河北地区食源性单核细胞增生李斯特菌脂肪酸的分型研究

对脂肪酸分型方法在单核细胞增生李斯特菌(LM)菌株鉴定、菌株相似性分析等方面的应用价值进行评价。本研究选取2005~2007年从河北地区六大类食品中分离到的90株LM菌,提取脂肪酸,利用MIDI公司Sherlock系统进行菌体脂肪酸成分分析,使用SPSS 19.0软件对获得的数据资料进行统计分析及聚类分型,并将脂肪酸分型与传统的血清分型和分型金标准PFGE分型进行比较。结果表明,脂肪酸分析法判定LM菌的符合率为96.67%,所有菌株共检出20种脂肪酸成分,主要脂肪酸成分有3种,分别为脂肪酸15:0anteiso、17:0 anteiso和15:0 iso。各血清型间脂肪酸含量存在一定差异,血清1/2c型菌株与血清1/2a、1/2b和4b型菌株相比,有2种主要脂肪酸含量差异有统计学意义(P0.01)。与PFGE分型相比,在对结构简单的小样本资料的菌株亲缘关系鉴定中脂肪酸分型更具优势。将脂肪酸分型与血清学分型和PFGE分型相结合能够更好的分析LM菌菌株之间的相关性。     

七类食品单核细胞增生性增李斯特菌污染状况调查

利用李斯特显色培养基对食品中单增李斯特菌进行分离纯化后,提取基因组DNA,用PCR技术扩增hlyA基因特异性350bp的片段和iap基因特异性1500bp的片段,用此方法对七类食品进行检测。结果表明,冬春夏三季采集的62、60、62份样品中,分别检出单增李斯特菌3株、3株、10株,污染率分别为4.84%、5%、16.13%。夏季单增李斯特菌的污染情况比冬季和春季严重,其中蔬菜和牛奶中未检出单增李斯特菌;PCR检测可用于单增李斯特菌快速、特异、敏感检测。     

单核细胞增生李斯特菌对食品加工中的胁迫响应及其机制研究进展

单核细胞增生李斯特菌（简称单增李斯特菌）在食品加工过程中经常会遇到环境胁迫,如酸胁迫、热胁迫、冷胁迫、干燥和高渗透压胁迫以及交叉胁迫等,并产生应激反应,而经过环境胁迫的单增李斯特菌可显著增强其抵抗致死性环境胁迫的能力,给食品安全带来极大危害。单增李斯特菌的酸胁迫响应机制主要包括F0F1-ATPase系统、谷氨酸脱羧酶系统以及精氨酸脱亚胺酶系统。热休克蛋白、冷休克蛋白、相容性溶质在单增李斯特菌的热胁迫、冷胁迫和干燥及高渗透压胁迫反应中起重要作用。本文从以上几方面就单增李斯特菌对环境胁迫响应及其机制的研究现状进行了综述,并提出了今后可能的研究方向,为单增李斯特菌在食品加工过程中的胁迫响应研究及防控提供指导。     

单核细胞增生李斯特菌复合抑菌剂的研究

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)在0～4℃也能生长,为确保冷却肉卫生安全,必须阻止肉中污染的LM的生长繁殖。本实验通过研究不同抑菌剂对3株LM的最小抑菌浓度(MIC),选取了ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸三种抑菌剂,利用响应面法找出最佳组合。结果表明:ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸对单核细胞增生李斯特菌的最小抑菌浓度分别为50μg/mL、200μg/mL、6.4mg/mL。当ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸的浓度分别为20.5μg/mL、184.6μg/mL、4.37mg/mL时对单核细胞增生李斯特菌的抑制作用最佳。     

一例孕产妇单核细胞增生李斯特菌感染的溯源调查及发病机制探讨

目的 针对一例孕产妇李斯特菌病开展病例调查和溯源分析,探讨感染来源和单增李斯特菌病的发病机制,为防控李斯特菌病提供依据。方法 开展现场流行病学调查,收集病例信息,采集病例血液标本、家庭冰箱内食品及厨房环境样本、家庭附近农贸市场的食品样本,针对不同来源样本中的单增李斯特菌进行检测。结果 病例经常食用从农贸市场购买的中式凉拌菜（5～7次/周）,在家自制或二次加工中式凉拌菜。其家庭冰箱冷藏室储存食物生熟不分,且生食水果在冰箱中出现腐烂现象。厨房的两块菜板生熟不分、清洗消毒不及时,厨房操作面存在交叉污染。检测结果显示,11份样本中共分离出3株单增李斯特菌,1株来自该病例的血液标本,2株来自厨房冰箱内食品涂抹和菜板涂抹。提示该病例由于食用污染食品导致感染并通过胎盘屏障感染胎儿。结论 本起事件是丰台区首次在食品和环境中尝试溯源单增李斯特菌病的感染来源。病例家庭冰箱内生肉和胡萝卜、厨房环境涂抹样本中均检出单增李斯特菌,明确了食品与环境交叉污染导致病例单增李斯特菌感染发病;医院的早期识别及处置是避免新生儿不良结局出现的重要保障。     

单核细胞增生李斯特菌复合抑菌剂的研究

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）在0～4℃也能生长,为确保冷却肉卫生安全,必须阻止肉中污染的LM的生长繁殖。本实验通过研究不同抑菌剂对3株LM的最小抑菌浓度（MIC）,选取了ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸三种抑菌剂,利用响应面法找出最佳组合。结果表明:ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸对单核细胞增生李斯特菌的最小抑菌浓度分别为50μg/mL、200μg/mL、6.4mg/mL。当ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸的浓度分别为20.5μg/mL、184.6μg/mL、4.37mg/mL时对单核细胞增生李斯特菌的抑制作用最佳。      

广西单核细胞增生李斯特菌的流行率、毒力特征和分子分型研究

目的 比较广西不同种类食品中单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）的流行情况、毒力特征和分子分型特征,更好地了解单增李斯特菌的遗传特点及其传播的潜力。方法 对来自2002—2020年的210株单增李斯特菌进行全基因组测序（WGS）,分析其序列分型（ST）、克隆群（CC）型及毒力基因。结果 2002—2020年广西53.8%单增李斯特菌分离株来源于肉与肉制品,59.0%分离株来自于谱系Ⅱ,优势ST型为ST8和ST9。79.4%菌株携带LIPI-1基因（hly、prfA、plcA、plcB、mpl、actA）,83.7%菌株携带LIPI-2基因（inlC、inlF、inlJ、inlK）。17.6%菌株携带LIPI-3基因（llsA、llsB、llsD、llsG、llsH、llsP、llsX、llsY）。结论 肉与肉制品是广西单增李斯特菌检出率最高的食品类型,分子分型结果证实了单增李斯特菌种群具有高度的遗传多样性,WGS的高分辨力可用于监测食源性单增李斯特菌病的暴发。毒力基因的分布表明广西单增李斯特菌存在不同程度毒力基因的缺失,应警惕高致病性的菌株引起的食源性暴发事件。     

香辛料提取物在培养基及冷却猪肉中对单核细胞增生性李斯特菌的抑制作用

研究了几种香辛料提取物在培养基中单独使用和复配使用时对单增李斯特菌的抑制效果,将其最优组合应用于冷却肉,从而进一步研究其在冷却肉中对单增李斯特菌的抑制作用。实验结果表明,肉桂和丁香的乙醇提取物对该菌的最小抑菌浓度为0.79mg/mL,迷迭香为1.58mg/mL。通过正交实验得到了复合香辛料醇提物的最佳浓度组合为:肉桂1.16mg/mL,迷迭香2.38mg/mL,丁香3.17mg/mL;而且复合香辛料的抑菌圈直径远远大于单个香辛料的抑菌圈直径(P<0.05),对冷却肉中的单增李斯特菌有显著的抑制作用。研究表明,所选择的香辛料对冷却肉中的单增李斯特菌具有抑制作用,而且肉桂、迷迭香和丁香复配使用可以增加抑菌效果。      

香辛料提取物在培养基及冷却猪肉中对单核细胞增生性李斯特菌的抑制作用

研究了几种香辛料提取物在培养基中单独使用和复配使用时对单增李斯特菌的抑制效果,将其最优组合应用于冷却肉,从而进一步研究其在冷却肉中对单增李斯特茵的抑制作用.实验结果表明,肉桂和丁香的乙醇提取物对该菌的最小抑茵浓度为0.79mg/mL,迷迭香为1.58mg/mL.通过正交实验得到了复合香辛料醇提物的最佳浓度组合为:肉桂1.16mg/mL,迷迭香2.38mg/mL,丁香3.17mg/mL;而且复合香辛料的抑茵圈直径远远大于单个香辛料的抑菌圈直径(P＜0.05),对冷却肉中的单增李斯特茵有显著的抑制作用.研究表明,所选择的香辛料对冷却肉中的单增李斯特茵具有抑制作用,而且肉桂、迷迭香和丁香复配使用可以增加抑茵效果.     

可视化跨越式滚环扩增技术检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

本研究以现代加工工艺条件下生产制作的金华火腿为研究对象,评估了因单增李斯特菌而引起食物中毒的风险。通过调查生猪肉中单增李斯特菌的初始污染率及污染水平,金华火腿生产及销售过程中影响单增李斯特菌生长的参数,如pH、水分活度、温度以及乳酸菌含量等,再结合单增李斯特菌生长模型,模拟其暴露水平,并评估了不同人群因食用即食金华火腿切片而患李斯特菌病的风险。结果显示：金华火腿零售时污染水平为−9.47~7.05 lg CFU/g（90%的置信区间）;健康成年人食用即食金华火腿切片的平均患病概率小于10⁻¹⁵,易感人群的平均患病概率小于10⁻¹³。食用即食金华火腿切片而患李斯特菌病的风险较低,金华火腿的现代加工工艺对于单增李斯特菌的控制水平可以与国际接轨。本研究首次定量模拟了金华火腿从生猪肉到腌制发酵至最终产品的全过程中单增李斯特菌的暴露情况,为发酵火腿中食源性致病菌的风险评估提供了参考模型。     

Stress response of Listeria monocytogenes isolated from cheese and other foods

The responses to pH and sodium chloride of four strains of Listeria monocytogenes isolated from Portuguese cheese, with a sodium chloride concentration of about 2% (w/v) and a pH value from 5.1 to 6.2, were studied. Two isolates from meat and two clinical isolates related to food-borne listeriosis, in which the implicated food product had about 2-3.5% (w/v) sodium chloride, also were studied. The effect of temperature on pH and sodium chloride sensitivity was also determined. The results show that natural isolates vary in response to these stresses and the data were often at variance with previously published data. Strains varied in sensitivity to low pH and to high sodium chloride concentration but the cheese isolates tended to be more resistant. A lower temperature was associated with a decrease in resistance to low pH and to sodium chloride. All strains showed an acid tolerance response induction when grown at pH 5.5 and although the time required for maximum induction of the response varied between strains, 2 h of acid adaptation, at least, was necessary which is longer than previously reported. Some strains showed an osmotolerance response after incubation in 3.5% (w/v) sodium chloride. Osmoadaptation, in addition to inducing an osmotolerance response, also induced cross-protection against acid shock conditions (pH 3.5). The acid tolerance response also induced a cross-protection against osmotic shock conditions (20% (w/v) sodium chloride). In some cases there was a relationship between the degree of resistance and adaptation, but usually the behaviour of a particular strain was independent of the conditions from which it was isolated.     

Reliability of Listeria monocytogenes Identification by Specific PCR Assessed by Phenotypic and Genotypic Techniques

This study evaluates the possibility of using polymerase chain reaction (PCR) for rapid identification of food-borne Listeria monocytogenes as an alternative to API Listeria system and estimates the incidence of API Listeria misidentifications in food-borne Listeria species. A total of 198 strains, 11 L. monocytogenes, 28 other Listeria species, and 159 food isolates were phenotypically and genotypically characterized by API Listeria profiles and randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles, respectively. They were also tested for PCR amplification using genus- and species-specific primers. Clustering analysis of phenotypic and genotypic data showed discrepancies in species identification of some isolates by API Listeria profiles. Their identities were confirmed by 16S rDNA sequencing, and thus, it was revealed that 33% of Listeria innocua and 19% of Listeria welshimeri were misidentified as L. monocytogenes by API Listeria profiles. Reliable identification of L. monocytogenes was obtained by LM1–LM2 specific primers which allowed PCR amplification only in reference strains and isolates previously identified as L. monocytogenes by RAPD and 16S rDNA sequence analysis. These results corroborate the suitability of specific PCR as a rapid and accurate test for the identification of L. monocytogenes, avoiding misidentification with other Listeria species commonly found in food products.     

血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用及机理

通过平板菌落计数法研究血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用,同时采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚合酶链式反应分析光动力灭菌技术对单增李斯特菌蛋白降解效果和基因组DNA的损伤程度。实验发现浓度为25μg/mL的血啉甲醚在光功密度为200 mW/cm2的溴钨灯光照射30 m in杀灭了99.9999%的单增李斯特菌,并导致了其蛋白质降解和基因组DNA片段断裂。血啉甲醚对单增李斯特菌的光动力灭活作用非常显著,其灭活机理可能是通过对蛋白质降解和基因组DNA损伤实现的。     

沙门氏菌和单增李斯特菌诱导性耐酸响应机制的研究进展

沙门氏菌和单增李斯特菌被认为是肉制品中最重要的食源性致病菌。它们在弱酸环境下会发生强烈的诱导性耐酸响应,同时诱导产生高毒、耐酸、耐渗透压的高危菌株,是影响消费者健康安全的重大隐患。本文主要从沙门氏菌和单增李斯特菌产生诱导耐酸的发现过程、诱导耐酸响应的危害、产生诱导耐酸的影响因素方面进行概述,进一步从pH值稳态系统、应激蛋白分子的调控及细胞膜组成和流动性调控的角度分析了产生诱导耐酸响应的分子机制。     

Aerosol studies with Listeria innocua and Listeria monocytogenes

Aerosol studies of Listeria monocytogenes in food processing plants have been limited by lack of a suitable surrogate microorganism. The objective of this study was to investigate the potential of using green fluorescent protein-labeled strains of Listeria innocua as a surrogate for L. monocytogenes for aerosol studies. These studies were conducted in a laboratory bioaerosol chamber and a pilot food-processing facility. Four strains of L. innocua and five strains of L. monocytogenes were used. In the laboratory chamber study, Listeria cells were released into the environment at two different cell numbers and under two airflow conditions. Trypticase soy agar (TSA) plates and oven-roasted breasts of chicken and turkey were placed in the chamber to monitor Listeria cell numbers deposited from aerosols. A similar experimental design was used in the pilot plant study; however, only L. innocua was used. Results showed that L. monocytogenes and L. innocua survived equally well on chicken and turkey breast meats and TSA plates. No-fan and continuous fan applications, which affected airflow, had no significant effect on settling rates of aerosolized L. monocytogenes and L. innocua in the bioaerosol chamber or L. innocua in the pilot plant study. Listeriae cell numbers in the air decreased rapidly during the first 1.5 h following release, with few to no listeriae detected in the air at 3 h. Aerosol particles with diameters of 1 and 2 microM correlated directly with the number of Listeria cells in the aerosol but not with particles that were 0.3, 0.5, and 5 microM in diameter. Results indicate that L. innocua can be used as a surrogate for L. monocytogenes in an aerosol study.     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌调查及毒力研究

为了解和掌握各类食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Lm)污染状况及菌株的毒力情况,采集5类265件食品,菌株鉴定应用API细胞鉴定系统;毒力测定采用溶血实验、多聚酶链反应（PCR）以及小鼠致病力实验的方法进行,结果显示Lm检出率为4.90%;其中从生肉、熟肉、灌汤和速冻食品中的检出率分别为15.00%、2.48%、9.52%;从熟肉和速冻食品中还检出其它李斯特氏菌,检出率分别为4.96%、5.92%;乳制品和水产品中未检出Lm。13株Lm毒力测定显示,溶血实验与小鼠的致病力和PCR测定的溶血素基因无必然联系,而溶血素基因与内化素基因阳性结果相同,Lm对多种抗生素敏感,其中对氨氨苄青霉素、头孢唑啉和环丙沙星敏感率为100%。     

温度及乳酸链球菌素对单增李斯特菌的抑制作用

通过Matlab软件拟合Gompertz生长模型,研究了温度对单增李斯特菌(Listeria.monocytogenes,LM)的影响;同时,研究了不同浓度(5、10、50、100、150μg/m L)、p H(1、3、5、7、9)、温度(45、75、95、115、121℃)条件下的乳酸链球菌素对LM杀菌活性的影响,旨在为LM的监控技术发展提供理论依据。结果表明:低温的抑制效果明显,最大细胞密度减少了4.3455 lg cfu/m L;乳酸链球菌素浓度低于5μg/m L时能促进LM的生长,高于10μg/m L时,对LM有一定的杀菌作用,高于150μg/m L时,48 h之内几乎可以杀死营养肉汤中的所有LM;乳酸链球菌素对酸性有协同效应;并有较好的热稳定性。