贻贝蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性研究

比较了6种不同的蛋白酶(胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶)对贻贝粗蛋白的酶解效果,确定碱性蛋白酶为最适用酶。用此酶制备不同水解度(DH 6%、DH 11.5%、DH16%、DH 20%、DH 25%)的贻贝蛋白酶解物,考察不同DH酶解产物的抗氧化活性。试验结果表明:贻贝酶解产物具有较强的抗氧化活性,并呈一定的量效关系;当DH为25%时,贻贝酶解物对DPPH自由基、超氧自由基、羟基自由基的清除率最高,分别为77.4%、75.2%、43.4%,同时具有最强的金属螯合率(64.7%);而DH为16%时,酶解物对亚油酸的过氧化抑制作用较还原型谷胱甘肽强,达65.6%。DH对酶解产物的抗氧化活性有一定的影响,但在不同的抗氧化体系中,影响趋势不一致。     

鲬鱼肉酶解物抗氧化活性的研究

深度开发利用鲬鱼蛋白,以羟自由基清除率为指标,从碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中,筛选出碱性蛋白酶为其水解酶。采用单因素试验及响应面分析法对碱性蛋白酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:加酶量3 000 U/g蛋白、pH 9.0、温度40℃、时间180 min、固液比1∶30(g/mL),清除率为89.49%。酶解物清除羟自由基的IC_(50)值为0.58 mg/mL,表明鲬鱼酶解物是具有良好的抗氧化作用的天然抗氧化剂。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

2种鸡肉蛋白源酶解产物抗氧化活性研究

以鸡肉盐溶蛋白和肌纤蛋白为原料分别制备的酶解物EP1和EP2,对其分子量分布、游离氨基酸,以及还原力、·OH自由基、O_2~-·自由基和DPPH·自由基清除力等抗氧化活性进行分析。研究结果显示EP1和EP2分子量均在5000以下,其分子量介于180～1000u的组分分别为66.32%和54.74%,寡肽含量达57.79%和47.70%。游离氨基酸分析结果显示除20种常规氨基酸,EP1和EP2还含有多种非常规氨基酸,如γ-氨基丁酸、牛磺酸、肌肽、磷酸丝氨酸等;另外,碱性氨基酸(26.01%和29.43%)和疏水氨基酸(38.00%和32.88%)含量均较高。EP1和EP2均具有较强的总还原力、·OH自由基清除能力、O_2~-·自由基清除力和DPPH·自由基清除能力,也就是同时具有供电子体和供氢体清除自由基的能力。EP1和EP2的高抗氧化活性是由寡肽及氨基酸共同作用的结果。     

鲶鱼骨酶解物抗氧化活性及其稳定性研究

探讨鲶鱼骨酶解物体外抗氧化活性及其抗氧化稳定性。测定不同浓度酶解物对羟自由基(.OH)、H2O2和超氧阴离子自由基(O2-)的清除效果,观察其抗氧化活性及其剂量效应关系;将酶解物溶液进行不同pH、温度、微波以及紫外光照射处理,观察其抗氧化活性的变化。结果表明:在试验浓度下,酶解物对.OH、H2O2和O2-均有较强的清除能力,其清除作用随着酶解物浓度的增加而增强,清除作用的IC50分别为6.47、15.96、12.50 mg/mL;在pH2~9范围内、80℃~121℃加热条件下,以及20 min~120 min紫外线照射和0 min~5 min微波处理时,酶解物的总体抗氧化活性变化不大。鲶鱼骨酶解物具有较强的抗氧化作用且抗氧化活性基本稳定。     

罗非鱼肉蛋白酶解液的抗氧化活性

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、罗非鱼胃蛋白酶和罗非鱼肠蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究并比较不同酶对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化特性。结果表明:7种酶的酶解液都显示了一定的抗氧化性,其中木瓜蛋白酶酶解液水解度(DH)最高,为20.85%,对DPPH自由基、O2-.清除率均最佳,分别为75.74%、34.35%;罗非鱼胃蛋白酶酶解液的DH为17.03%,对.OH清除率和还原力均最高,分别为60.51%、0.653。整体的抗氧化性能显示:罗非鱼胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解罗非鱼肉蛋白得到的酶解液的抗氧化活性优于其他酶。     

大米蛋白的木瓜酶酶解及其水解物的抗氧化活性

以大米蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性.选取底物浓度、加酶量、酶解pH、酶解温度为考察因素,进行了酶解工艺的单因素及正交试验.试验结果表明,底物浓度([S])10%,加酶量([E] /[S])5%,酶解pH 6.0,酶解温度60℃,酶解时间90 min为最佳酶解参数,在此条件下大米蛋白水解物的固形物含量为25.6mg/mL,对DPPH自由基清除率为54.5%.抗氧化试验显示,大米蛋白水解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,其IC50分别为1.738和0.238mg/mL.大米蛋白水解物同样也具有较强的还原能力.由此得出,大米蛋白水解物是一种天然的抗氧化肽.     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。      

鸡肉蛋白的酶解及其抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析法对酶解鸡肉蛋白制备抗氧化肽的工艺进行优化。在单因素试验的基础上,以还原能力和超氧阴离子自由基清除率为指标,研究酶解时间、加酶量、温度对木瓜蛋白酶酶解鸡肉蛋白的酶解液抗氧化性的影响。结果表明,酶解鸡肉蛋白制备抗氧化肽的工艺条件为pH6.0、液固比2:1(mL/g)、酶解时间6.15h、加酶量1200U/g、温度51.2℃,此时还原能力达到0.802,超氧阴离子自由基清除率达到73.9%。     

乳清蛋白水解物抗氧化活性的研究

本实验主要研究了乳清蛋白的碱性蛋白酶水解产物在不同体系中的抗氧化活性。通过测定水解物对卵磷脂脂质氧化体系的硫代巴比妥酸值(TBARS)抑制作用、过氧化值(PV)的抑制作用、亚铁还原能力、金属离子螯合能力、DPPH 自由基清除能力,研究乳清多肽的抗氧化活性。结果表明,底物浓度为5%、蛋白酶量的添加量为2%、水解时间为5h 时乳清蛋白的水解物具有最强的抗氧化能力;碱性蛋白酶制备的乳清蛋白水解物的抗氧化能力与底物浓度、水解时间、溶解度等有关。     

乳清蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究在不同的酶种类、[E/S]、酶解时间下,乳清蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,在胃蛋白酶37℃,[E/S]为0.15%,水解温度水解时间2 h;胰蛋白酶[E/S]为0.4%,水解温度50℃,水解时间2 h的条件下,乳清蛋白的酶解物有较强的抗氧化活性。     

基于乳清蛋白粉水解产物抗氧化活性优化酶解工艺

通过提高乳清蛋白粉水解产物(Whey protein powder hydrolysate,WPPH)的抗氧化活性,对乳清蛋白粉的酶解工艺进行优化。首先以WPPH水解度及抗氧化活性(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化能力)为指标,从4种蛋白酶中筛选得到酶解效果较好的胰蛋白酶和菠萝蛋白酶。然后通过单因素与正交试验确定双酶协同水解乳清蛋白粉的最适酶解条件。结果表明:复合酶最优酶解条件为菠萝蛋白酶和胰蛋白酶以1:1的比例同时添加,pH6.0、温度50℃、酶底比0.3%、底物浓度3 g/100 mL、酶解时间2.5 h,在此条件下WPPH水解度达到34.24%,分子量低于1000 Da的肽段占比在50%以上,DPPH自由基清除率91.42%±0.51%、羟自由基清除率80.85%±0.47%、总抗氧化能力(46±0.65)μmol/L。在本研究确定的酶解工艺条件下,乳清蛋白粉水解产物具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

糯米酶解工艺以及抗氧化活性研究

使用4种蛋白酶水解白糯米,以羟自由基清除率作为指标,选取中性蛋白酶作为水解用酶。考察了蛋白质底物浓度、酶添加量、酶解温度、初始pH 4种因素对于中性蛋白酶糯米酶解液羟自由基捕获能力的影响。在单因素实验基础之上,使用L9(34)正交优化试验设计,确定酶解液具有最高抗氧化能力的酶解工艺条件。优化后的工艺参数为底物浓度2%,酶添加量24 000 U/g(以蛋白质计),酶解温度55℃,pH8,作用时间0.5 h。在该条件下羟自由基清除率平均值可达56.05%。底物浓度、酶添加量、温度以及pH 4种因素对于羟自由基(.OH)清除率差异影响均极显著。糯米酶解液中的抗氧化肽等成分在60℃～100℃的温度范围内活性保持很好。     

乳清分离蛋白水解物对猪肉糜抗氧化作用的研究

研究乳清分离蛋白(WPI)的碱性蛋白酶(alcalase)水解物的抗氧化能力,并将其应用于生肉糜中研究其抗氧化效果。实验分为6组,第1组为对照组,第2组加入2.0%的WPI未水解物,第3～5组中分别加入1.0%、1.5%、2.0%的水解物冻干粉(5h),第6组中加入0.02%的BHA,在冷藏过程中测定肉糜的红度值(a*)、硫代巴比妥酸值(TBARS)值、pH值、高铁肌红蛋白(MetMb)含量,并对产品的感官指标进行评定。结果表明,在贮藏7d内,与对照组相比,添加WPI水解物处理组能够显著抑制生肉糜脂肪的氧化(P<0.05),其中2%WPI水解物处理组效果最明显,能显著降低TBARS值、增加肉糜的红度值(a*)(P<0.05),且其高铁肌红蛋白(MetMb)含量仅为对照组的79%,与添加BHA处理组的水平相当。同时,WPI水解物处理组抑制脂肪的氧化效果比WPI未水解组好。因此,WPI水解物可以有效的抑制食物中脂肪氧化,且其抗氧化效果与水解物的使用量相关。     

鲤鱼鳞酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究

为得到高抗氧化活性的鲤鱼鳞胶原蛋白酶解液,试验以羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2-·）清除率作为主要检测指标,通过单因素试验研究酶解温度、pH值、加酶量、底物浓度、酶解时间对鱼鳞胶原蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。在此基础上,采用响应面分析法对酶解工艺条件进行优化。得到试验最优工艺为酶解时间4.4 h,酶解温度66.0℃,pH8.5,底物浓度20 mg/mL,加酶量4%。在此条件下,酶解液的·OH清除率为80.24%,O2-·清除率为65.34%,亚铁离子（Fe2＋）螯合能力为59.73%。对比常用抗氧化剂,在O2-·清除能力方面,酶解液效果低于丁基羟基茴香醚（butylated hydroxyanisole,BHA）和抗坏血酸（P＜0.05）,但在·OH清除能力方面,酶解液已达到BHA和抗坏血酸的水平（P＞0.05）,在Fe2＋螯合能力方面,酶解液显著优于BHA和抗坏血酸（P＜0.05）。     

鲤鱼蛋白控制酶解及其酶解产物抗氧化研究

以鲤鱼为原料,利用枯草杆菌蛋白酶对鲤鱼蛋白进行控制酶解,制取富含多肽的酶解液,并对其抗氧化性进行研究。以水解度、多肽含量、氨基酸含量、抗氧化性为指标,对自由基清除率评价其抗氧化性。通过单因素试验,研究酶解温度、pH值、酶用量、酶解时间、料液比等因素对酶解过程的影响,并进行三元二次回归设计,对最佳的酶解工艺条件进行优化。结果表明：以枯草杆菌蛋白酶对鲤鱼蛋白进行酶解,最佳工艺参数为酶解温度62℃、酶用量100U/g、料液比1:2(g/mL)、pH7.0、酶解4h。此条件下,酶解液多肽含量为0.704mg/mL,对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除率分别为73.41%和59.78%,酶解液有很好的抗氧化性。