三种蓝莓抗氧化及抗Hep G2细胞增殖活性的比较分析

以三种常见市售蓝莓[大兴安岭野生蓝莓(Vaccinium uliginosum L.)、贵州兔眼蓝莓(Vaccinium ashei Reade)和智利蓝莓(Vaccinium corymbosum L.)]为研究对象,研究了其总多酚、总黄酮和总花色苷含量及抗氧化活性和抗Hep G2细胞增殖活性,并分析了活性成分含量与活性功能的相关性。结果表明:大兴安岭野生蓝莓的总多酚、总黄酮和总花色苷的含量及DPPH和ABTS自由基的清除能力显著高于贵州蓝莓和智利蓝莓(p0.05);细胞抗氧化实验结果表明大兴安岭野生蓝莓的CAA(CellularAntioxidant Activity)值显著高于贵州蓝莓和智利蓝莓,为202.40±6.33μmolQE/100g鲜果(非PBS清洗处理时)和65.40±3.04μmolQE/100g鲜果(PBS清洗处理时)(p0.05);三种蓝莓均对HepG2细胞增殖有较强的抑制作用,其中大兴安岭野生蓝莓的抗HepG2细胞增殖的半数有效浓度EC50显著低于贵州蓝莓和智利蓝莓,分别为150.41±7.82、212.87±13.10和221.53±12.53 mg/mL(p0.05);蓝莓的CAA值与总多酚和总黄酮含量之间显著相关,抗Hep G2细胞增殖的EC50值与总多酚、总黄酮和总花色苷含量之间显著相关(p0.05)。以上结果表明大兴安岭野生蓝莓具有极大的开发利用优势。     

植物细胞分裂素ortho-Topolin Riboside对人白血病细胞株THP-1的抗癌活性及机制初探

本研究以人急性髓性白血病细胞株THP-1为研究对象,初步探讨其抗癌活性及作用机制。通过光学显微镜观察N6-2-苄胺羟基腺苷(oTR)作用后THP-1细胞形态学和数目变化;CCK-8法检测oTR对THP-1细胞的增殖抑制作用,并用核苷转运体拮抗剂和腺苷受体拮抗剂预处理细胞检测oTR进入细胞的方式;用流式细胞仪分析oTR作用对THP-1细胞凋亡和分化的影响。结果表明,oTR可显著(P<0.05)抑制THP-1细胞的增殖能力,且呈浓度依赖性;核苷转运体拮抗剂Dipyridamole预处理THP-1细胞后,可明显逆转oTR的增殖抑制作用,而4种腺苷受体拮抗剂(DPCPX、SCH58261、MRS1754和MRA1191)则无显著影响;oTR可诱导处理组细胞亚倍体峰比例显著(P<0.05)高于对照组,且细胞髓系分化标志蛋白CD11b表达明显升高。以上结果表明细胞分裂素oTR通过核苷转运体途径进入THP-1细胞,显著(P<0.05)抑制细胞的增殖,并可诱导THP-1细胞发生凋亡和髓系分化。     

硒酸化乳清分离蛋白抗前列腺癌细胞活性

采用干燥加热法制备硒酸化乳清分离蛋白(selenized whey protein isolate,Se-WPI),通过Se-WPI中有机硒质量分数、硒酸根稳定性、Se-WPI消化率测定,⁷⁷Se核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)分析以及Se-WPI抑制前列腺癌细胞增殖实验等,研究其理化性质及抗前列腺癌细胞活性。结果表明,在pH 3.0、加热温度80℃、加热时间24 h条件下制备得到的Se-WPI中有机硒质量分数为2.09%。⁷⁷Se-NMR和硒酸根稳定性分析结果表明,Se-WPI中的硒以亚硒酸酯的形式存在。经硒酸化的WPI多种生物活性得到改善,消化性明显提高。Se-WPI与亚硒酸钠均具有抑制人前列腺癌LNCaP细胞、DU145细胞增殖的活性。细胞周期、细胞凋亡和Caspase-3活力检测结果从不同角度验证了Se-WPI具有诱导LNCaP细胞凋亡的作用。另外,Se-WPI还能抑制癌细胞与基底膜成分的黏附能力。实验结果可为进一步研究有机硒化合物的抑癌机制提供依据。     

酶促酯交换反应制备柚皮苷酯及其抑制HepG2细胞的增殖活性

本文研究了非水相条件下利用固定化脂肪酶~(IM)TL催化柚皮苷的酯交换反应,得到了一系列带有不同链长脂肪酸的柚皮苷酯。固定化脂肪酶~(IM)TL对反应显示出高催化活性,其底物转化率均达到90%以上。在4 mL叔戊醇体系中,50 mg ~(IM)TL酶,柚皮苷:酰基供体=1:20,50℃的条件下,反应3 h后,区域选择性达99%以上。在对柚皮苷酯进行液相分析、质谱和核磁鉴定后,发现酰化产物为柚皮苷-6’’-O-酯。研究发现柚皮苷酯的Clog P发现随着链长的增长而增加,其中柚皮苷肉豆蔻酯的Clog P值为6.50。HepG2细胞抑制实验的结果显示柚皮苷酯对HeG2细胞增殖的抑制活性与柚皮苷酯的脂溶性相关。相较于柚皮苷,柚皮苷酯对HepG2细胞具有更好的抑制增殖作用。带有长链脂肪酸的柚皮苷肉豆蔻酯具有更加良好的脂溶性,对HepG2细胞增殖抑制作用更强(2.28%)。以上研究表明酶促合成生成的柚皮苷酯比柚皮苷具有更广阔的应用前景。     

黄酮和黄酮醇诱导人食管鳞癌KYSE-510细胞分化和构效

在体外探讨两个黄酮和两个黄酮醇化合物对人食管鳞癌KYSE-510细胞的分化诱导作用及其构效关系。显微镜观察细胞分化形态,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分析分化标志物(角蛋白8)表达,RT-PCR定量端粒酶逆转录酶表达。结果表明：4个化合物均可诱导KYSE-510细胞分化,并且化合物分子中C环3′-羟基提高化合物的分化诱导活性,A环6′-羟基和B环4′-羟基可能削弱化合物的分化诱导活性。     

细香葱提取物对人胃癌细胞SGC7901抑制作用

通过四甲基偶氮唑蓝比色法和流式细胞术研究不同细香葱提取物对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用及其对细胞周期、凋亡率的影响。结果显示,细香葱抗胃癌活性成分主要集中在75%乙醇提取部位,同一区域不同品种细香葱抑制胃癌细胞增殖作用存在显著性差异(P0.05),其中3号细香葱75%乙醇提取物的抑制作用最强,其24、48、72 h时IC50值分别为(0.88±0.07)、(0.45±0.08)、(0.21±0.03)mg/m L;SGC7901细胞经1.0、2.0 mg/m L的细香葱75%乙醇提取物处理48 h后,S期细胞所占比例显著增多(P0.05),细香葱75%乙醇提取物阻碍人胃癌细胞SGC7901由S期向G2期的转化,将细胞周期阻滞于S期;同时,实验组细胞相比对照组凋亡率显著上升(P0.05),存在量效关系。综上,细香葱75%乙醇提取物能够阻滞人胃癌细胞SGC7901由S期向G2期转化、促进其凋亡并抑制细胞增殖,细香葱具有开发成为抗胃癌功能食品的潜力。     

壳寡糖对自由基的清除及对N9小胶质细胞的保护作用

目的：研究壳寡糖(COS)的抗氧化作用及其对脂多糖(LPS)损伤N9 小胶质细胞的保护作用。方法：首先在细胞外检测COS 对DPPH 自由基、H2O2 和羟自由基的清除作用,然后采用LPS 诱导建立体外培养N9 小胶质细胞活化模型,将细胞分为正常对照组、LPS 模型组、LPS+COS 给药组(COS 质量浓度分别为50、100、200、300、400μg/mL)。观察各组细胞的形态;检测各组细胞培养液中一氧化氮(NO)含量;用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平并观察其荧光图像;用DNA 损伤实验观察各组细胞凋亡情况。结果：COS 能有效清除DPPH 自由基和羟自由基,对H2O2 无清除能力;COS 能减少活化的N9 细胞数量并明显降低LPS 活化的N9 细胞培养液中NO 水平,降低细胞内ROS 水平,减少LPS 诱导的细胞凋亡,保护N9 小胶质细胞。结论：COS 在N9 小胶质细胞内外均具有较强的抗氧化能力,能保护N9 小胶质细胞,减轻N9 小胶质细胞的氧化损伤。     

雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性及构效关系研究

研究雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性及构效关系。通过体外化学分析法,测定雪松松针乙醇提取物的抗氧化活性;采用福林酚法和三氯化铝法,测定其总酚和总黄酮含量;利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)与核磁共振(NMR)技术,鉴定其主要成分,并对其抗氧化作用的构效关系进行初步探讨。结果表明,雪松松针乙醇提取物对实验体系中的ABTS(EC₅₀:0.48±0.01 mg/mL)和DPPH(EC₅₀:32.40±0.76 μg/mL)自由基有很好的清除作用,能够高效地清除羟自由基(EC₅₀:1.73±0.01 mg/mL)和过氧化氢(EC₅₀:89.48±0.54 μg/mL)中的活性氧,抑制脂质过氧化(EC₅₀:9.85±0.14 mg/mL)并具有较高的还原能力,展现出显著的抗氧化活性;提取物拥有较高的总酚(40.30±2.13 mg没食子酸当量/g提取物)和总黄酮(56.62±1.53 mg芦丁当量/g提取物)含量;甲基松柏苷、阿魏酸-β-D-吡喃葡萄糖苷、荛花酚、断氧化马钱苷、(E)-1-O-对香豆酰-α-D-吡喃葡萄糖苷和天竺葵素-3-O-葡萄糖苷是松针乙醇提取物的主要成分,这些化合物结构中大量存在的具有氢原子转移或单电子转移能力的酚羟基、甲氧基、苄基等基团,是其展现良好抗氧化活性的重要原因。     

多糖降血糖活性构效关系及作用机制研究进展

糖尿病是以高血糖为特征的代谢疾病,发病率逐年攀升,而以西药为主的治疗方式存在一定的副作用,这促使人们将目光转向天然的活性物质。多糖作为一种安全、低毒的天然物质,具有多种生物活性。降血糖活性是多糖的重要活性之一,极具开发潜力。本文从分子质量、单糖组成、糖苷键、高级结构和基团等方面综述了多糖降血糖活性与其结构的关系,并总结了多糖降血糖的作用机制,分析目前研究存在的问题,同时对未来研究的方向进行了总结和展望。     

食源性肽的功能特性评价方法、分子构效关系及吸收代谢机制

肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的化合物,具有易吸收、低渗透压、低免疫原性、高组织渗透性等营养特性,可调控细胞代谢,是组织细胞的重要化学信使。食源性肽是食物蛋白质经限制性酶解法或生物发酵法等制备的重要营养基料,兼具良好的营养价值和多种生理调节活性。但目前食源性肽转运吸收过程、胞内亚细胞器时空动态分布以及营养代谢调控功能尚待研究,且不同结构和功能的肽分子(跨膜肽、信号肽、转运肽等)间协同作用模式也未明晰,严重制约了食源性肽的基础研究与产业快速发展。系统介绍了以化学、体外生物、低等/高等模式动物以及临床等多维度的肽功能评价方法;解析了食源性肽的分子构效关系,以“自上而下”与“自下而上”的2种方式分别阐述了食源性肽的分子构效规律分析方法,并创新了基于分子杂化轨道的“结构-功效”表征理论;揭示了不同分子结构特征(一级氨基酸序列、空间构型、主链肽键的排列方式、侧链官能团的多样化及α-碳的手性等)的肽分子在转运吸收过程中的构效关系;进一步探讨了营养研究领域中复杂体系下食源性蛋白肽吸收及调控机体代谢的规律,深度挖掘肽吸收代谢与营养的科学基础,对基于食源性肽开展精准营养调控具有重要借鉴意义。对食源性肽的功能特性评价方法、“构-效”关系和吸收代谢机理进行了系统的阐述,以期为未来食源性肽的研究提供科学的指导和参考。     

松油烯-4-醇对荧光假单胞菌抑菌能力及作用机理

本实验通过测定最小抑菌剂量(minimum inhibitory concentration,MIC)及生长曲线,评价松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的抑菌能力;随后通过碱性磷酸酶活力、电导率测定,二乙酸荧光素染色实验分析以及扫描电子显微镜观察评价松油烯-4-醇对细胞壁及细胞膜通透性的影响;最后通过测定DNA、总蛋白与胞内钠、钾离子三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活力,来进一步探究松油烯-4-醇对细胞内大分子及细胞代谢的影响。结果表明:松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的MIC为2μL/mL;松油烯-4-醇可有效破坏荧光假单胞菌的细胞壁,破坏程度随剂量的升高而增强;松油烯-4-醇会使细胞膜的通透性增强,导致细胞内离子的外渗;扫描电子显微镜观察结果表明松油烯-4-醇能对细胞膜产生不可逆的破坏;凝胶阻滞电泳分析结果表明,松油烯-4-醇会使大分子的DNA泄露;通过测定总蛋白含量与Na+、K+-ATP酶活力可知,松油烯-4-醇能降低细胞内蛋白质的含量并能阻滞蛋白质的表达与ATP酶的合成,造成细胞凋亡。综上,松油烯-4-醇有望成为新型水产品保鲜剂,本实验可为拓展天然防腐剂在水产品的应用提供理论依据。     

柠檬苦素类化合物对人乳腺癌细胞(MCF-7)的生长抑制及细胞周期动力学的影响

为了探讨柠檬苦素类似物对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制和对细胞周期的影响,应用MTT法和流式细胞仪检测癌细胞株生长和细胞周期.结果显示柠檬苦素类似物能明显抑制MCF-7的生长,抑制率高于70%,并随作用时间和剂量增加其效果增强;柠檬苦素可以影响细胞周期G     

人嗜碱性粒细胞肿瘤细胞系KU812F检测牛乳及其替代品致敏性方法的建立

比较牛乳及其替代品释放组胺的能力,以建立体外细胞检测牛乳及替代品疑似过敏原组分致敏性的检测方法。以嗜碱性粒细胞KU812F为研究对象,通过牛乳过敏患者血清的孵育,使细胞处于致敏状态,再以牛乳及其替代品过敏原作为激发物,使细胞脱颗粒释放组胺。结果表明：利用嗜碱性粒细胞KU812F检测牛乳及替代制品组胺释放量的方法具有较高的可靠性及重现性,细胞释放组胺的量与过敏原的剂量相关,在一定的剂量范围内,组胺的释放率与过敏原的剂量呈正比,组胺释放率达到最大之后,组胺释放率与剂量呈负相关。     

中国主要水果抑制肝癌HepG2细胞和结肠腺癌Caco-2细胞增殖活性评价

分别采用Folin-Ciocalteu法测定了水果提取物的总酚含量,采用亚甲基蓝法测定了其抗人肝癌细胞Hep G2和人结肠腺癌细胞Caco-2增殖的活性,分析了总酚含量与抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性之间的相关性。结果显示,25种水果中李子的总酚含量最高(1686.08±96.94μmol GAE/100鲜果),西瓜(83.54±2.10μmol GAE/100 g鲜果)和哈密瓜(79.35±0.76μmol GAE/100 g鲜果)的总酚含量最低;在可测出抗增殖EC50值的水果中,李子(18.99±0.06 mg/m L)和番石榴(20.94±0.09 mg/m L)抗Hep G2细胞增殖的活性最强,梨的活性最弱(389.63±10.82 mg/m L)。李子抗Caco-2细胞增殖的活性最强(8.73±0.11 mg/m L),火龙果的活性最弱(388.07±7.04 mg/m L)。水果的抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性与其总酚含量相关性显著(R2=0.4147,p0.01;R2=0.4071,p0.05),该相关性表明水果中的多酚具有良好的抗肿瘤细胞增值的活性。     

9顺维A酸对人肺腺癌细胞A2增殖及凋亡影响的实验研究

研究9顺维A酸(9-cis RA)抑制肺腺癌细胞A2增殖及诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。体外培养A2细胞,随机分为4组,实验组加9-cis RA使其终浓度为1、5、10μmol/L,对照组加入二甲亚砜使其终质量分数为0.1%,采用MTT法检测各组A2细胞增殖情况;使用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析药物作用后各组细胞的凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)检测各组细胞bax、fas、bcl-2基因的变化。9顺维A酸对人肺癌细胞株A2增殖均有明显的抑制作用(P0.01),实验组中细胞凋亡发生率显著增高(P0.05),且随着浓度的升高抑制作用和凋亡率也随之提高。实验组bax m RNA、fas m RNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);实验组bcl-2 m RNA表达显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 9-cis RA具有明显的抗肺腺癌细胞A2增殖的作用,其机制可能通过上调bax、fas基因和下调bcl-2基因表达、诱导细胞凋亡有关。     

苦荞麸皮多酚抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖活性研究

研究了产自重庆酉阳的苦荞(Fagopyrum tartaricum L.Gaerth,FG1)麸皮和四川西昌的苦荞(Fagopyyrum tartaricum L.Gaerth,FG2)麸皮中酚类化合物的含量、抗氧化和抗增殖活性。结果表明:FG1和FG2 2种苦荞麸皮总酚含量分别为(26.40±0.41)和(27.00±0.72)mg GAE/g DW,且游离态是其酚类化合物的主要存在形式(约占其总酚含量的93%);2种苦荞麸皮酚提取物均表现出一定的抗氧化性,并且FG2的抗氧化能力强于FG1(P0.05),FG1和FG2的DPPH自由基清除能力总IC50值分别为(39.56±2.76)和(24.69±0.33)μg·mL~(-1);还原力总EC_(50)值分别为(97.92±1.4)和(73.18±4.32)μg·mL~(-1);在抗增殖试验中,与对照组相比,FG1和FG2游离酚提取物均能明显抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖(P0.05)。然而,在不产生细胞毒性的浓度范围内,其结合酚提取物却表现出极弱的抗增殖作用。     

广枣黄酮清除自由基能力及抗氧化性能的细胞模型法评价

利用制备色谱将广枣黄酮分离成F1和F2两个组分。分别测定广枣黄酮、F1和F2的总抗氧化能力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）以及超氧阴离子自由基（O2－•）的能力,并与常见的抗氧化剂VC进行对比。结果表明：广枣黄酮具有良好的抗氧化效果,总黄酮的抗氧化能力介于F1和F2之间;F1对DPPH自由基的清除能力以及F1和F2对•OH的清除能力均高于VC,而在总抗氧化能力以及清除O2－•方面F1和F2的效果均弱于VC。另外,细胞模型法评价结果显示,广枣黄酮可清除小鼠巨噬细胞RAW264.7内的活性氧,表现出明显的抗氧化活性。     

蛋白乳化活性与分子结构的关系

本文从蛋白分子二硫键以及非共价作用两方面综述了蛋白分子的柔韧性与蛋白乳化活性的关系。讨论了设计新的蛋白乳化剂的研究方向     

CA中库尔勒香梨酶活及细胞超微结构与锈斑病关系的研究

以气调贮藏(CA)中库尔勒香梨好果部位为对照,测定锈斑部位的多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)的酶活及总酚类物质含量,分析库尔勒香梨在气调贮藏(CA)中的生理代谢、细胞超微结构与锈斑发病的关系。结果表明:库尔勒香梨发生锈斑部位的PPO、PAL、PPO活性均高于对照,而总酚含量则略低于对照。通过透射电镜发现,库尔勒香梨表皮锈斑与贮藏环境湿度、贮藏时间以及木质素含量呈正相关。