酿酒糖化发酵剂的筛选试验

从普通酿酒曲药中通过菌种性能测试筛选出优良菌种Z1、L1，糖化发酵剂Z1L1。结果表明：菌种Zl糖化力比原种(酒药)提高36.8％；L1发酵力比原种提高12．6％；而Z1L1出酒率则比原种提高47.9％；在酒质方面也比原种有许多提高，品评分比为85：70。     

酿造糯米酒优良根霉与酵母菌株的筛选

为开展纯菌种液态曲糯米酒酿造工艺研究,对九种传统糯米酒曲进行优良菌种筛选试验.经液化力、糖化力测试选取3种酒曲,从中分离纯化出9株根霉,对其进行糖化试验,筛选出一株30℃糖化70h产总糖(354.0g/L)、葡萄糖(153g/L)最高的根霉E-2.经产酒精能力测试选取4种酒曲,从中分离纯化出10株酵母,对其进行发酵力试验,筛选出一株30℃发酵80h产酒精量最大,发酵效率(92.9％)最高的酵母Y-1Y.     

糖化增香曲的研制及其在酱油生产中的应用

糖化增香曲是国内首创的专业用于酿造酱油及酱制品的复合曲种，它是针对传统发酵酱制品单一菌种制曲，酶活力不全等问题，利用现代生物工程技术、筛选、遗传诱变、纯化提高选育出的复合菌种，具有较强的糖化力、酯化力和增色能力，可明显改善产品口感、色泽、香味，并显著提高酱油、酱制品的全氮和氨基氮含量。该文论述了糖化增香曲的研发过程及原理，并就低盐固态发酵法酱油生产工艺中使用糖化增香曲及复合制曲技术来提高产品质量及出品率进行了应用实验。结果表明：产品的氨基氮含量提高0．17g／100mL，还原糖含量提高1．11g/100mL，红色指数增加1．02，黄色指数增加1．59，口感得到明显改善。     

试用UV-11的体会

我厂对UV-11的试用是省轻工局去年九月召开的安顺会议以后。在试用过程中，有成功也有失败，大房生产曲糖化力有高达4,500的，也有低到只有500以下的。出酒率以52度计算有81.1％的，也有只出39.7％的。所以，试用时间虽然不长，但苦头甜头我们都尝过。通过一段时间的实践，对于3.4309新菌种的生产基本可以掌握，现在大房生产逐步走向稳定。大房生产曲糖化力一般可稳定在3500～4500之间。比原来白曲糖化力提高5～6倍。用曲量由原来的12％降到4.4％（这个4.4％是指含水份35～40％的新鲜曲，如按绝干曲不到3％）并且糖     

红曲霉在白酒生产中应用研究现状

红曲霉具有一定的发酵力及较强的酯化力。添加红曲霉制成糖化发酵剂，或加入红曲霉和酵母制成强化大曲，应用于麸曲、大曲及液态法白酒生产，可提高出酒率2％左右，己酸乙酯含量由原3．005g／L提高到5．378g／L。     

黑曲霉UV-11的性能介绍

黑曲霉AS3·4309〈简称UV-11〉，是中国科学院微生物研究所利用由土壤中分离的黑曲霉AS·202菌株，通过同位素钻（Co~(60)）、紫外线、亚硝基胍等物理、化学手段，进行反复诱变处理而获得的一株优良菌株。该菌糖化酶系纯，糖化力可达4000单位〈毫克葡萄糖/克曲·小时〉以上。据省外许多资料介绍，该菌用作酒精和白酒行业中生产淀粉原料的糖化剂，比目前使用的其他菌种糖化力可提高4—5倍，用曲量可降低50％，出酒率提高1％。实践证明，广泛推广使用3.4309霉菌，对于我国酿酒行业深入开展增产节约运动有着积极的作用。     

红曲霉在浓香型酒生产中的应用

研究发现，红曲霉能代谢出促进己酸与乙酸合成己酸乙酯的酯化酶。引入红曲霉菌种，制成帘曲应用于浓香型酒生产中。（1）直接混入大 发酵；（2）应用于双轮底发酵；（3）制成酯化液。红曲霉帘曲糖化力为2666u/g，用量不可过大。应用红曲霉帘曲，可提高出酒率1％－2％，提高优质品率10％。（丹妮）     

浓香型曲药功能菌的选育及利用研究

从优质曲药中系统和诱变选育出４株各具特色的优良功能菌株，即糖化功能菌种ＬＺ—２４和Ａ２—３，发酵功能菌种Ｓ２．１０，生香功能菌种Ｒ—３。其利用方式有二：一是配制成复合菌种，强化在制曲过程中。试验结果：曲药酶活力和微生物数量显著增加，曲药酯化酶活力增加５５．４９％，出酒率提高１０．９％，己酸乙酯增加１５．７％，口感质量明显提高。二是直接用于曲药质量的调控。针对不同季节，不同批次曲药质量的缺陷，有目的地在曲药粉碎时，均匀地加入相应的功能菌种，以此来调控曲药的质量和功能。６０天发酵期酿造试验结果：出酒率提高６．９个百分点，己酸乙酯提高４９．２％；翻沙酿造试验结果：总酸、总酯及己酸乙酯分别提高１７．４％、１６．０％和２１．７％。     

粟米乳酸发酵饮料乳酸菌种的筛选

本文以糖化的粟米为基质,对6株乳酸菌的发酵性能进行了测度,其中以嗜酸乳杆菌产酸最高,产酸速度最快,确定了嗜酸乳杆菌（La),乳明串珠菌（L1)和两歧双歧杆菌（Bb)为最佳菌种组合,并通过scheffe三因子单形重心设计法,确定了最佳种间比,即La:Ll:Bb=3:3:2.     

植酸对黄曲霉菌(Aspergillus flavus)糖化力的影响

该文通过添加不同浓度的植酸于黄曲霉菌(Aspergillus flavus)培养基中，用不同添加方式，于不同生长时刻测定黄曲霉菌糖化力，研究植酸对黄曲霉菌糖化力的影响。结果表明加入植酸后黄曲霉菌糖化力均有很大提高，可为工业生产带来可观的经济效益。植酸最佳作用浓度范围是0．20％～0．25％，发酵24h糖化力最大可提高44．32％。     

克雷伯氏菌产1,3-丙二醇aldH基因缺失菌株的构建

该研究利用λRed重组技术对克雷伯氏菌（Klebsiella pneumonia）中的乙醛脱氢酶（aldH）基因进行敲除,成功构建缺失菌株K.pneumonia2-1ΔaldH,与原始菌株相比,缺失菌株K.pneumonia2-1ΔaldH发酵液中乙醇产量由原来的7.24 g/L降为0.47 g/L,降低了93.51%;1,3-丙二醇产量由原来的78.83 g/L增长至82.55 g/L,提高了4.72.%;甘油转化率由60.64%增长至63.50%,提高了2.86%。缺失菌株K.pneumonia2-1ΔaldH 50 L发酵罐小试试验中,1,3-丙二醇的产量为78.13 g/L,乙醇产量为0.50 g/L。     

白云边酒优势酵母菌的分离鉴定及其发酵特征分析

从白云边大曲酒发酵堆积料和出池酒醅中共分离获得7株占优势的酵母菌,依次编号为Z1、Z2、Z3、Z4、BYB-2、BYB-3和FJ5。应用26S rDNA D1/D2区域序列分析,结果显示,Z1、Z2、Z3和FJ5属于东方伊萨酵母;Z4、BYB-2和BYB-3分别为热带假丝酵母、酿酒酵母和毕赤酵母。表明白云边大曲酒酿造过程中存在酵母菌的多样性,而优势酵母菌为东方伊萨酵母。对7株酵母菌进行耐高温、耐酒精能力以及酒精发酵产物的测定和分析,结果表明,东方伊萨酵母除具有一定的产酒精能力外,还具有耐热性好、耐酒精能力强和乙酸乙酯产生量高的特点。采用高粱为原料进行液态酒精发酵结果表明,Z1和FJ5菌株乙酸乙酯平均产量达到204.19mg/L。     

产乳酸乙酯酿酒酵母菌株的构建

乳酸乙酯是白酒中重要的呈香物质,并影响着白酒质量和风格。 为提高产乳酸乙酯的能力,以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）为出发菌株,利用同源重组技术,获得高产L-乳酸的重组菌株。 并分别模拟液态白酒发酵和外源添加乳酸进行发酵,研究 产乳酸乙酯菌株P与出发菌AY12-α株外源添加乳酸发酵产乳酸乙酯的差异。 结果表明,用植物乳杆菌的乳酸脱氢酶基因ldhL1替换 酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因PDC1,得到重组菌株P。 模拟液态白酒发酵过程中,重组菌株P的乳酸和乳酸乙酯产量分别达12.64 g/L和 162.75 mg/L;出发菌株AY12-α中外源添加相同浓度乳酸进行发酵,乳酸乙酯的产量为115.47 mg/L,仅为重组菌株P的71%。 产乳酸乙 酯酵母菌株的构建,初步为豉香型等特定香型白酒的清洁化和机械化酿造奠定了基础。     

清香型大曲中产香细菌的分离筛选及鉴定

为提升麸曲清香型白酒风味品质，该研究采用稀释平板涂布培养法从清香型白酒大曲中分离纯化细菌，采用感官嗅闻法从中筛选出具有产香气功能的细菌菌株，将其应用于麸曲白酒酿造，并通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定。结果表明，分离筛选得到2株具有香气功能的细菌，编号分别为HXX7和HXX12，其发酵液中挥发性香气成分丰富，均含有酯类、醛酮类、酚类、杂环类化合物等，具有较强产香能力。将菌株HXX7和HXX12分别应用于麸曲清香型白酒生产，其中，菌株HXX7发酵酒样中丁酸乙酯（41.91 mg/L）、4-乙基愈创木酚（148.70 mg/L）、3-羟基-2-丁酮（312.68 mg/L）、苯乙醛（79.27 mg/L）、β-苯乙醇（128.38 mg/L）含量升高。结果表明，菌株HXX7可增加原酒香气，改善原酒风味，从而提升白酒品质。菌株HXX7被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。     

低甲醇甘蔗酒的酿造工艺研究

为了降低甘蔗酒中甲醇含量,本文采用紫外诱变和化学诱变选育得到低产甲醇的酿酒酵母,结合优化酿酒工艺:接种量2.0×107cfu/mL、23℃发酵6d,得到甘蔗酒的相对甲醇含量172.9 mg/L,比初始酵母酿造酒的284 mg/L,降低了39％.     

雄烯二酮耐底物突变株的筛选及生物转化培养基优化

采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变的方法对能选择性降解植物甾醇侧链的新金分支杆菌MN2进行诱变处理,利用梯度平板技术筛选高底物耐受性突变株,通过摇瓶发酵实验检测其转化性能,以期筛选出具有较高底物耐受性且转化生成雄烯二酮（androst-4-ene-3,17-dione,AD）能力提高的突变株。最终筛选到1 株能在含高浓度底物平板上生长的AD突变株MN4。在底物甾醇投料量为20 g/L,摇瓶发酵144 h时AD生成率为40.9%,较出发菌株提高了15.1%。经斜面接种连续传代5 次,MN4突变株遗传性状稳定。对突变株MN4的发酵培养基进行优化,通过正交试验确定的最佳培养基配比为：葡萄糖1 g/L,玉米浆25 g/L,磷酸二氢钠0.6 g/L,硝酸钠6.2 g/L,豆油160 g/L。根据该配方进行转化,得到AD的生成率为50.6%。     

米酒生香酵母的分离筛选鉴定及其性能研究

为获得米酒酿造中优良的生香酵母,通过嗅闻法初筛得到6株香气突出的菌株,通过测定菌株发酵米酒过程中乙酸乙酯、β-苯乙醇、乳酸乙酯和乙醇的积累量,复筛获得菌株11Z1,其积累量分别为(2.883±0.260)、(0.301±0.028)、(0.080±0.008)和(37.296±1.036)g/L。经形态学及分子生物学方法鉴定菌株11Z1为Cyberlindnera fabianii;对其发酵液进行风味物质分析,检测出主要风味物质共21种,包括醇类5种、酯类3种、酸类5种、酚类1种、酮类1种、烷烃类2种和其他类4种,这些风味物质对增加酒的香气及形成酒体风格具有积极作用。此外,分别在培养基中添加风味前体物乙酸、L-苯丙氨酸和L-乳酸,进一步探究其对菌株11Z1酿造米酒风味物质形成的影响,结果表明,添加体积分数0.3%乙酸发酵9 d、8 g/L L-苯丙氨酸发酵4 d、体积分数0.4%L-乳酸发酵8 d,乙酸乙酯、β-苯乙醇及乳酸乙酯积累量分别达到最大,与未添加前体物相比分别提高了160.71%、215.48%和144.04%。综上,菌株11Z1具有突出的生香能力,展现出在米酒酿造中巨大的应用潜力。     

清香型大曲中产β-苯乙醇酵母的分离、鉴定及在白酒酿造中的应用

该研究采用传统培养分离法从清香型大曲中分离、筛选产β-苯乙醇酵母,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并通过微量肉汤稀释法对其基因安全性进行评价,将其应用于白酒酿造。结果表明,分离、筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌株,编号为FJQC-XJ-4,经鉴定为库德里阿兹威（氏）毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）,该菌株具有较好的安全性。利用该菌株酿造白酒,使白酒中的β-苯乙醇（15.11 mg/L）、苯乙酸乙酯（5.35 mg/L）、乙酸异戊酯（23.76 mg/L）、乙酸乙酯（4.99 mg/L）和异丁醇含量（1.22 mg/L）分别提高12.83%、47.79%、3.66%、8.22%、29.06%,促进了白酒香气成分的生成;并使白酒粮香、窖香、糟香、酯香协调,口感醇甜、舒顺,改善了原酒的品质。     

高产乙酸乙酯酵母菌筛选及固态发酵应用研究

为提高清香型麸曲白酒中乙酸乙酯的含量,从已有菌株中筛选一株高产乙酸乙酯的酵母菌,将其应用于白酒固态发酵实验,并对其发酵条件进行研究。结果表明,筛选得到一株高产乙酸乙酯的酵母菌J-4,乙酸乙酯产量为1.38 g/L,经初步发酵实验表明,其最适固态发酵工艺条件为高粱粉与酒糟质量比1.0∶4.5,发酵时间7 d,酒醅入发酵容器后,以正常压力进行压醅（醅料密度为331.43 kg/m3）,所得原酒中乙酸乙酯含量为1.31 g/L,出酒率为46.3%,均达到较高水平。进一步将酵母菌J-4应用于麸曲白酒酿造生产中,以不添加产酯酵母发酵为对照,采用相同生产工艺酿造白酒。结果表明,添加酵母菌J-4发酵生产原酒酒样中乙酸乙酯含量达1.07 g/L,比对照组增长50.7%,出酒率为45.3%,比对照组降低0.87%,原酒口感品质有明显改善。     

苯基乳酸耐受性大肠杆菌的筛选及其高产苯基乳酸特性

苯基乳酸(phenyllactic acid,PLA)耐受性菌株的筛选能够有效降低PLA对生产菌株的抑制作用,有利于PLA产量的提高。通过紫外诱变的方法筛选耐受PLA的菌株,并应用于PLA的合成。以Escherichia coli BL21(DE3)作为原始出发菌株,通过紫外诱变的方法诱变筛选获得一株耐受PLA突变菌株E.coli Z2016(CCTCC保藏编号M2016332)。以E.coli Z2016为宿主菌,分别构建了重组菌株E.coli Z2016 pET-28a-ldh~(Y52V)和E.coli Z2016 pET-28a-ldhL用于D-和L-苯基乳酸的合成。结果表明:E.coli Z2016在含有1 g/L D-PLA的培养基中能够正常生长;重组突变菌株E.coli Z2016 pET-28a-ldh~(Y52V)和E.coli Z2016 pET-28a-ldhL全细胞合成D-PLA和L-PLA产量分别为6.75、6.97 g/(L·h),较重组出发菌株分别提高了14.02%和8.95%;分批补加底物反应120 min,E.coli Z2016 pET-28aldh~(Y52V)得到的D-PLA为20.02 g/L,较对照组提高22.17%,转化率为90.07%;E.coli Z2016 pET-28a-ldhL得到的L-PLA产量为20.87 g/L,较对照组提高16.85%,最终转化率为91.24%。筛选耐受性菌株是提高PLA产量的有效途径。