载体pET-CKS上,构建重组质粒pETCKS-VP1C,转入BL21菌中进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物,并利用包涵体洗涤法对表达产物进行初步纯化。结果VP1C基因在大肠杆菌中获得表达,产量占沉淀蛋白的45%,且表达产物可以被C型口蹄疫病毒标准血清所识别。VP1C重组蛋白纯度达84.1%。结论已成功构建了C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,所表达的VP1C有良好的免疫反应性,可以作为检测C型口蹄疫病毒的候选基因。     

超声波功率对电渣钢锭中氧化铝夹杂物分布的影响

采用自行设计的带超声波振动的电渣炉,研究了超声波功率对轴承钢中氧化铝夹杂物分布及去除的影响. 结果表明,电渣重熔过程中超声波功率从0增至400和700 W,钢锭中的夹杂物最大尺寸分别是40, 36和14 mm,功率增至1000 W时,夹杂物最大尺寸增至36 mm. 电渣重熔过程中无超声波时,钢锭中夹杂物在试样边部与中心部位聚集,边部聚集尤为严重. 超声波功率增加,夹杂物聚集逐渐减弱直至均匀分布. 超声波去除夹杂物主要是其空化和声流效应改善了渣-金间反应的动力学条件,使夹杂物均匀分布于钢锭中. 但超声波功率过高会降低渣-金间的反应速率,引起金属熔池扰动,降低电渣精炼能力.     

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。     

重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。