VEGFC基因rs17697515（C>T）位点多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的:研究血管内皮生长因子C(VEGFC)基因单核苷酸多态性位点rs17697515与妊娠期糖尿病(GDM)发病风险的相关性。方法:选择2015年5月-2018年4月于深圳市罗湖区人民医院妇产科就诊的224例孕妇为研究对象,其中GDM孕妇106例(GDM组),健康孕妇118例(对照组)。分别收集两组孕妇的相关临床资料及实验室检测结果。检查两组孕妇身体质量指数(BMI),检测相关生化指标、计算出胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)。利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术,对两组孕妇VEGFC基因rs17697515位点进行基因分型,比较两组的基因型和等位基因频率,分析rs17697515多态位点与糖、脂代谢及相关临床指标之间的关系。结果:与对照组孕妇相比,GDM组孕妇的空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗水平(HOMA-IR)、空腹血清胰岛素(FIN)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白(LDL-C)浓度均显著升高(P<0.05);而胰岛β细胞功能指数(HCMA-β)、高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度均显著降低(P<0.05)。GDM组CC基因型频率为50.94%,显著高于对照组的34.75%(P<0.05)。利用Logistic多因素分析显示,VEGFC基因rs17697515位点CC基因型与GDM密切相关(RR=18.306,P=0.013)。CC基因型的BMI、FIN、FBG、HOMA-IR、TC、LDL-C及TG均高于CT和TT基因型(P<0.05);而CC基因型的HCMA-β和HDL-C均低于CT和TT基因型(P<0.05)。结论:VEGFC基因rs17697515位点CC基因型可能作为GDM的易感基因,在GDM发生发展过程中起作用,且与胰岛功能异常、脂肪代谢异常以及肥胖有关。VEGFC基因rs17697515位点多态性研究有助于揭示脂代谢异常、胰岛素抵抗与GDM发病的关系。     

精液液化相关基因单核苷酸多态性研究

目的:旨在发现2~3个与精液液化异常相关的前列腺特异性抗原(PSA)基因单核苷酸多态性(SNP)标记,为临床上及早确诊先天性精液液化异常提供一种新的诊断方法,为进一步研究精液液化不良的分子机制和治疗精液液化异常提供理论基础。方法:选择2015年1月1日-5月30日本院生殖中心就诊的100例男性患者,按照精液液化时间分为对照组和研究组各50例,以两组患者外周血DNA为模板,PCR扩增PSA基因的5个外显子后进行测序,通过软件对比分析测序结果,寻找两组PSA基因SNP位点。结果:PSA基因的5个外显子中,外显子2、外显子3有突变,其他外显子无突变;两组外显子2和3检出率比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组等位基因及其频率比较差异均无统计学意义(P>0.05);对照组的外显子2的基因型有CC、CT、TT,基因型频率分别为0、62.0%、36.0%,研究组的外显子2的基因型有CC、CT、TT,基因型频率分别为0、72.0%、28.0%,两组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:对照组和研究组精液的液化与PSA基因的这些突变无相关性,可能是PSA基因的这些突变未引起PSA蛋白表达的改变,引起精液液化异常的原因还有待进一步的研究。     

一起由桶装水污染引起的学校感染性腹泻暴发调查简

目的：探讨某学校一起学生感染性腹泻暴发的原因。方法采用描述性流行病学方法对疫情特点进行描述;运用11配对病例对照研究方法对腹泻发病因素进行分析;条件Logistic回归计算各危险因素的OR 值及其95％CI;采集可疑食物、桶装水、病人粪便和从业人员肛拭子等样品进行致病菌检测。结果喝学校桶装水学生发生腹泻的风险升高（OR＝7．68,95％CI：1．67～35．36）,而喝瓶装矿泉水与学生发生腹泻无关（OR＝2．47,95％CI：0．43～14．02）。1份桶装水和1份病例粪便标本中检出肠产毒性大肠埃希氏菌（LT毒力基因阳性）。结论本次疫情为一起由桶装水受大肠杆菌污染导致的腹泻暴发,可疑致病菌为肠产毒性大肠埃希氏菌。     

草鱼载脂蛋白A-I-1基因3'非编码区SNPs筛选及其与生长性状的关联分析

采用PCR产物直接测序法和PCR-RFLP法对草鱼EST文库中载脂蛋白A-I-1基因(Apoprotein A-I-1,apoA-I-1)3'非编码区进行SNPs筛选,在珠江水系草鱼Ctenopharyngodon idella养殖群体144个样本中发现2个SNPs位点。C792T位点的CC型占46.53%,CT型占50.69%,TT型占2.78%;G851A位点的GG型占77.08%,GA型占20.83%,AA型占2.08%。采用一般线性模型对2个SNPs位点与草鱼4个生长性状———体质量、体长、体高和头长进行关联分析,结果表明:C792T位点TT型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于CT型和CC型个体的生长性状指标值,但未达到显著水平(P>0.05);G851A位点GG型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于GA型和AA型个体的生长性状指标值,且GG型个体的体长和头长均值与GA型和AA型个体均存在显著差异(P<0.05)。将2个SNPs位点不同基因型组合成6种双倍型,关联分析结果表明,双倍型D3(TTC792T-GGG851A)个体的体质量均值最高,D6型(CCC792T-AAG851A)个体的体质量均值最低,且二者在体长、体高、头长均值间存在显著差异(P<0.05)。推测C792T位点TT型为有利基因型;G851A位点GG型为有利基因型,AA型为不利基因型。本研究结果为草鱼分子辅助育种提供了候选标记,为加快草鱼育种进程奠定了基础。     

饲养方式对苏尼特羊背最长肌miR-30a、miR-223、miR-128和miR-486表达及肉品质的影响

选择不同饲养条件下12月龄苏尼特羊的背最长肌为实验材料,通过测定4种miRNAs的表达量与肉品质,研究不同饲养方式对miRNAs表达量及肉品质的影响。结果表明,放牧苏尼特羊背最长肌嫩度高于圈养,而圈养红度值显著高于放牧(P<0.05)。圈养苏尼特羊背最长肌pH_2著高于放牧(P<0.05)。2种饲养方式下,4个miRNA均有表达,且放牧苏尼特羊背最长肌miRNAs基因表达量高于圈养。苏尼特羊miR-30a与红度值呈显著负相关(P<0.05)。不同饲养方式对miR-128、miR-486、miR-30a、miR-223的表达有影响,并进一步影响肉的品质。     

miR-140-5P 参与调控颈椎软骨终板退变

目的：探讨表达谱芯片初步分析 microRNA差异表达是否参与调控颈椎软骨终板退变。方法选择25例颈椎软骨终板退变、需要行手术治疗的患者为病例组,15例无椎间盘软骨终板退变患者为对照组。选取病例组2例和对照组2例标本进行microRNA芯片差异表达分析。然后采用miRCURYTM LNA 18．0表达谱芯片进行原位杂交,由 Axon GenePix 4000B microarray扫描仪采集芯片荧光值。芯片结果经病例组15例和对照组15例标本进行 Real-time PCR和Western blot验证。结果病例组发现22个上调和19个下调 microRNA。Real-time PCR验证：病例组miR-140-5P表达量低于对照组的3倍、miR-140-5P的靶基因 Adamts-5和 Dnpep的表达量分别高于对照组的3倍和3．5倍（均P＜0．05）。miR-140-5P 与 Adamts-5和 Dnpep 的 miRNA表达呈负相关（r＝-0．84、-0．76,均P＜0．05）。Western blot结果示：病例组软骨终板 Adamts-5和 Dnpep的蛋白表达分别为0．66±0．46和0．57±0．32,均高于对照组软骨终板的0．22±0．06和0．26±0．08（均P＜0．05）。结论本研究首次报道了 miR-140-5P参与调控颈椎软骨终板退变。进一步研究miR-140-5P不仅有利于揭示软骨终板退变的分子生物学机制,而且其日后也可能成为治疗椎间盘退变的有效靶工具。     

暗纹东方鲀leptin基因的克隆、SNP筛选及其与生长性状的关联分析

为明确暗纹东方鲀Takifugu obscurus瘦素(Leptin)基因的基本性质,并探究leptin基因的多态性及其与暗纹东方鲀生长的相关性,随机选择6尾健康的3月龄暗纹东方鲀幼鱼作为基因克隆的试验样本,采用RT-PCR方法克隆leptin基因的cDNA序列,随机选择同期繁殖、同塘养殖的178尾8月龄鱼,采用直接测序法筛选leptin基因中与生长相关的SNP位点。结果表明:克隆得到的leptin cDNA序列长为661 bp,包括459 bp的开放阅读框,共编码152个氨基酸,Leptin氨基酸序列含19个氨基酸的信号肽序列,推测该蛋白为亲水的稳定蛋白;暗纹东方鲀Leptin氨基酸序列与红鳍东方鲀Leptin氨基酸序列一致性最高,为96.7%,与不同种属的其他鱼类相似性较低,与草鱼氨基酸序列的一致性仅为25.25%,但不同物种的Leptin存在较高的三级结构相似性;在暗纹东方鲀leptin基因上筛选得到2个分型稳定的SNP位点(T24G、T193A),其中,T24G位点不同基因型个体间的体质量存在显著性差异(P<0.05), GG基因型个体体质量显著小于TG和TT基因型(P<0.05);将2个SNP位点的不同基因型进行组合,经关联分析获得优势双倍型D5,D5型个体的3个生长性状值最高,体质量显著高于D2、D4型个体(P<0.05),极显著高于D6型个体(P<0.01),体长和体全长显著高于D6型个体(P<0.05)。研究表明,T24G位点的TG和TT基因型及双倍型D5是暗纹东方鲀优势生长的基因型,可作为暗纹东方鲀辅助育种的候选分子标记。     

老年性痴呆危险因素之间的交互作用分析

目的：探讨老年性痴呆（AD）危险因素之间可能存在的交互作用。方法通过病例对照研究获得老年性痴呆的主要影响因素,然后采用相加模型分析主要影响因素之间的交互作用。结果Logistic 回归分析显示,年龄（OR＝1．069）、文化程度（OR＝0．601）、脑血管病史（OR＝3．660）、血铝水平（OR ＝3．739）、血硒水平（OR ＝0．611）为 AD 的主要影响因素。在对年龄进行调整后,交互作用超额相对危险度（RERI）为6．877,交互作用归因比（API）为59．52％,交互作用指数（S）为2．870。结论血铝水平和脑血管病史在 AD 的患病中可能存在正交互作用。     

藏鸡FSHβ、POU1F1和FSHR的基因多态性及其与产蛋性能的关系

目的:通过研究藏鸡FSHβ、POU1F1和FSHR的基因多态性及其与产蛋性能的关系,在分子水平上分析其产蛋性能低下的原因,目的是筛选出高产基因型以帮助选育高产藏鸡,为保护纯种藏鸡、促进规模化养殖提供理论依据和指导.方法:以高产蛋量鸡品种罗曼鸡为对照,选择禽类繁殖调控轴上的促卵泡激素β亚基(FSHβ)、垂体特异性转录因子1(POU1F1)和促卵泡激素受体(FSHR)三个基因,克隆、分析这三个基因部分编码区(CDS区)单核苷酸序列多态性(SNP)及其与藏鸡产蛋量的相关性.结果:1.藏鸡与罗曼鸡FSHβ基因第2外显子和第3外显子种内、种间均不具有多态性,表现为单一基因型.2.POU1F1基因exon3,exon4和exon6在藏鸡和罗曼鸡种间存在SNP位点,具有各自独特的基因型.exon3上藏鸡为AA基因型,罗曼鸡为AB基因型;exon4上藏鸡为CC基因型,罗曼鸡为CD基因型;exon6上藏鸡为TT基因型,罗曼鸡为TW基因型.而该基因第5外显子序列在两物种的种内和种间均未表现出多态性.3.FSHR基因exon1和exon4在藏鸡和罗曼鸡种间存在SNP位点.exon1上藏鸡为EE基因型,罗曼鸡为EF基因型;exon4上藏鸡表现为3种基因型(GH,GI,HI),而在罗曼鸡上仅具有一种基因型(GH),且罗曼鸡的基因型与藏鸡种群内的一种相同.结论:1.FSHβ基因不具有多态性,与产蛋量间的关系有待进一步研究.2.POU1F1基因exon3,exon4和exon6具有多态性.此3个片段的核苷酸突变位点的等位基因频率和基因型频率在两个种群间呈极显著性差异(P<0.01),这6个SNP与藏鸡产蛋量具有显著相关性.3.FSHR基因的exon1和exon4具有多态性.此2个片段的核苷酸突变位点的等位基因频率和基因型频率在两个种群间呈极显著性差异(P<0.01),该基因的SNP与产蛋量具有显著相关性.     

南昌市东湖区社区居民高血压患病现状及危险因素分析

目的：了解南昌市东湖区社区居民高血压的患病状况及危险因素,为探索东湖区社区高血压群体干预提供依据。方法采用分层整群抽样方法,并采用单纯随机抽样法,抽取了东湖区社区居民7437人。采用自制的社区居民高血压知识调查表对7437名东湖区社区居民进行问卷调查,测量血压、身高和体质量,并进行单因素χ2检验分析,高血压患病的危险因素分析采用多因素非条件 Logistic回归分析。结果7437名东湖区社区居民中,高血压患者1226例,高血压患病率为16．49％。年龄50～59、60～69、70～79和80～90岁者的高血压患病率均明显高于年龄18～49岁者（P＜0．05）,年龄60～69、70～79和80～90岁者的高血压患病率均明显高于年龄50～59岁者（均P＜0．05）。单因素分析结果显示,影响东湖区社区居民高血压患病的因素有：超重肥胖（OR＝2．209）、有高血压家族史（OR＝2．559）、吸烟（OR＝1．190）、饮酒（OR＝1．377）、紧张（OR＝2．009）、三餐规律差（OR＝2．661）和口味偏咸（OR＝1．185）。多因素非条件 Logistic 回归分析结果显示,有高血压家族史（OR＝1．562）、紧张（OR＝1．821）、三餐规律差（OR＝0．060）和超重肥胖（OR＝1．881）为东湖区社区居民高血压患病的危险因素。结论东湖区社区居民的高血压患病率较高。应将具有上述危险因素的人群列为重点防控对象,提倡戒烟限酒,消除紧张,三餐规律饮食,低盐饮食,强调体育锻炼控制体质量,以减少高血压的危害。     

miR-146a、miR-375联合AFP检测在诊断原发性肝癌中的应用

目的:探究微小核糖核酸146a(miR-146a)、微小核糖核酸375(miR-375)联合甲胎蛋白(AFP)检测在诊断原发性肝癌中的应用价值。方法:选取2017年2月-2019年4月在本院治疗的53例原发性肝癌患者作为肝癌组,将本院同期收治的53例肝脏良性疾病患者作为良性组。检测所有患者的血清AFP含量及miR-146a、miR-375相对表达量。比较两组血清AFP含量及miR-146a、miR-375相对表达量。对肝癌组miR-375、miR-146a及AFP检测结果进行ROC曲线分析,根据ROC曲线得miR-375、miR-146a的最佳临界值。对肝癌组进行miR-375、mi R-146a、AFP检测及联合检测,比较各个检测方法的敏感度、特异度和ROC曲线下面积(area under curve,AUC)。结果:肝癌组miR-146a、miR-375相对表达量及AFP含量均高于良性组(P<0.05);联合检测敏感度均高于miR-146a与AFP检测,且特异度高于miR-375检测(P<0.05);联合检测AUC大于AFP、miR-146a及miR-375检测(P<0.05)。结论:miR-146a、miR-375联合AFP检测在诊断原发性肝癌中具有较高的敏感度、特异度。     

miR-1腺病毒载体的构建及表达分析

目的构建并鉴定microRNA-1（miR-1）的腺病毒表达载体。方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组。重组质粒pAdprecusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1。Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率。结果基因测序及酶切鉴定证实重组Adprecursor-miR-1腺病毒载体构建成功;腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平。结论利用同源重组的方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达水平。     

miR-19b对巨噬细胞ABCA1表达的影响

目的观察miR-19b对巨噬细胞ABCA1表达的影响。方法在THP-1源性巨噬细胞中转染miR-19b模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor),荧光定量PCR检测ABCA1 mRNA,Western blot检测ABCA1蛋白水平。结果转染miR-19b mimic后,巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白水平均显著下调;转染miR-19b inhibitor后ABCA1蛋白则明显上调,但ABCA1 mRNA无变化。结论 miR-19b下调巨噬细胞ABCA1的表达。     

miR-370对肝细胞癌的作用及临床研究

目的:研究miR-370在肝细胞癌组织中的表达情况,探讨其对肝细胞癌的意义。方法:选择本院2009年1月-2015年1月收治的肝癌患者55例,均需进行肝癌手术治疗。分别检测患者肝癌组织及癌旁组织中miR-370的表达,同时检测25例正常肝组织中miR-370的表达,对比miR-370在上述组织中表达的差异。根据miR-370在肝癌组织及癌旁组织中表达的中位数分为高表达组与低表达组,分析miR-370与患者的年龄、性别、肝硬化病史、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤个数、TNM分期、是否侵犯血管、有无微卫星灶、有无包膜等临床指标的关系。结果:正常肝组织、癌旁组织、肝癌组织中miR-370表达分别为(0.857±0.021)、(0.003±0.001)、(0.001±0.000 01),呈现依次递减的趋势。结论:miR-370在肝细胞癌中呈现较低表达,表达水平较低者容易出现较大肿瘤、TNM分期较晚、肿瘤侵犯血管、肝内有卫星灶、肿瘤无包膜等。     

斑马鱼miR-30e对血细胞生成的作用机制研究

microRNA(简写为miRNA)是一类内源基因编码的单链RNA分子,参与转录后基因的表达调控,在血液生成过程中起着重要作用。为研究miR-30e对鱼类血液生成的作用机制,以斑马鱼Danio rerio作为模式生物,针对青藏高原裂腹鱼血液组织中高表达的miR-30e,利用生物信息软件预测斑马鱼miR-30e的靶基因,构建含斑马鱼ALAS2-3′UTR序列的双荧光素酶报告质粒与斑马鱼miR-30e进行共转染,检测细胞双荧光素酶活性的变化;同时构建含斑马鱼ALAS2-3′UTR序列的绿色荧光蛋白质粒,与miR-30e共同显微注射斑马鱼胚胎,观察GFP荧光强度与蛋白表达量的变化。结果表明:斑马鱼胚胎在注射miR-30e模拟体48 h后,其血红蛋白表达明显减少;转染miR-30e的293T细胞双荧光素酶活性显著降低(P<0.05);斑马鱼胚胎注射miR-30e模拟体24 h后,其GFP荧光强度明显降低,且GFP蛋白表达量明显减少。研究表明,ALAS2基因是miR-30e的一个靶基因,miR-30e通过抑制ALAS2表达而抑制血红细胞的生成。     

LPS诱发急性肺损伤中miR-16的表达及功能研究

目的观察脂多糖（LPS）诱发的急性肺损伤中microRNA-16（miR-16）的表达变化及其对炎症因子TNF-α等表达的调节。方法通过生物信息学分析不同物种间miR-16基因序列的保守性。通过小鼠气道向其肺内注入LPS（10 mg.kg-1）,构建小鼠急性肺损伤模型,采用实时荧光定量PCR分析miR-16、IL-6、TNF-α的表达水平;在培养的肺上皮细胞A549中采用miR-16 mi mic对miR-16进行过表达研究。结果 miR-16基因序列在斑马鱼、大鼠、小鼠和人中序列高度保守;miR-16在急性肺损伤病理过程中表达明显降低（P〈0.05）;A549细胞中miR-16的表达水平显著升高（P〈0.01）,相反,LPS诱导的炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平显著降低（P〈0.05）。结论 miR-16在LPS诱发的急性肺损伤病理过程中的表达降低,miR-16过表达能够显著抑制LPS对炎症的诱发作用,表明miR-16在急性肺损伤的炎症发生过程中发挥着重要功能。     

miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长(P<0.05)。结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

miR-335在急性缺血性脑卒中表达下调及对钙调蛋白的调控作用

目的检测微小RNA-335在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,并探讨其对钙调蛋白(Ca M)调控的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定106例AIS患者及98例健康对照组血清中miR-335表达情况;用生物信息学数据库查询分析miR-335对钙调蛋白编码基因CALM1的靶向结合关系;脂质体转染法将miR-335模拟物、抑制物以及相应阴性对照物分别转染至人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中并进行细胞培养,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测干预后HUVECs中钙调蛋白mRNA和蛋白的表达水平。结果与健康对照组相比较,AIS组患者血清miR-335表达明显下调(P<0.01);生物信息学软件的查询分析显示CALM1存在miR-335潜在靶向结合位点;RT-PCR和Western blot检测结果显示miR-335模拟物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著下降(P<0.01),而miR-335抑制物组Ca M mRNA和蛋白的表达水平较对照组显著增高(均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清miR-335表达明显下降,表达下调的miR-335可能通过上调钙调蛋白的表达从而发挥重要作用。     

干扰miR-21表达抑制胶质瘤U251细胞增殖迁移与侵袭

目的探讨干扰miR-21表达对胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用脂质体将miR-21抑制物(人工合成干扰miR-21表达的核苷酸片段,miR-21处理组)以及对照组转染于U251细胞,利用qRT-PCR验证miR-21处理组转染的细胞中miR-21表达水平;通过MTT法、细胞划痕、transwell等实验观察miR-21处理组和对照组对U251细胞增殖迁移和侵袭的影响。结果 miR-21处理组中miR-21的表达量明显下调。即转染miR-21抑制剂能有效降低U251细胞中miR-21的表达。miR-21处理组的U251细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异具有显著性。细胞划痕实验显示干扰miR-21抑制U251细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果显示,miR-21处理组的U251细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降。结论 miR-21能促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,它可能在胶质瘤的发生和进展中发挥重要作用。