PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

miR-148a / b 真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达简

目的构建miR-148a／b真核表达质粒,转染胰腺癌AsPC-1细胞,并观察其miR-148a／b的表达水平。方法根据miRBase提供的序列合成miR-148a／b前体,PCR扩增后形成双链,插入线性化真核表达质粒pcDNA3．1,构建pcDNA3．1／miR-148a／b,进行酶切和测序鉴定。将胰腺癌AsPC-1细胞分4组进行质粒转染：转染pcDNA3．1／miR-148a（miR-148a组）、转染pcDNA3．1／miR-148b（miR-148b组）、转染pcDNA3．1（空质粒对照组）和仅加脂质体（空白对照组）。转染48h后,采用定量PCR法检测各组细胞中miR-148a／b的表达量。结果pcDNA3．1／miR-148a／b的酶切和测序与miRBase提供的序列完全一致。转染48h后,miR-148a组AsPC-1细胞中的miR-148a表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（6．76±0．35比1．00±0．54、1．02±0．40,均P〈0．05）,miR-148b组AsPCq细胞中的miR-148b表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（3．28±0．08比1．02±0．35、1．01±0．28,均P〈0．05）。结论成功构建了miR-148a／b真核表达质粒pcDNA3．1／miR-148a／b,该质粒能显著上调胰腺癌AsPC-1细胞的miR-148a／b表达水平。     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达

目的探讨RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法采用http：//www.ncbi.nl m.nih.gov/及DNAstar软件对80例胃癌（胃癌组）及相对应的癌旁组织（对照组）标本RASSF1-A基因和RASSF1-C基因进行生物信息学分析。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测2组组织及胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中RASSF1-A mRNA、RASSF1-C mRNA相对表达量。结果经RT-PCR扩增后,RASSF1-C mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.62±0.07、0.66±0.08RASSF1-A mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.23±0.10、0.58±0.07,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1-A mRNA在对照组组织中相对表达量为0.81±0.07,显著高于胃癌组0.31±0.03,差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1-C mRNA在胃癌组组织中相对表达量为0.87±0.04,对照组组织中相对表达量为0.84±0.03,2组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 RASSF1-A、RASSF1-C基因在胃癌组织中的表达下调。     

γ射线诱导下PUMA基因在人前列腺癌细胞中的作用

目的研究在γ射线诱导下PUMA基因（p53up—regulated modulator of apoptosis）在人前列腺癌细胞（p53野生型LNCaP细胞、p53变异型PC-3细胞）中的作用效果。方法采用MTT方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下人前列腺癌细胞的抑制率;采用RT-PCR的方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下PUMA基因的表达情况。结果在γ射线诱导下LNCaP细胞抑制率较PC-3细胞抑制率高（P〈0．01）;随γ射线照射剂量的增加,LNCaP细胞中PUMA-mRNA的表达越明显（P〈0．05）。结论γ射线诱导下PUMA基因可促使人前列腺癌LNCaP细胞凋亡。     

ARHI基因与HuR蛋白在胰腺癌PANC-1细胞中的表达

目的观察ARHI基因转染胰腺癌PANC-1细胞后对HuR蛋白的影响。方法采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒p LNCX2-ARHI-EGFP和空载体p LNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC-1细胞,细胞分为3组:实验组(p LNCX2-ARHIEGFP)、空载体转染组(p LNCX2-EGFP)和PANC-1细胞空白对照组,用G418筛选稳定转染的细胞株;采用PCR和Western blot方法检测ARHI基因表达,采用Western blot方法检测HuR蛋白表达。结果稳定转染ARHI基因组可检测到ARHI基因mRNA和蛋白的表达。根据图像灰度计算蛋白条带相对表达量,稳定转染ARHI基因组HuR蛋白表达(0.2226±0.0644)较空载体对照转染组(0.4063±0.0925,P=0.029)和PANC-1细胞空白对照组(0.4178±0.1319,P=0.022)显著降低。结论 ARHI基因可以导致胰腺癌细胞株中HuR蛋白表达降低。     

猫人参含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖和自噬的影响

目的:观察猫人参对胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用及对自噬的影响。方法:体外培养胃癌SGC7901细胞,用不同体积分数的猫人参含药血清处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62及mTOR表达水平。结果:猫人参含药血清作用24 h,对胃癌SGC7901细胞有明显的抑制作用,与空白血清组比较,猫人参含药血清组体积分数为0. 156 25%时,差异有统计学意义(P <0. 05),且随着体积分数的增大,抑制作用增强,呈剂量依赖性;作用48 h,与空白血清组比较,猫人参含药血清在体积分数<2. 5%时对胃癌SGC7901细胞有稍微促进增殖作用,在体积分数≥5%时有抑制增殖作用,体积分数≥10%时,差异开始有统计学意义(P <0. 05)。Western blot结果显示:与空白血清组比较,猫人参含药血清能促进胃癌SGC7901细胞LC3B蛋白表达,抑制p62、mTOR蛋白表达(P <0. 05)。结论:猫人参含药血清能抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,其作用机制可能与猫人参能调节LC3B、p62、mTOR蛋白的表达,影响自噬相关。     

藤梨根制剂对胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9和SDF-1表达的影响

目的:通过观察藤梨根制剂对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达的影响,探讨藤梨根制剂的抗胃癌机制。方法:分别采用0 g·L~(-1)、15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂处理胃癌SGC-7901细胞,分别处理12 h、24 h、48 h、72 h,采用噻唑蓝比色法(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白表达水平。结果:MTT检测结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);细胞划痕实验结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显降低胃癌SGC-7901细胞迁移能力,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,且呈现一定剂量依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白水平表达,且呈现一定剂量依赖性。结论:藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为下调胃癌细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1表达。     

温胆汤治疗肿瘤相关胃肠道反应的机制研究

目的：观察温胆汤对荷瘤小鼠的胃肠道5-羟色胺和嗜铬细胞分泌的影响。方法皮下注射 Colon-26腺瘤建立小鼠荷瘤模型。将32只小鼠随机分为温胆汤组和荷瘤对照组。在第7、14天用高效液相色谱法测定小肠中5-羟色胺的含量,用免疫组化法检测嗜铬细胞的密度。并观察每组小鼠的摄食量。结果正常小鼠第1周和第2周小肠的5-羟色胺含量分别为（1．57±0．09）μg·g-1和（1．54±0．11）μg·g-1,而接种肿瘤细胞后的小鼠分别为（2．93±0．17）μg·g-1和（3．99±0．32）μg·g-1,显著高于正常小鼠。而温胆汤组则分别降到（2．03±0．17）μg· g-1和（3．05±0．17）μg·g-1,显著低于荷瘤对照组,2组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。免疫组化显示小肠中嗜铬细胞在肿瘤细胞移植后的第1周和第2周显著增加,而服用温胆汤的小鼠小肠嗜铬细胞数量明显降低,2组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。在第14天,荷瘤组小鼠和温胆汤组小鼠的平均食量分别为（0．70±0．12）g和（1．12±0．04）g,2组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论温胆汤可以通过减少肿瘤患者肠道嗜铬细胞数量和5-羟色胺含量而减轻肿瘤相关胃肠道反应。     

布地奈德对慢性鼻-鼻窦炎术后鼻黏膜组织重塑及转化生长因子β1表达的影响

目的：观察布地奈德对不伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎（CRSsNP）术后黏膜组织重塑及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法30例行鼻内镜手术的 CRSsNP 患者术后按随机数字表法分为2组,20例术后应用布地奈德喷鼻（激素组）,10例术后未使用糖皮质激素（对照组）。术后第3个月复查时取筛区黏膜标本。所有标本分别进行 HE 染色、Masson 三色（Masson trichrome,MT）胶原染色及苦味酸-天狼星红染色,观察黏膜上皮损伤、基底膜增厚、细胞外基质（ECM）胶原沉积及成分等情况;免疫组织化学检测黏膜中 TGF-β1的表达情况。结果激素组上皮细胞损伤比对照组明显减轻（P ＜0．05）,基底膜厚度减少[（7．62±2．83）μm 比（12．17±4．34）μm,P ＜0．01];激素组黏膜固有层内蓝色胶原所占面积百分比为（7．41±1．93）％,明显少于对照组的（18．54±6．37）％,（P ＜0．01）,沉积的胶原以Ⅰ型胶原为主,Ⅲ型、Ⅳ型胶原较少;激素组鼻黏膜 TGF-β1表达较对照组明显减少（138．78±5．24比165．58±7．62,P ＜0．01）。结论及时应用布地奈德能在一定程度上抑制 CRSsNP 术后鼻黏膜组织重塑,降低 TGF-β1的表达可能是其中机制之一。     

住宅的多样性——日本集合住宅的借鉴

以西安目前住宅市场发展的现状及其存在的弊端为例 ,说明我国目前住宅需求的多样化和设计手法的单一化之间的矛盾 ,论述了与我国有着相似文化背景的日本在解决不同住宅需求时采用形式多样、功能各异的集合住宅的理念 .试图以此借鉴 ,使我国建筑设计界了解日本集合住宅的发展演变过程 ,吸取他们的经验 ,为我们在住宅多样化研究和设计时提供一种不同的思路和方法 .     

江南园林意蕴之现象学体验

从现象学的角度,以体验者的观察感知与舒尔茨的建筑现象学理论相互博弈,逐步展示江南园林的点点滴滴意蕴,规避对造园具体手法的详细认知,由体验出发,结合现象学理论,再辩证地回归园林体验,以实现对江南园林意蕴本质感知.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

南京郊区化水平评价

在界定郊区和郊区化概念的基础上，主要从工业和人口两方面对南京的郊区化水平做出评价．通过分析，以期能对南京郊区化的发展有一个整体的全新认识，从而有助于新时期南京市的城市规划和管理工作的顺利展开。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

变压器铁芯接地智能保护的实现原理

为了预防电力变压器运行过程中因铁芯多点接地导致接地电流超标而造成的铁芯发热故障,提出了一种新的变压器铁芯接地智能保护原理,并通过对变压器铁芯接地电流的实时监测,在检测到接地线电流超过国家标准后采取自动启动限流装置的措施,实现将接地电流限制在规程要求的范围之内,并对电气设备状态进行在线检修、评估、预警和风险分析,从而达到防患于未然的目的。     

镇江市大市口广场设计构思浅析

通过对镇江市大市口广场总体设计布局及功能分区设计构思的分析,强调城市广场功能的多样性,以满足不同阶层人们的娱乐、休闲及活动,以人的需求为准则,体现“以人为本”的设计原则。     

关于运城市区排水的思考

通过了解运城市区的气候特征、地表水含量及排水现状,总结出市区排水工程存在的主要问题,并提出了市区排水工程规划思路,以期建设一个功能齐全、配套完善的市区排水系统,实现市区洪水、雨水、污水的安全有序排放。     

边坡加固中锚索框架的应用与锚索预应力损失

以锚索框架为研究对象,讨论了锚索框架支护技术在边坡治理中的重要作用,介绍了框架形式,阐述了锚索预应力损失的影响因素,包括锚索材料,岩体条件,张拉器具和工序,外界自然条件和人工作业因素等,以指导实践。     

隧道洞口仰坡失稳病害整治

针对隧道施工过程中洞口仰坡出现裂纹、失稳并导致洞口上导坑初期支护出现裂缝的病害,结合工程实践,分析了隧道洞口仰坡失稳的原因,介绍了仰坡失稳病害整治处理的技术方案及其施工效果.