应用蛭弧菌清除牡蛎中潜在致病弧菌的研究

本实验以从深圳湾海底沉积物中分离得到的两株蛭弧菌菌株506、菌株512,对31株常见的牡蛎致病弧菌进行了裂解能力实验,探索了它们的裂解谱。结果表明,蛭弧菌506可裂解31株试验宿主菌中的29株,512则可以裂解其中24株,而两株蛭弧菌的协同裂解能力高达100%。该结果展示了蛭弧菌在消除牡蛎致病菌及牡蛎活体内残留食源性致病菌的可行性。此外,我们测定了盐度对这两株蛭弧菌生长情况的影响,结果表明在10-45‰的盐度范围内,蛭弧菌均能生长,最适盐度为30‰;同时我们还研究了其对牡蛎养殖水体和肠道中副溶血弧菌的清除作用,数据表明蛭弧菌可以有效地清除牡蛎养殖环境和体内的副溶血弧菌,试验第7d,实验组水体中和牡蛎肠道副溶血弧菌浓度对数值比对照组分别低5.59和3.39,显示了其在清除牡蛎中弧菌的能力。     

蛭弧菌的分离鉴定及其对非O1霍乱弧菌的消除作用研究

从海洋环境中分离到2株蛭弧菌（A-1和A-2）,研究了其对6株不同来源非O1霍乱弧菌的消除作用,以探索其对由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病的预防效果。实验结果表明,在20～35℃温度条件下,蛭弧菌均有较好的裂解效果,30℃时裂解能力最强;在pH6.5～8.1条件下,蛭弧菌均有较好的裂解能力,pH为7.2时,达到最佳裂解效果;A-1能裂解其中5株非O1霍乱弧菌,A-2能裂解其中4株非O1霍乱弧菌,而2株蛭弧菌协同作用,能全部裂解6株非O1霍乱弧菌。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在预防由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病方面具有潜在应用价值。      

蛭弧菌消除海产品中潜在致病性弧菌的研究

噬菌蛭弧菌具有裂解病原菌的特殊功效,可以用作生物净化因子。本实验从海洋环境中分离到4株Bh04系列蛭弧菌(Bh04-4,Bh04-41a,Bh04-A+和Bh04-1f)。以41株弧菌为蛭弧菌的宿主菌,本文研究了蛭弧菌对海产品中常见弧菌的裂解消除能力,以探索其对由弧菌所引起的食物中毒等流行性传染疾病的预防效果。实验结果表明,41株弧菌中共有36菌株可被4株蛭弧菌(Bh04-4,Bh04-41a,Bh04-A+和Bh04-1f)中的任一株所裂解,占总试验菌株的87.8%;对副溶血弧菌、非01非0139群霍乱弧菌、溶藻胶弧菌这三种常见致病弧菌的裂解率分别达88.9%、83.3%、81.8%。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在由弧菌所引起的食物中毒等流行性传染疾病的防治方面有潜在应用价值。     

蛭弧菌的分离鉴定及其对非O1霍乱弧菌的消除作用研究

从海洋环境中分离到2株蛭弧菌(A-1和A-2),研究了其对6株不同来源非O1霍乱弧菌的消除作用,以探索其对由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病的预防效果。实验结果表明,在20～35℃温度条件下,蛭弧菌均有较好的裂解效果,30℃时裂解能力最强;在pH6.5～8.1条件下,蛭弧菌均有较好的裂解能力,pH为7.2时,达到最佳裂解效果;A-1能裂解其中5株非O1霍乱弧菌,A-2能裂解其中4株非O1霍乱弧菌,而2株蛭弧菌协同作用,能全部裂解6株非O1霍乱弧菌。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在预防由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病方面具有潜在应用价值。     

蛭弧菌的分离及消除沙门氏菌的初步研究

蛭弧菌具有裂解病原菌的功效,可以用作生物净化因子.本实验从海洋环境中分离到1株蛭弧菌(BDK-1).利用蛭弧菌BDK-1进行消除鸡蛋表面的沙门氏菌的人工模拟实验,结果表明,蛭弧菌BDK-1在其浓度为104～1010PFU/mL时,可有效消除鸡蛋表面的沙门氏菌,显示了蛭弧菌在食品卫生安全应用方面的潜在价值.     

蛭弧菌的分离及消除沙门氏菌的初步研究

蛭弧菌具有裂解病原菌的功效,可以用作生物净化因子。本实验从海洋环境中分离到1株蛭弧菌（BDK-1）。利用蛭弧菌BDK-1进行消除鸡蛋表面的沙门氏菌的人工模拟实验,结果表明,蛭弧菌BDK-1在其浓度为10⁶～10¹⁰PFU/mL时,可有效消除鸡蛋表面的沙门氏菌,显示了蛭弧菌在食品卫生安全应用方面的潜在价值。      

蛭弧菌对草鱼生长及免疫力的影响

用添加蛭弧菌的饲料喂养草鱼,能够显著加快草鱼的生长发育,降低饵料系数。同时明显影响各项免疫指标,胸腺的免疫器官指数逐渐升高,头肾的免疫器官指数开始时升高然后下降,血液中的NBT阳性细胞数量逐渐增加, 36d内相对生长率可提高32. 6%。用温和气单胞菌疫苗免疫后,草鱼的免疫应答水平明显提高,免疫力增强。蛭弧菌适宜的添加剂量为0. 5%。     

溶藻弧菌引起暴发型食物中毒的病原学研究

为研究一起食物中毒的病原 ,对分离的可疑菌进行了培养、鉴定、动物毒力实验及ST毒素测定 ,结果显示分离菌为溶藻弧菌 ,该菌对小白鼠的LD50 为 3× 10 7CFU g鼠体重 ,存在ST毒素 ,证明这起食物中毒的病原为溶藻弧菌。     

溶藻弧菌噬菌体Va2001的分离鉴定及其应用

为了开发水产品中溶藻弧菌的生物清除剂,以溶藻弧菌为宿主菌,从锦州市水产品市场、农贸市场、笔架山海域、超市及葫芦岛市某水产养殖场、鞍山市某养殖场等地方采集了约60份海产品及其养殖环境污水,应用双层平板法从中分离纯化获得1株烈性噬菌体,命名为Va2001。对Va2001的裂解谱、最佳感染复数（optimal multiplicity of infection）、一步生长曲线、温度和pH的稳定性等生物学特征进行了研究,并在牡蛎感染模型中测定了噬菌体对溶藻弧菌的清除效果。结果表明,该噬菌体Va2001属于有尾噬菌体目(Caudovirales),短尾噬菌体科（Podoviridae）,Va2001的裂解谱较窄,裂解率为32%,最佳感染复数为0.0001,潜伏期约为20 min,裂解期为100 min,平均裂解量为274 PFU/cell;在4~60 ℃、pH4~9范围内活性稳定。以牡蛎为感染模型的净化实验结果显示,噬菌体Va2001能够抑制养殖环境中溶藻弧菌的增长,降低牡蛎体内溶藻弧菌的含量;当养殖时间延长至72 h时,实验组中溶藻弧菌的数量降低约2个数量级。本研究的结果表明噬菌体Va2001具有良好的应用前景,可以作为海产品中溶藻弧菌的新型生物清除剂。     

蛭弧菌的生长特性及其培养条件的优化

为了将从海洋环境中分离得到的4株蛭弧茵发酵制备为微生态制剂,应用于水产食品安全生产,本实验研究了不同条件对蛭弧茵生长的影响.结果表明,4株蛭弧茵的最适pH为7.1～7.4;最适NaCl浓度为2.5%～3%;最适温度为30℃;二价金属离子Ca2+浓度的提高可有效增强蛭弧茵的生长及裂解能力;4株蛭弧菌对青霉素、土霉素、氯霉素和诺氟沙星均敏感;有机污染(苯酚和尿素)和重金属离子(Pb2+)污染对蛭弧菌的生长繁殖能力均有显著影响.并在单因素实验的基础上,运用响应面分析法确定了BDZ-100的最佳生长条件为:宿主菌浓度1xlO10 CFU/mL,,摇床速度250 r/min,培养液pH7,温度31℃,Nacl浓度3.1%,Ca2+浓度8.5mmol/L.从而为蛭弧菌微生态制剂的发酵制备和应用提供理论基础.     

一株溶藻弧菌的分离鉴定及其对九孔鲍苗的致病性

为找到导致2002年以来中国南部沿海鲍鱼养殖大量死亡的原因,利用胰蛋白培养基或硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖培养基从2003年汕尾发生病害的鲍鱼中分离得到了一株具有致病性的细菌.经生理生化特性试验及与特征溶藻弧菌ATCC17749比较,此菌株为溶藻弧菌.经感染试验证明其对鲍苗的半致死量为1.58x 104 CFU/m...     

霍乱弧菌噬菌体在消除海产品中相关弧菌的潜在应用研究

噬菌体具有裂解病菌的作用,可用作生物净化因子.本实验以霍乱弧菌为宿主菌,采用双层平板法从鲍鱼养殖环境中分离到5株霍乱弧茵噬菌体.以23株弧菌为宿主菌,本文研究了霍乱弧菌噬菌体对海产品中常见弧茵的裂解消除能力,同时针对宽裂解谱噬菌体进行包括热失活、pH稳定性、紫外照射、不同镁离子浓度、不同柠檬酸钠浓度等理化因素对其裂解能力的影响,以探索其裂解消除弧茵的最优条件.实验结果表明噬菌体在消除霍乱弧菌方面有潜在的应用价值,紫外照射、柠檬酸钠对噬菌体裂解有不同程度的抑制作用,温度和pH值对噬茵体裂解也有不同程度的影响,而适度的镁离子则有促进作用.     

植物乳杆菌LP21绿色合成纳米硒及对溶藻弧菌的抑菌活性

采用益生菌植物乳杆菌LP21合成纳米硒,为抑制水产养殖中溶藻弧菌感染提供一种新的方法.通过植物乳杆菌LP21绿色合成纳米硒,对所得纳米硒进行透射电镜形貌及能谱分析,粒径仪测定粒径,红外光谱分析纳米硒表面生物分子的分布,并研究纳米硒对溶藻弧菌的抑菌活性.结果 表明,植物乳杆菌LP21还原的纳米硒呈球形,分散性良好;纯化的...     

海水中溶藻弧菌的分离、鉴定及其耐药性分析

用无菌采样器在上海临港海域采集100份海水,经过增菌培养和选择性分离后,进行3种生理生化鉴定和PCR鉴定,共得到33株溶藻弧菌。采用优化的K-B法测定分离菌株对20种抗生素的耐药性,结果表明:溶藻弧菌对四环素的耐药性最高（100.0%）,其次是氨苄青霉素（97.0%）和羧苄青霉素（93.9%）;对头孢吡肟、安曲南、红霉素、环丙沙星、诺氟沙星和氯霉素敏感。本次分离的溶藻弧菌具有严重的多重耐药性,所有分离菌均对3种及3种以上抗生素多重耐药,同时对6种及6种以上抗生素耐药的有15株（45.5%）,同时对8种及8种以上抗生素耐药的有6株（18.2%）。本次关于溶藻弧菌对抗生素的耐药性分析结果可以为食源性疾病控制提供参考依据,同时为溶藻弧菌的耐药机制的研究奠定理论基础。      

微滴式数字聚合酶链式反应定量检测水产品中溶藻弧菌

目的建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法。方法采用SN/T 1870—2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物探针,建立优化ddPCR反应体系,梯度稀释溶藻弧菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ);通过人工添加试验,比较ddPCR与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法定量的准确性,以验证ddPCR方法用于检测水产品中溶藻弧菌的可行性。结果所建立的水产品中溶藻弧菌ddPCR检测方法经过溶藻弧菌标准菌株、分离菌株以及其他近源菌株验证,具有良好的特异性;纯培养的LOD和LOQ一致,均为2.2拷贝/反应,相当于110 CFU/ml纯菌液,定值结果与传统平板计数方法相差0.04个对数值。在人工污染模拟试验中ddPCR的定量结果较qPCR更接近理论添加值,检测重复性以及对低浓度样品的检出情况也均优于qPCR。ddPCR对人工污染样品的LOQ可达120拷贝/g。结论溶藻弧菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可为快速定量检测溶藻弧菌提供参考。     

Cloning,Expression, and Genus-Specificity Analysis of 28-kDa OmpK from Vibrio alginolyticus

ABSTRACT: Some Vibrio species are universal marine pathogens and Vibrio infections are often encountered due to consumption of raw or uncooked seafood. The outer membrane proteins, playing a key role in interaction between bacteria and hosts, are potential candidates for development of vaccine and markers of the genus Vibrio. In this study, the ompK (outer membrane protein K) genes of Vibrio alginolyticus, V. vulnificus, V. parahaemolyticus, V. fluvialis, and V. mimicu were cloned with 798 to 822 nucleotides encoding 266 to 274 amino acids. The ompK gene from V. alginolyticus was expressed in Escherichia coli using pET-22b expression vector. The recombinant fusion OmpK protein with 6×His tag was purified with nickel chelate affinity chromatography. The polyclonal antibody (titer, 1:102400) against V. alginolyticus OmpK was developed in guinea pigs and it positively reacted with each of 5 Vibrio species but negative to other 18 Gram-negative bacterial strains. The result suggests that Vibrio OmpK protein could be a genus-specific antigen, which can be used for developing vaccines and rapid detection of multiple Vibrio species.     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的 溶藻弧菌鉴定研究

目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定,并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果不同的培养时间,24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小,鉴定值分别为94.10%,93.90%,92.70%;同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定,培养24 h后,鉴定值为97.7%,T值为0.47,但培养72 h后,鉴定值为52.4%,T值为0.15。同一样品点样2次,得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后,鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论与传统的生化鉴定方法相比,MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性,可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌,可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。