米曲霉降解氯氰菊酯农药的条件优化

以分离自酱油曲中对氯氰菊酯具有较高耐受性和降解能力的米曲霉J-3为研究对象,采用Plackett-Burman法考察了环境因素对米曲霉降解氯氰菊酯效果的影响,利用响应面分析法对其降解条件进行了优化。结果表明,环境因子对其降解效果有很大的影响,其中培养基加水量、初始pH及培养温度为主要影响因素。验证实验显示,当固体培养基加水量为44.6%(w/w)、初始pH为6.9、氯氰菊酯浓度为200μg/g、250mL锥形瓶装载量为15g、米曲霉J-3孢子悬液接种量为10%(v/w,浓度为107cfu/mL)、29.6℃培养6d时,米曲霉对氯氰菊酯的降解率可达到45.62%。     

传统发酵豆酱高β-葡萄糖苷酶活力制曲工艺研究

在豆酱制曲工艺中,利用高产β-葡萄糖苷酶的米曲霉进行发酵,通过单因素试验和正交试验确定制曲优化条件为大豆浸泡4 h,121℃蒸煮15 min,32℃下制曲,每100 g大豆接入5×108CFU/mL的米曲霉菌液1 mL,制曲时间84 h.最佳条件下β-葡萄糖苷酶湿基酶活力385.775 UI/g,干基酶活力537.86 UI/g.     

米曲霉产3-苯氧基苯甲酸降解酶条件及酶性质的研究

3-苯氧基苯甲酸是绝大多数拟除虫菊酯类农药的降解中间产物。以对3-苯氧基苯甲酸具有较强耐受性和较高降解能力的米曲霉M-4为实验菌株,考察了不同培养条件对该菌株产3-苯氧基苯甲酸降解酶活力的影响,并且分析了该降解酶的酶学性质。结果表明,当15 g固体培养基的初始pH为6.5、3-苯氧基苯甲酸浓度为150μg/g、接种量为2.25 mL(孢子悬浮液浓度约为107cfu/mL)时,30℃培养120 h,提取得到的3-苯氧基苯甲酸降解酶的活力最高,为53.42 U;该降解酶作用的最适pH和最适温度分别为7.0和30℃,酶的稳定pH和稳定温度范围分别为5.5～7.0和5～30℃。     

响应面法优化米曲霉液体发酵生产中性蛋白酶工艺

为提高米曲霉（Aspergillus oryzae）液体发酵生产中性蛋白酶的能力,采用单因素试验、Plackett-Burman（PB）试验筛选碳源、氮源和无机盐,并通过响应面法优化其最佳配比,提高米曲霉液体发酵生产中性蛋白酶的活性。结果表明,米曲霉液体发酵生产中性蛋白酶的最佳碳源、氮源和无机盐分别为玉米粉、牛肉膏和氯化钙,发酵的最优条件为玉米粉添加量17 g/L,牛肉膏添加量10 g/L,氯化钙添加量0.04 g/L,接种量5%,装液量60 mL/250 mL,于30 ℃条件下发酵84 h。在此优化条件下,产生的中性蛋白酶活性从最初的21.4 U/mL提高至110.5 U/mL。     

响应面法优化米曲霉降解黄水的营养条件

酒厂黄水中含有大量的有机物质,如直接排放会造成资源浪费和环境污染。米曲霉CGMCC5992能有效降解黄水中的有机物质。为提高其降解效率,采用单因素试验,选择影响米曲霉降解黄水的重要营养因素。并采用3因素3水平的Box-Behnken试验设计,以COD为响应值进行响应面分析,优化米曲霉降解黄水的营养条件。结果表明,最优培养基组成为10%黄水中添加0.3g/L尿素,20.73mg/L ZnSO4和19.79mg/L VB6;此条件下,在发酵第5d黄水COD值可降至323mg/L。试验证明优化后黄水的COD显著降低。     

米曲霉液态发酵香菇残次品产蛋白酶条件优化

为了充分综合利用香菇资源，该研究以米曲霉（Aspergillus oryzae）为发酵菌种，对香菇残次品进行液态发酵，以蛋白酶活为响应值，采用单因素试验和响应面法优化米曲霉产蛋白酶发酵条件。结果表明，米曲霉产蛋白酶的最优发酵条件为发酵时间3 d、料液比1∶10（g∶mL）、初始pH值6.5、转速175 r/min，在此优化条件下，蛋白酶活力为1 182.48 U/mL。     

高产柚苷酶菌株米曲霉的诱变育种及发酵条件优化

以土样中筛选的1株产胞外柚苷酶菌株米曲霉11250为出发菌株,采用紫外诱变、亚硝酸钠化学诱变及紫外-亚硝酸钠复合诱变3种方法进行诱变育种,通过透明圈初筛以及液体摇瓶发酵复筛,最终选育出1株胞外柚苷酶产酶活力较高的突变菌株UN2,该菌株产胞外柚苷酶活力达147U/mL,为原始菌株的2.3倍,经5代传代,其产酶能力稳定在(147±0.8)U/mL。采用单因素试验和响应面设计Box-Behnken design试验相结合的方法进行产柚苷酶的摇瓶发酵培养基配方优化,对影响菌株UN2发酵产酶的碳源、氮源、培养基初始pH、温度等条件做单因素试验和响应面法试验。结果表明:该菌株的最佳产酶条件:麦芽糖2.0 g/100 mL,牛肉蛋白胨3.0g/100 mL,初始pH 5.7,培养温度30℃。在此条件下,柚苷酶活力达到251 U/mL,是未优化前的1.7倍。结论 :通过培养基优化,大幅度提高了米曲霉11250液体发酵产柚苷酶的酶活力。     

米曲霉Y-15利用农业废弃物产氨肽酶条件的优化

试验以农产品加工废弃物为主要原料,采用响应面法对1株高产氨肽酶的米曲霉Y-15固态发酵产酶条件进行优化。应用Plackett-Burman试验筛选出三个重要影响因子:麦麸、豆粕和水,中心组合响应面试验对重要影响因子进一步优化,最终确定产酶培养条件为麦麸179.8 g,豆粕为191.6 g,水的添加量为386 g,在此条件下,氨肽酶的酶活力达到2 879.67 U/g。该米曲霉的培养基成分为农业加工废弃物,极大降低生产成本,具有一定的生产研究价值。     

碳源对米曲霉M-4共代谢降解3-苯氧基苯甲酸的影响

以通过共代谢方式对3-苯氧基苯甲酸具有较强生物降解能力的米曲霉M-4为实验菌株,考察了碳源对该菌株降解3-苯氧基苯甲酸的影响,分析了该菌株降解3-苯氧基苯甲酸的动力学特征。结果表明,淀粉、葡萄糖、果糖、核糖和琥珀酸均利于共代谢过程中米曲霉M-4的生长;当适宜碳源葡萄糖的添加量为5.0 g/L时,该菌株在4 d时可完全降解含量为100μg/mL的3-苯氧基苯甲酸,其降解速率常数(k)和半衰期(T_(1/2))分别为6.13 d~(-1)和2.32 d。     

产辅酶Q10的米曲霉原生质体制备条件研究

为了提高辅酶Q10的产生菌米曲霉菌的基因组改组育种效率,以提高辅酶Q10的产量,本试验对米曲霉原生质体的制备条件进行了研究。通过对影响制备效果的条件,即米曲霉的菌丝菌龄、酶解温度、时间和原生质体稳定剂的浓度四个因素进行全面优化,并利用正交试验确定了原生质体制备的适宜条件:菌龄为12h、原生质体渗透压稳定剂NaCl浓度为0.85mol/L、酶解时间为3.5min、酶解温度为30℃时,米曲霉原生质体制备效果最好,所得原生质体为6.3×106个/mL,再生率达到38.06%。较高的原生质体生成量和再生率为该菌后序的基因组改组研究奠定了基础。     

米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因的克隆表达及酶学性质分析

根据NCBI(GenBank Accession No.:D83732.1)中注册的米曲霉内切葡聚糖酶CelB基因序列设计引物,以本实验室自行筛选的天然米曲霉基因组DNA为模板,PCR高保真扩增出内切葡聚糖酶基因eg,将其定向插入到酵母表达载体pPICZαA上,转化酵母宿主菌X33,刚果红水解圈筛选结果表明已成功表达。SDS-PAGE分析表明,表达产物分子量约为65 ku。对酵母表达工程菌X33-eg进行发酵条件优化,结果显示最适甲醇诱导浓度为0.75%,用1 L三角瓶诱导培养5天达到最高酶活120 U/mL。对重组酶的酶学性质分析表明,其最适反应pH值和温度分别为pH4.0和45℃,在30～45℃和pH3.4～pH6.9范围内可保持内切葡聚糖酶最高酶活力70%以上。     

高温混菌发酵生产果胶酶的研究

为了降低底物抑制效应,提高黑曲霉产果胶酶的能力,在黑曲霉发酵过程中引入酒精酵母,成功构建了黑曲霉GJ-2与酒精酵母J-1混菌发酵生产果胶酶的体系,确定了酒精酵母的最佳接入时间和最佳接入量分别为12h和5mL/50mL,并对其产酶条件进行响应面优化,实验中发现高温对产酶有促进作用,确定最佳产酶条件为:橙子皮29.3g/L,麸皮30.0g/L,硫酸铵11.8g/L,吐温-802.0g/L,发酵温度34.1℃,在此条件下果胶酶酶活为188.12U/mL,比黑曲霉单一体系发酵生产果胶酶提高了63.6%。     

同步糖化淀粉质原料高产L-苹果酸菌株的选育

本研究选育了一株高糖化酶活性且传代稳定的突变株,在不添加商品糖化酶的情况下,可以通过对脱胚玉米粉的糖化发酵生产苹果酸。以Aspergillus oryzae(米曲霉)ME303为出发菌株,经ARTP诱变,2-脱氧葡萄糖(2-DG)筛选压力诱变处理,并通过比较原始菌株和诱变菌株的糖化酶活力和代谢特征,获得一株性能稳定的糖化酶活力较高的L-苹果酸生产菌株A. oryzae SS3,当粗淀粉质原料——脱胚玉米粉作为单一碳源时,30 ℃、150 r/min摇瓶发酵96 h后,糖化酶表现出较高的活力,为320.0 U/mL,与原始菌株相比(220.0 U/mL),酶活增加了45.45%,发酵后191 h,A. oryzae SS3菌株同步糖化发酵产苹果酸达到41.39 g/L,与原始菌株相比(33.98 g/L)提高了21.80%,为目前报道的利用淀粉质原料生产苹果酸且酶活性较高的米曲霉突变菌株,可进一步降低生产成本。     

菌种接种方式对黄豆酱品质的影响

以沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉、AS 3.324甘薯曲霉、沪酿3.130毛霉、AS 3.972红曲霉、米根霉和枯草芽孢杆菌为菌种进行制曲、发酵,通过测定发酵7 d后蛋白酶活力和氨基酸态氮含量,研究单菌种制曲发酵、曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵方式对黄豆酱品质的影响。结果表明:曲料混合发酵产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量效果最好,其次为多菌种混合制曲发酵和单菌种制曲发酵。曲料混合发酵和多菌种混合制曲发酵中,2菌种和3菌种组合产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量整体较高,其中曲料混合发酵5号(沪酿3.042米曲霉、AS 3.35黑曲霉和枯草芽孢杆菌)产蛋白酶活力和氨基酸态氮含量最佳,分别达到713 U/mL和0.89 g/100 g。研究发现,沪酿3.042米曲霉成曲、AS 3.35黑曲霉成曲和枯草芽孢杆菌成曲按照曲料混合发酵方式接种更有利于得到品质较优黄豆酱。     

非对称灭活双亲原生质体融合法选育产果糖基转移酶的米曲霉新菌株的研究

本文以生产果糖基转移酶的米曲霉SBB201(Aspergillus oryzae SBB201)为出发菌株,通过紫外联合氯化锂诱变获得产酶性能与生长性能各自优良的米曲霉菌株UV-A与UV-B,采用非对称灭活法对这两株菌株的原生质体进行紫外以及热灭活双灭活,然后在PEG作为融合剂的介导下进行原生质体双亲融合,筛选出一株果糖基转移酶生产能力有较大提高的米曲霉新菌株,其酶活力达到了172.95 U/g,比出发菌株提高了64.57%。     

微波-紫外灭活原生质体融合选育米曲霉菌株的研究

实验对生长速度较快但产酶能力较低的米曲霉CICC2339的原生质体采用700W微波灭活12s,对产酶能力较高但生长速度较慢的米曲霉AS3.951的原生质体采用15W紫外灭活5min,然后对灭活双亲用PEG作融合剂进行原生质体融合,融合率达到了7.6%。通过测定Hc值以及蛋白酶活力大小,最终筛选出编号为CAW202、CAW205和CAW210的三株融合株,其生长速度快且蛋白酶活力还高于产酶能力较高的亲本菌株CICC2339;三株融合株的蛋白酶活力分别为10450U/g、9730U/g、10780U/g,其中融合株CAW202和CAW210的蛋白酶活力比亲本菌株CICC2339有了显著的增加,分别提高了7.8%和11.25%。     

米曲霉3.951菌株与RIB40菌株高产原生质体的制备及再生条件的研究

针对2株米曲霉进行原生质体制备条件的研究,比较了制备材料、菌龄、渗透压稳定剂、复合酶配比、酶解时间以及酶解温度对米曲霉原生质体形成和再生的影响。结果表明,2株米曲霉原生质体制备的最适宜条件稍有差异,其中米曲霉3.951菌株原生质体制备和再生的适宜条件是:以菌丝为制备材料,菌龄为14 h,渗透压稳定剂为0.8 mol/L NaCl,复合酶配比为1.0%纤维素酶、1.0%裂解酶、0.l%蜗牛酶,酶解时间为3 h,酶解温度为35℃;米曲霉RIB40的适宜条件是:以菌丝制备材料,菌龄为12 h,渗透要稳定剂为0.8 mol/L NaCl,复合酶配比是为1.0%纤维素酶、1.0%裂解酶、0.l%蜗牛酶,酶解时间为3 h,酶解温度是35℃。在优化条件下米曲霉3.951菌株释放的原生质体达6.43×107个/g,再生率可达23.5%,米曲霉RIB40释放的原生质体可达4.24×107个/g,再生率达22.41%。     

酱油多菌种制曲改善酶系组成的研究

通过对米曲霉3.042、黑曲霉3.350、根霉3.010进行混合制曲试验,以蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶为指标,研究不同比例、制曲温度、制曲时间对复合菌种酶活力的影响.结果表明,三菌种米曲霉3.042、黑曲霉3.350、根霉3.010的比例为3:2:0.5,制曲温度36℃,制曲时间48h,在此条件下,制曲酶系丰富,酶活力高...     

木聚糖酶高产突变菌株——黑曲霉AN497的正交试验研究

黑曲霉 (Aspergillusniger)A3经离子注入后选育出高产木聚糖酶突变株AN497,通过摇瓶液态发酵产酶培养基的L16 ( 4 4)正交实验 ,得到了优化的培养基配方 (g/L) :玉米芯粉 80 ,蔗糖 6,复合氮源 (NH4 )SO4 +NaNO3(质量比为 1∶2 ) 1 2 ,吐温 2 0 3 ,用无氮的Mandels氏无机盐溶液配制。同时对产酶菌株的发酵过程进行了试验 ,发酵 84h达产酶高峰 ,木聚糖酶活力可达 646IU/mL ,比培养基未优化前 ( 5 84 8IU/mL)提高了 1 0 5 %。