鼠李糖乳杆菌Probio-M9连续传代过程中的遗传稳定性

目的：探究鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续传代过程中的遗传稳定性。方法：以鼠李糖乳杆菌Probio-M9为研究对象,对其传代过程中第0,25,50,75,100代的菌株形态变化、碳水化合物利用能力以及菌株代谢特性进行比较,同时应用比较基因组学分析其在连续培养100代过程中基因组水平的变化。结果：鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续培养100代过程中,其菌体形态、碳水化合物利用能力等表型特征及代谢特性均无显著性（P>0.05）变化,表型特征稳定。同时以鼠李糖乳杆菌Probio-M9原始菌株基因组作为参考序列,对不同代时15株菌进行测序,基因组大小及GC含量表明15株连续培养的菌株与鼠李糖乳杆菌Probio-M9原始菌株基因组均无明显差异。系统发育关系表明15株菌与原始基因组具有较近的亲缘性。从识别到的SNP位点来看,每两个代时菌株间均未发现稳定遗传的突变位点,且菌株共线性良好,从基因组水平编码基因的突变水平证实了鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续培养100代过程中具有稳定表型特征及代谢特性。结论：鼠李糖乳杆菌Probio-M9在连续传代过程中具有良好的遗传稳定性,为其进一步开...     

鼠李糖乳杆菌Probio-M9的特异性荧光原位杂交探针设计及应用

宿主口服益生菌的定性和局部检测具有重要意义。本研究通过设计株水平特异性荧光原位杂交（FISH）探针来研究鼠李糖乳杆菌在宿主肠道中的定殖。根据鼠李糖乳杆菌Probio-M9和其它相关物种的基因组序列,分别设计了鼠李糖乳杆菌种水平特异性探针（Probe-16S）和鼠李糖杆菌Probio-M9菌株水平特异性探针（Probe-SP）。在使用15株鼠李糖乳杆菌菌株和15株其它益生菌验证这些特异性探针后,通过荧光原位杂交（FISH）验证鼠李糖乳杆菌Probio-M9菌株的特异性探针在体外和体内的适用性。结合荧光D-氨基酸（FDAA）探针,在大鼠的肠道中检测到鼠李糖乳杆菌Probio-M9的活细胞。本研究设计的FISH探针可从肠道菌群中特异性鉴定鼠李糖乳杆菌Probio-M9,该方法可与FDAA探针结合使用,以进一步探索该益生菌菌株在宿主肠道中的定位。     

不同来源的植物乳杆菌基因组和抗生素抗性

为了研究不同分离源对植物乳杆菌基因组和功能的影响,选取了来自发酵酱、泡菜、粪便3种环境的33株植物乳杆菌,通过比较基因组学手段研究菌株的基因组基本特征、直系同源基因、系统进化关系,并结合功能基因注释结果与表型结果分析菌株对抗生素的耐药性。系统发育树揭示了分离源对植物乳杆菌的遗传进化具有较为显著的影响;同源基因结果表明粪便源的菌株其特殊基因数量要高于泡菜源和发酵酱源菌株的数量。33株植物乳杆菌均含有环丙沙星、四环素、氯霉素、甲氧苄氨嘧啶和万古霉素的抗性基因,菌株对这些抗生素也表现出抗性;绝大多数菌株对庆大霉素、链霉素、卡那霉素、新霉素、氨苄西林敏感,在基因组中也没有相关抗性基因;而红霉素和克林霉素的基因和表型并不对应。抗生素实验结果说明,分离源对菌株影响较小,大部分基因型与表型可以对应,基因组学对研究植物乳杆菌的生理特性起一定的指导作用。     

不同来源植物乳杆菌基因组的比较分析

目的 对分离自母乳、婴儿肠道的植物乳杆菌进行全基因组测序,分析菌株间亲缘关系和细菌素合成相关基因。方法 本研究采用Illumina高通量测序平台对不同来源的植物乳杆菌进行全基因组测序,质控过滤后的数据经Unicycler组装获得基因组精细图,通过比对COG、CAZy数据库对功能基因进注释,并借助BAGEL4等生物信息学分析工具鉴别植物乳杆菌素合成相关的基因簇,分析不同来源植物乳杆菌的益生潜力。结果 本研究5株植物乳杆菌基因组平均GC含量为44 %,母乳源植物乳杆菌基因数量多于婴儿肠道源菌株。进化树和ANI分析结果显示,分离所得菌株具有较高的同源性,相同来源的菌株更倾向于聚类到一个分支。功能注释结果显示,母乳源菌株与肠道源菌株相比拥有更多编码碳水化合物代谢的基因,且拥有完整的产植物乳杆菌素基因簇。结论 植物乳杆菌基因组GC含量、功能基因数目及产细菌素基因簇结构等与分离源有一定的关联,母乳源植物乳杆菌更适于作为潜在益生菌的候选菌株,本研究为益生菌的益生潜力研究提供了遗传学基础。     

动物双歧杆菌乳亚种V9连续传代过程中遗传稳定性评价

目的:以具有优良益生特性的动物双歧杆菌乳亚种V9为研究对象,对其连续传代过程中的遗传稳定性进行研究。方法:动物双歧杆菌乳亚种V9在TPY培养基中连续培养100代,对其0,25,50,75,100代的菌体形态、碳水化合物利用情况以及结合比较基因组学进行综合分析。结果:动物双歧杆菌乳亚种V9在连续传代过程中不同代时的菌体形态、碳水化合物利用情况均无显著差异(P＞0.05),并以动物双歧杆菌乳亚种V9原始基因组作为参考序列,研究发现不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9的基因组大小和GC含量与原始基因组均无显著差异(P＞0.05),系统发育树结果表明不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9与原始基因组亲缘关系较近,通过识别SNP突变位点发现不同代时的动物双歧杆菌乳亚种V9基因组保守,均未发现稳定遗传的突变位点,进一步进行碳水化合物代谢活性酶注释,结果发现不同代时菌株具有相似的碳水化合物代谢相关基因,遗传特征高度相似。结论:本研究从表型特性和基因组层面综合评估了动物双歧杆菌乳亚种V9的遗传稳定性,可为其进一步开发研究及产业化提供保障。     

鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平快速定量方法的建立及应用

目的 应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法 通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的特异基因,以菌株水平的特异基因为靶标设计引物及探针,优化反应体系和条件,建立鼠李糖乳杆菌HN001株水平的q PCR检测方法。对方法的特异性、灵敏度、检出限进行验证,并采用已建立的q PCR方法进行模拟添加样品和实际样品的检测。结果 所建立的方法特异性强,与近缘菌株无交叉反应,鼠李糖乳杆菌HN001纯培养液检出限为102 CFU/mL,灵敏度可达到650 copies/μL,可在2h内完成样品检测。对模拟添加样品以及实际样品检测中q PCR和平板计数法结果的对数值进行显著性分析检验,两种方法的测定值结果均无显著性差异(P>0.05)。结论 本研究建立的q PCR检测方法可有效应用于益生菌产品中鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平定量检测,具有快速、灵敏、准确的特点。     

碳源对鼠李糖乳杆菌生长特性的影响研究

目的研究不同鼠李糖乳杆菌菌株对不同碳源的利用及生长特性。方法在600nm波长处测定12株鼠李糖乳杆菌在不同碳源条件下的吸光度,幵采用差异分析法和分类主成分分析法对其迚行分析。结果利用特定时间点的差异分析,在葡萄糖作为主要碳源时,各菌株之间的生长情况均没有显著差异(P0.05)。12株菌在乳糖作为主要碳源时可以分为4个生长型,在蔗糖作为主要碳源时可以分为5个生长型。主成分分类法在葡萄糖作为主要碳源时,能将12株菌分为7个生长型,在乳糖作为主要碳源时可分为8个生长型,在蔗糖作为主要碳源时可分为10个类型。结论不同鼠李糖乳杆菌菌株对不同碳源的利用存在差异,表明菌株在碳源利用上具有菌株特异性,同时不同菌株利用碳源的特异性会受到碳源种类的影响。     

鼠李糖乳杆菌不同组分抗氧化活性的研究

用DPPH·法测定4株鼠李糖乳杆菌B7、B8、B10、B44的抗氧化活性,分析了各菌株无细胞抽提液、全细胞和细胞裂解液等组分的DPPH清除能力及其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性,并对灭酶前后各菌株组分的DPPH清除能力进行了比较。结果表明:4株鼠李糖乳杆菌都具有较高的抗氧化性;都含有以上3种酶;灭活后的菌株各组分也具有一定的抗氧化能力,其中无细胞抽提物对DPPH清除能力最强,其次是细胞裂解液,最次是全细胞,与灭酶前的趋势一致。说明4株鼠李糖乳杆菌的抗氧化活性不仅与一些抗氧化性酶有关,也和其他物质有关,为进一步研究乳酸菌的抗氧化机制提供了理论依据。     

基于全基因组测序解析不同瑞士乳杆菌菌株的遗传差异——以瑞士乳杆菌H9和H10为例

目的:瑞士乳杆菌是广泛用于干酪、发酵乳饮料等领域的重要发酵剂菌种之一.以瑞士乳杆菌H9和H10为例,解析不同瑞士乳杆菌菌株间的遗传背景和基因组差异,为菌株鉴定和开发应用奠定遗传学基础.方法:以瑞士乳杆菌H9和H10为例,结合NCBI数据库中其它16株瑞士乳杆菌全基因组完成图,通过比较基因组学方法探究不同菌株之间的遗传差...     

鼠李糖乳杆菌JAAS8胞外多糖生物合成基因的克隆和序列分析

根据已报道乳杆菌胞外多糖生物合成基因的同源性,利用其保守区设计引物,扩增出鼠李糖乳杆菌JAAS8RmlA基因部分序列,并通过染色体步移法扩增出Rml(ACB)的序列。获得了鼠李糖乳杆菌JAAS8胞外多糖生物合成基因4.1 kb序列片段,编码4个可读框。利用BLAST和ClustalX程序对获得序列进行生物信息学分析,预测其结构和功能。结果表明:该序列与已知鼠李糖乳杆菌胞外多糖生物合成基因具有高度同源性,RmlA、RmlC和RmlB基因与dTDP-L-鼠李糖前体的生物合成密切相关。     

Dry sausage fermented by Lactobacillus rhamnosus strains

The ability of three probiotic Lactobacillus rhamnosus strains GG, E-97800 and LC-705 and one commercial Pediococcus pentosaceus starter strain (control) to produce dry sausage was studied. During the fermentation process the numbers of inoculated lactic acid bacteria increased from approx. 7 log10 to 8-9 log10 cfu/g and the pH values decreased from 5.6 to 4.9-5.0. The sensory test indicated that the dry sausages fermented by L. rhamnosus LC-705 were inferior to the control sausages. The presence of inoculated experimental strains as predominant organisms in the dry sausages was recognised on the basis of their genetic fingerprints by ribotyping. The concentrations of biogenic amines remained low during the ripening process. These results indicated that the studied Lactobacillus rhamnosus strains, especially strains GG and E-97800, are suitable for use as probiotic starter cultures in fermenting dry sausage.     

干酪乳杆菌纯种发酵大豆乳培养基的优化调配

从益生菌乳制品中自行分离选育出的生长繁殖力强、发酵活力高的干酪乳杆菌(05-20)为试验菌株,研究了牛乳和蔗糖在大豆乳中的添加量对干酪乳杆菌在大豆乳中发酵的凝乳时间、凝乳时活菌数、pH值、滴定酸度及产品感官风味的影响,通过方差分析确定了发酵培养基中牛乳和蔗糖的最适添加量分别为20%和7%,完成了以大豆乳作为干酪乳杆菌最佳载体的初步探索,为进一步研制开发益生菌发酵大豆乳制品奠定了基础.     

Antifungal activity of sodium acetate and Lactobacillus rhamnosus

The inhibition of molds by sodium acetate in deMan Rogosa Sharpe (MRS) medium, along with the antifungal activity of Lactobacillus rhamnosus VT1, was studied by the slope agar plate method. MRS agar prepared with and without sodium acetate was used as the agar substrate. A total of 42 strains of Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria, Cladosporium, and Rhizopus were used to compare sensitivities to the inhibitory activity of sodium acetate and L. rhamnosus VT1. It was found that sodium acetate in MRS medium affected the growth of 33 of the 42 mold strains tested to various degrees. The highest sensitivity to sodium acetate was shown by strains of Fusarium, followed by strains of Penicillium, Aspergillus, and Rhizopus. L. rhamnosus VT1 also inhibited mold growth. A significant finding was that sodium acetate and L. rhamnosus VT1 in combination exhibited a possible synergistic action. Thirty-nine of the 42 mold strains tested were completely inhibited by the presence of both antifungal agents. This finding confirms that sodium acetate, a basic component of commercial MRS medium, has strong antifungal properties, and this must be taken into consideration when evaluating the antifungal activity of Lactobacillus cultures grown in MRS broth.     

Nonfermented ice cream as a carrier for Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus rhamnosus

Efficiency of a nonfermented ice cream for delivering Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus rhamnosus to consumers was evaluated. Both of the microorganisms survived at the populations of greater than 10⁷ CFU g^?1 during 12 weeks of storage at ?19 °C. Addition of the microorganisms had no significant effect on the overrun, viscosity, firmness and melting behaviour; it changed the acidity, pH and sensory properties of the finished product. Resistance to acid and sensitivity to bile of both bacteria were tested separately on fresh harvested cells before inoculation to ice cream and then on the frozen‐thawed cells after 12 weeks of cold storage in ice cream. Ice cream processing followed by cold storage reduced acid resistance of both bacteria at pH 2.5. Resistance to bile in L. rhamnosus was not affected in frozen‐thawed ice cream when compared to fresh cell, whereas resistance to bile in L. acidophilus appeared to be more susceptible to the process and cold storage.     

鼠李糖乳杆菌降解亚硝酸盐影响因素研究

该试验研究鼠李糖乳杆菌降解亚硝酸盐的影响因素.研究发现,鼠李糖乳杆菌降解亚硝酸盐的最适pH值是5.0～6.0,最适温度是40℃;培养基中碳源、氮源、酵母膏、金属离子成分分别为2%葡萄糖、0.5%大豆蛋白胨、0.4%酵母膏;添加Fe2+、Fe3+、Cu2+的亚硝酸盐降解效果明显;最适接种量3%;最适培养方式为动态培养.     

鼠李糖乳杆菌乳饮料发酵工艺

对无稳定剂鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnose发酵乳饮料的发酵工艺进行优化。以L.rhamnose在不同碳源培养基中的发酵速度为评价指标,筛选出葡萄糖是其发酵的最适碳源。发酵时间、杀菌条件、发酵温度对发酵乳饮料的活菌数及沉淀率均有明显的影响。优化工艺参数为:杀菌条件115℃,15 min,发酵温度为37℃,发酵时间为84 h,按照此工艺制得的发酵乳饮料,活菌数达到8.5×108CFU/m L,沉淀率为1.1%。     

真菌多糖对鼠李糖乳杆菌性质的影响

研究了不同质量浓度的真菌多糖对鼠李糖乳杆菌的影响。结果表明,质量浓度为15g/L的真菌多糖对鼠李糖乳杆菌的增殖效果最显著,其活菌数最大可达到3.08×1010mL-1,能够使发酵周期提前2～3h。其产酸能力得到明显的提高,并且此真菌多糖益生元较好地提高了鼠李糖乳杆菌的耐酸、耐胆盐的能力。     

鼠李糖乳杆菌发酵及冻干保护的研究

对鼠李糖乳杆菌发酵性能和冷冻干燥存活率与保护剂、发酵时间和温度的关系进行了研究。利用液体发酵、紫外分光测量法、微量活菌计数法进行培养、测量。结果表明，鼠李糖乳杆菌发酵周期为12－16h；乳清粉和双歧因子对鼠李糖乳杆菌发酵产酸性能和细菌总数有定的影响。正交实验结果表明，10％乳清粉，15％脱脂奶粉，16h发酵时间的组合，冷冻干燥后存活的影响无显著性差异。结论：乳清粉和双歧因子在发酵后期会对鼠李糖乳杆菌的生长和发酵有促进作用可能是含糖量较高的原因。在冻干时，蛋白质（特别是酪蛋白）对细菌有保护作用。     

Isomaltooligosaccharide increases the Lactobacillus rhamnosus viable count in Cheddar cheese

Five batches of Cheddar cheese were manufactured containing different levels of isomaltooligosaccharide (IMO) and a probiotic strain of Lactobacillus rhamnosus to study the effect of IMO on the survival of starter lactococci and probiotic micro‐organisms, on proteolytic patterns, cheese composition and sensory properties. The cheese was exposed to conditions simulating those found in the gastrointestinal tract to evaluate the survival of Lb. rhamnosus. Results demonstrated that the addition of Lb. rhamnosus and IMO did not affect the main compositional variables of Cheddar cheese. The counts of starter culture and probiotic organisms increased in cheese which contained Isomaltooligosaccharide (Batches 3, 4 and 5) more than in the control (Batches 1 and 2) during the fermentation. The probiotic counts in fresh cheese (B‐4) was 9.23 log₁₀ cfu/g which was more than one log cycle greater than in the control (B‐2). The probiotic counts remained above 8 log₁₀ cfu/g at the end of the manufacturing process. Primary proteolysis was not affected by the addition of probiotic bacteria and IMO, but the level of secondary proteolysis was slightly higher compared with the control group. The addition of IMO improved the texture and sensory quality of the cheese and the probiotic bacterium had the same effect. Under conditions that simulated the gastrointestinal tract, the probiotic bacteria in cheese (B‐4) exhibited good survival and remained above the recommended 6–7 log₁₀ cfu/g.