亚硝基胍-紫外复合诱变筛选高产苯乳酸菌株

以自主分离的植物乳杆菌LY-78为出发菌株,以抑菌效价为检测指标,通过亚硝基胍-紫外复合诱变,双层平板拮抗法和牛津杯琼脂扩散法筛选突变菌株。试验结果表明,在亚硝基胍质量浓度3 g/L,诱变时间40min,紫外照射时间90 s时获得1株苯乳酸产量最高的变异株UN-30,苯乳酸产量达712 mg/L,比出发菌株产量246 mg/L提高2.89倍,且遗传性质稳定。     

基因组改组技术选育苯基乳酸高产菌株

以Lactobacillus paracaseiW2为出发菌株,应用紫外诱变和亚硝基胍诱变筛选出5株突变菌株（U4、U7、U12、N3、N6）．采用突变菌株进行多母本递推式原生质体融合,最终筛选出一株正向突变株F8,其发酵液中苯基乳酸含量为1．92g／L,比原始菌株提高了1．37倍。并且确定了最佳破壁条件为：溶菌酶浓度20g/L,变溶菌素浓度为15ug／mL;最佳融合条件为：常温下,聚乙二醇的浓度为50％,作用时间为10min。     

利用玉米浆发酵生产类胡萝卜素红酵母的诱变选育

以试验室保存的红酵母为出发菌株,利用MTG(N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍)诱变的方法,以获取可高效利用玉米浆发酵生产类胡萝卜素的突变株.通过筛选及连续传代试验,确定一株突变性状能稳定遗传的突变株,其类胡萝卜素产量达到13.01 mg/L,比出发菌株提高了41.72%.     

苯乳酸高产菌株的诱变育种

利用本实验室筛选得到的苯乳酸生产菌Lactobacillus plantarum P421进行高产菌株的诱变选育.通过紫外线诱变进行诱变育种,以产物耐受和抑菌圈相结合的筛选方法,获得了一株高产苯乳酸的优良突变菌株,其产量达到528mg/L,比出发菌株81mg/L提高了6.5倍,且遗传性质稳定.该诱变方法和筛选方法目的明确,易操作,对类似的诱变育种具有一定的借鉴意义.     

苹果酸乳酸转化高活力菌株的选育

选育苹果酸乳酸转化活力高的乳酸菌,为果酒的苹果酸乳酸发酵生物降酸提供新菌源。采用适宜的紫外亚硝基胍复合诱变条件处理植物乳杆菌R23,以降酸量及苹果酸乳酸转化活力为指标,对诱变获得的菌株进行筛选。紫外亚硝基胍复合诱变的适宜条件是:菌液浓度107cfu/mL,亚硝基胍质量浓度1.8 mg/mL,诱变时间60min。紫外线照射用功率15 W的紫外灯,距离20 cm,照射时间20 s。最终选育出1株降酸能力和苹果酸乳酸转化活力分别比出发菌提高77.5%与15.4%,遗传性能稳定的优良菌株RF17。     

GABA高产菌株的筛选、鉴定及诱变选育

从火龙果果实表面上筛选出一株发酵产γ-氨基丁酸(GABA)白色菌株,经形态学观察、生理生化试验和18S rDNA测序分析,鉴定为假丝酵母菌菌株(Candida.sp),命名为C2。C2作为出发菌株,分别采用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变方法选育高产γ-氨基丁酸菌株。与出发菌株相比,紫外诱变菌株γ-氨基丁酸产量增加了40.25%,亚硝基胍诱变菌株γ-氨基丁酸产量增加了62.83%。通过紫外线和亚硝基胍复合诱变,得到正向突变株,其中Y6突变株遗传性状稳定,γ-氨基丁酸产量达2.561 g/L,产量比诱变前提高了3.1倍。     

紫外与亚硝基胍复合诱变选育高产多糖罗耳阿太菌

以实验室保存的罗耳阿太菌(Athelia rolfsii)为出发菌株,分别采用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变方法选育高产多糖菌株。与出发菌株相比,紫外诱变菌株多糖产量增加了10.70%,亚硝基胍诱变菌株多糖产量增加了15.78%。通过响应面设计紫外线和亚硝基胍复合诱变,得到正向突变株,其中X2突变株遗传性状稳定,多糖产量达19.868g/L,相比出发菌株增长了23.85%。     

两种复合诱变方法选育掷孢酵母高产油脂菌株

以掷孢酵母(Sporobolomyces reseus)As.2.618为原始菌株,进行紫外-亚硝基胍和紫外-硫酸二乙酯两种复合诱变筛选,以获得高产油脂菌株。采用紫外-亚硝基胍复合诱变及马来酰肼初筛,突变株UV-NTG-2经摇瓶发酵复筛,生物量、油脂含量、油脂产量分别为39.01 g/L、19.83%、7.74 g/L,较原始菌株分别提高了42.42%、52.30%、116.81%。采用紫外-硫酸二乙酯复合诱变,经浅蓝菌素初筛及摇瓶复筛,突变株UV-DES-2的生物量、油脂含量、油脂产量分别为38.96g/L、20.80%、8.10 g/L,较原始菌株分别提高了42.24%、59.75%、126.89%。诱变菌株的油脂脂肪酸组成中C18∶1的相对含量较原始菌株分别提高了11.88个百分点和6.69个百分点,且C20∶1的含量降低,说明突变菌株油脂的流动性较原始菌株有所提高。经5次连续传代表明,诱变菌株遗传性状稳定。     

高产细菌素植物乳杆菌的诱变选育研究

为获得细菌素高产菌株,以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JLA-9为出发菌株,对其进行亚硝基胍（NTG）诱变、常压室温等离子体（ARTP）诱变,以及基因组改组。结果表明,亚硝基胍诱变的最佳浓度为4 mg/m L,经筛选得到两株突变株N4-26、N4-27,其抑菌效价分别为2531.93、3057.32 IU/m L;常压室温等离子体诱变最佳时间为10 s,经筛选得到两株突变株ARTP10-37、ARTP10-61,其抑菌效价分别为2974.27、3261.62 IU/m L。将上述抑菌效价提高的菌株经四轮基因组改组后,得到一株突变株F4-2,其抑菌效价达到7374.76 IU/m L,相对于原始菌株提高了2.35倍,且遗传稳定性良好。研究表明理化诱变结合基因组改组的方式是快速获得理想菌株的有效方法。      

产γ-氨基丁酸的乳酸菌株的诱变选育

为获得γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的高产菌株,对乳酸片球菌进行紫外线和亚硝基胍诱变及二者的复合诱变处理。以正突变为标准确定的最佳诱变条件为:紫外照射距离25cm,照射时间20s;NTG终浓度为0.3mg/mL,处理时间60min。诱变后获得了1株突变株UN-27,经连续传代10次,遗传性状稳定,平均GABA产量为5.017g/L,较初始菌株的1.062g/L提高了4.72倍。     

高产细菌素植物乳杆菌的诱变选育研究

为获得细菌素高产菌株,以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)JLA-9为出发菌株,对其进行亚硝基胍(NTG)诱变、常压室温等离子体(ARTP)诱变,以及基因组改组。结果表明,亚硝基胍诱变的最佳浓度为4 mg/m L,经筛选得到两株突变株N4-26、N4-27,其抑菌效价分别为2531.93、3057.32 IU/m L;常压室温等离子体诱变最佳时间为10 s,经筛选得到两株突变株ARTP10-37、ARTP10-61,其抑菌效价分别为2974.27、3261.62 IU/m L。将上述抑菌效价提高的菌株经四轮基因组改组后,得到一株突变株F4-2,其抑菌效价达到7374.76 IU/m L,相对于原始菌株提高了2.35倍,且遗传稳定性良好。研究表明理化诱变结合基因组改组的方式是快速获得理想菌株的有效方法。     

一株高产胞外多糖米酒乳杆菌的诱变筛选

通过对一株高产胞外多糖的米酒乳杆菌BXR-5-3在不同紫外线照射距离和时间、不同浓度亚硝基胍以及紫外线、亚硝基胍复合诱变等条件下分别诱变筛选和多糖含量测定,获得的胞外多糖产量最高诱变菌株的条件为紫外线照射距离为20cm,亚硝基胍的浓度为300μg/mL,处理时间为20min,其多糖的产量为339.0mg/L。      

紫外线与亚硝基胍复合诱变选育高效降解亚硝酸盐乳酸菌

目的 通过诱变方法获得高效降解亚硝酸盐的优良乳酸菌应用于降低腌制品中的亚硝酸盐。方法 以前期实验筛选获得的降解亚硝酸盐性能较强乳酸菌D2作为初始诱变菌株, 采用紫外线和亚硝基胍复合诱变, 选育高效降解亚硝酸盐的乳酸菌。结果 经15 W紫外线和0.5 mg/mL亚硝基胍三轮复合诱变得到一株优良乳酸菌, 该菌株24 h降解亚硝酸盐(200 mg/L)降解率为91.4%, 较初始菌株提高了12.7%; 以亚硝酸钠为底物, 其产亚硝酸盐还原酶的比活力为7.7 mmol/L, 较诱变前提高42.9%; 连续传代培养后降解亚硝酸盐能力和产亚硝酸盐还原酶活力性能稳定。结论 通过紫外线和亚硝基胍复合诱变, 获得一株遗传稳定性良好的高效降解亚硝酸盐的菌株。     

产CLA嗜酸乳杆菌的筛选诱变与鉴定

从传统泡菜中选育高产共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)的菌株L28,利用人工诱变方法,以L28为出发菌株,采用紫外线、亚硝基胍(NTG)依次诱变及紫外、亚硝基胍复合诱变处理,经进一步液体发酵复筛获得多株突变菌株,CLA的最优产量为95.1425μg/mL.其中L44突变菌株为CLA生成能力最高菌株.经16S rDNA全序列分析法和生理生化试验确定菌株的种属,然后经过Gene Bank基因比对确定同源基因,最后经鉴定为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus).     

产2，3-丁二醇的产气肠杆菌株的诱变和筛选

以产气肠杆菌为原始菌株,采用紫外线、亚硝基胍复合诱变进行诱变育种,以产酸圈和产物耐受相结合的筛选方法,获得了1株高产2,3-丁二醇的优良突变菌株,其产量达到24.20 g/L,比原始菌株(6.28 g/L)提高了3.8倍,且遗传性质稳定。该诱变方法和筛选方法目标明确,易操作,对于其他具有工业应用价值菌株的筛选有一定的借鉴意义。     

L(+)-乳酸高产菌株的选育

以代谢调控发酵理论为依据,利用紫外线、亚硝基胍、DES等理化因子对乳酸菌进行复合诱变,再用高浓乳酸钙平板、纯乳酸平板、琥珀酸平板筛选得到一株高产L( )-乳酸的正向突变株M7,平均发酵产量为90g/L,比原菌株产量提高30%,对糖的转化率为88.9%。     

丙酸高产菌株的复合诱变选育

以费氏丙酸菌IFFI.10019为出发菌株,经2次紫外线、2次亚硝基胍、1次亚硝基胍-氯化锂多重复合诱变处理,选育获得丙酸高产菌株NL—3,丙酸产量由原来的0.20g/L,提高到1.23g/L,提高率达到515%。实验证明采用多因子复合诱变,特别是NTG-LiCl复合诱变,能有效改变菌株对诱变因素的敏感性,提高变异率,逐步提高突变株的产丙酸水平。     

复合诱变法选育生产乳果糖高产菌株的研究

选育生产乳果糖的高产菌株,为生物法（酶法）合成乳果糖提供技术保障。以乳酸克鲁维酵母变种（JN-187）为出发菌,经紫外线诱变选育出水解活性最高的JU74—09突变菌株;然后以JU74—09菌株为出发菌,经亚硝基胍（NTG）诱变选育出转糖基活性最高的JN91—08突变菌株;该菌株经7次传代实验,显示出良好的遗传稳定性。说明紫外线诱变与亚硝基胍（NTG）复合诱变是一种行之有效的用于生产乳果糖菌株选育的诱变方法。     

L-精氨酸高产菌株的亚硝基胍诱变选育和种子培养基的优化研究

为了筛选L-精氨酸的高产菌株,采用亚硝基胍对出发菌株A TCC 14067 （Brevibacterium flavum）进行诱变,结合抗精氨酸结构类似物D-精氨酸,S-甲基半胱氨酸平板抗性筛选高产菌株,并采用正交试验优化了种子培养基.结果显示,经过1 mg/mL的亚硝基胍诱变处理4min后,采用14 mg/mL的D-精氨酸抗性平板和8mg/mL的S-甲基半胱氨酸抗性平板筛选获得精氨酸高产菌株,由于解除精氨酸自身的反馈调节,L-精氨酸积累增大,产酸量达37.2 g/L,比野生菌株提高了128.2％,得到的高产菌株遗传性状稳定.通过对种子培养基进行正交试验优化,确定最终培养基配方为葡萄糖3.0％,玉米浆2.0％,硫酸铵2.0％,KH2PO4 0.10％,MgSO4·7H2O 0.05％,尿素0.15％,在此发酵条件下,L-精氨酸产量达37.8 g/L.     

γ-癸内酯高产菌株的诱变选育和发酵条件的研究

以Yarrowia lipolytica As 2.1405为出发菌株,经紫外线-亚硝基胍复合诱变,筛选到遗传性状稳定的一株高产γ-癸内酯的突变菌株C9,并对该菌株的发酵培养基配方进行优化,γ-癸内酯平均产量提高至2.04 g/L。