重组人红细胞生成素制品中CHO细胞蛋白残留量的测定

本文报告了重组人红细胞生成素制品中CHO细胞蛋白残留量测定方法（ELISA）的研究和建立。该方法具有较高的灵敏度、重复性、重显性和良好的实验相关性。对国产的22批重组人红细胞生成素半成品进行检定,合格率为81．8％。     

单克隆抗体制品中残余SP2/0细胞蛋白含量ELISA检测试剂盒的验证

目的对单克隆抗体制品中残余SP2/0细胞蛋白含量ELISA检测试剂盒进行验证。方法对Cygnus Technologies公司制备的SP2/0Host Cell Protein(sHCPs)ELISA试剂盒进行灵敏度、精密性验证及基质干扰试验和样品稀释回收试验,并采用该试剂盒对本公司制备的10批单抗制品原液及冻干品进行检测。结果标准蛋白含量的对数与相应的光吸收值的对数,在2～200ng/ml范围内呈线性关系;该试剂盒检测限可达0.6ng/ml,定量限可达2ng/ml,灵敏度符合要求;检测低、中、高3个浓度的SP2/0HCPs样品试验内及试验间变异系数分别为15.4%、3.0%、2.1%及12.0%、3.3%、1.5%;样品基质对检测无明显干扰;单抗样品检测不存在Hook效应;检测本公司10批单抗制品原液和冻干品中SP2/0细胞蛋白残留率均小于0.01%。结论该试剂盒灵敏度高,精密性好,可用于单抗制品中残余SP2/0细胞蛋白含量的测定。     

应用ELISA检测rIL-2含量

目的 应用ELISA法检测重组人白介素—2(rIL-2)含量。方法 采用ELISA双抗体夹心法测定rIL-2含量,同时对该法的灵敏度、精密性、重复性、特异性进行分析。结果 白介素-2含量的实测值与理论推算值基本一致,偏差小于10％,灵敏度高,精密性和重复性好,特异性强,可排除保护剂人血白蛋白对检测结果的干扰。结论ELISA法是检测rIL-2含量较为理想的方法。     

光合细菌处理脂肪酸废水生产菌体蛋白研究

首先对光合细菌进行驯化绘制生长曲线,确定菌体收获时间为72 h。然后确定最适生长条件:废水与无菌水以1:1混合,取混合液1000 mL,加入10 mL营养盐溶液,2.0 g尿素,用碳酸钙和碳酸氢钠控制溶液的pH为7～8之间,接种20 mL光合细菌菌液,放到恒温水浴震荡器中,调节温度。在光照条件下进行培养,时间控制在72 h。菌体蛋白产率为112.2 g/L废水,蛋白含量为35.85%。最后应用实验,一个月的喂养试验,彩霞鱼生长状况良好,证明该菌体蛋白可以作为鱼的饵料。     

混菌固态发酵豆渣生产菌体蛋白的研究

对以豆渣为原料,利用混菌固态发酵技术生产菌体蛋白饲料工艺进行了研究。通过L9(3^4)正交试验考察了培养基组成、接种物配比、初始pH值以及培养温度等因素的影响。结果表明：当培养基组成为豆渣：麸皮=8：2,接种物配比为黑曲霉：绿色木霉：啤酒酵母：产朊假丝酵母=1：1：1：3,调节初始pH值5．5,32℃培养72h,豆渣粗蛋白质含量达到28．47％。     

苹果渣发酵生产菌体饲料蛋白的工艺条件研究

以有效微生物群（EM菌液）为发酵剂,对苹果渣进行固态发酵,生产菌体饲料蛋白。采用L27（313）正交设计试验和单因素试验对固态发酵条件进行了研究,以得到较合理的培养基。研究结果表明,苹果渣发酵的最佳培养基组成为：蔗糖添加量3%,含水量30%,培养温度25℃,接种量0.8%,发酵时间4d。发酵产物的粗蛋白含量由5.82%提高到21.28%,粗脂肪和粗灰分也有所提高,营养价值得到了改善。     

重组人白细胞介素-4融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达的影响因素

目的　提高人重组白细胞介素 4 (rhIL 4 )在大肠杆菌中的表达量。方法　研究rhIL 4的体外诱导条件 ,包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度、菌体密度对表达量的影响。结果　最佳表达条件是诱导时间为 4h ,诱导温度为 4 2℃ ,A6 0 0 为 0 7～ 1 0 ,而IPTG的浓度对表达量无显著影响。结论　诱导时间、诱导温度和菌体密度的优化能提高外源基因在大肠杆菌中的表达产量。     

牛布氏杆菌特异性抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

目的建立牛布氏杆菌特异性抗体间接ELISA检测方法,并进行初步应用。方法用大肠杆菌表达的牛布氏杆菌重组BP26蛋白作为检测抗原,用棋盘滴定法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立间接ELISA方法,并进行验证。采用建立的间接ELISA方法与传统的试管凝集试验同时检测116份血清样品,评价二者的符合率。结果间接ELISA的最佳反应条件为:抗原包被量5μg/孔;待检血清稀释倍数1∶200,作用时间60min;酶标二抗作用时间60min;封闭液为5%BSA,作用时间45min。S/P值≥0.363者判为阳性,S/P值≤0.291者判为阴性,介于两者之间判为可疑。该方法精密性良好,特异性较强,敏感性较高,与传统的试管凝集试验检测结果的符合率为93.3%。结论已成功建立了检测牛布氏杆菌特异性抗体的间接ELISA方法,为布氏杆菌病的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

重组蛋白中吐温80含量硫氰酸铵钴显色检测法的改进及验证

目的 改进重组蛋白中吐温80含量的硫氰酸铵钴显色检测方法,并进行验证.方法 将《中国药典》四部(2020版)中收录的吐温80含量检测方法,即硫氰酸钴铵比色法中的二氯甲烷调整为4.00g,硫氰钴铵溶液浓度提高3倍,并对改进后的方法进行专属性、线性范围、定量限、重复性、日间精密性、准确性验证.采用该方法检测3批重组人源抗h...     

重组蛋白制品中大肠埃希菌宿主蛋白残留测定试剂盒的适用性验证

目的验证重组蛋白制品中大肠埃希菌宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留检测试剂盒的适用性。方法对淄博云桥生物技术有限公司制备的大肠埃希菌HCP的ELISA检测试剂盒进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,同时进行基质干扰试验和稀释回收试验。采用该试剂盒及一款市售进口试剂盒分别对本公司制备的3批重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)制品原液及纯化工艺中间样品的HCP残留量进行检测。结果试剂盒可特异性检测大肠埃希菌HCP残留量;线性范围为3.33~810 ng/ml;检测限和定量限均为3.33 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间CV均16%;低、中、高3个浓度样品的回收率分别为113.1%、113.7%和97.5%;原液样品基质对测定基本无影响,原液基质中DTT含量5 mmol/L对测定结果的影响在可接受范围内;原液样品在测定HCP含量时存在干扰,稀释3倍时,干扰最小;该试剂盒与另一款市售试剂盒检测3批rbFGF制品原液及纯化工艺中间样品的HCP残留量基本一致。结论该试剂盒具有良好的特异性、灵敏度、准确性、精密度和线性,可用于本公司重组蛋白制品中大肠埃希菌HCP残留的检测。     

液态混菌发酵豆渣生产多酶菌体蛋白的研究

利用黑曲霉(Aspergillusniger)、绿色木霉(Trichodermaviride)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和产朊假丝酵母(Candiautilis)等菌种,对液态混菌发酵豆渣生产多酶菌体蛋白饲料工艺进行了研究。结果表明当培养基主辅物料质量比为豆渣∶麸皮∶豆粉=8∶2∶0.5,初始pH值为5.5,菌种体积配比为黑曲霉∶绿色木霉∶啤酒酵母∶产朊假丝酵母=1∶1∶1∶3,在32℃下培养72h,豆渣粗蛋白质含量达到29.2%,滤纸酶活为182.7IU/g(干产品),而且产品有啤酒的醇香。     

酵母中表达基因工程重组蛋白药物的研究进展

本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。     

1,3-丙二醇发酵液中菌体、蛋白及色素的脱除方法

本发明公开了一种从1，3-丙二醇发酵液去除菌体、水溶性蛋白及色素的方法。该方法包括：向1，3-丙二醇发酵液中加入絮凝剂，搅拌后，静置沉降，分离得到絮凝后的发酵清液；将发酵清液流过树脂柱，其中的水溶性大分子蛋白及色素物质被吸附到树脂表面，得到澄清的发酵液。本发明方法采用絮凝法与树脂吸附分离法相结合，不但能除去发酵液中的菌体，还能除去发酵液中存在的水溶性蛋白及色素物质。所使用的树脂为交联苯乙烯系非极性大孔吸附树脂．对水溶性蛋白及色素的选择性高，使1，3-丙二醇发酵液中菌体和蛋白能在同一过程中脱除，而且去除得更为有效彻底，为后续的脱盐工序及蒸馏过程创造了良好的条件。     

应用ELISA竞争法检测疫苗制品中残余的牛血清白蛋白

目的 应用ELISA 竞争（cELISA）法检测残余牛血清白蛋白（ESA）。方法 以BSA免疫家兔，获得高滴度的抗BSA血清；以BSA包被酶标板作为固相抗原，以梯度稀释的BSA为游离抗原，二者竞争结合抗体，以游离抗原浓度对数作为横坐标，相应吸收值为纵坐标作标准曲线，由对应样品的吸收值，可以求得样品中BSA含量。结果 当检测200、50、20和5ng/ml样品时，其试验内变异系数分别为4．5％、7．8％、5．8％和 14％，试验间变异系数分别为3．4％、8．8％、3.3％和30％。本试验还证明人血清白蛋白与牛血清白蛋白的交叉反应较低。结论cELISA可初步用于疫苗中残余BSA含量的检测。     

一种从1,3-丙二醇发酵液中去除菌体及蛋白的方法

本发明公开了一种从1,3-丙二醇发酵液中去除菌体及蛋白的方法。该方法包括加絮凝剂、搅拌、静置沉降和分离，其中所用的絮凝剂有主絮凝剂和助絮凝剂：所用的助絮凝剂为PAC—PDMDAAC共聚物。本发明与现有技术相比，具有以下优点：（1）采用双絮凝剂絮凝能使1，3-丙二醇发酵液中菌体和蛋白的去除更为有效彻底：（2）本发明方法可直接处理发酵液，无需另行调节pH，为后续的脱盐工序及蒸馏过程创造了良好的条件；（3）过程简单，便于实施。     

小鼠接种重组乙型肝炎疫苗引起的细胞因子释放反应

目的观察小鼠接种重组乙型肝炎疫苗(rHB)后,脾T淋巴细胞释放细胞因子的免疫反应。方法80只BALB/c小鼠随机分为4组,1组小鼠接种5μg佐剂,2、3、4组小鼠分别腹腔接种0·65、1·25和5·0μg的rHB,其中一半小鼠2周后加强免疫1次。分别在初次免疫后4周和加强免疫后2周,分离小鼠脾T淋巴细胞,体外用rHB刺激,检测释放IL-2及IFN-γ的水平。结果单次免疫后和加强免疫后各组IL-2和IFN-γ均显著升高,且有随剂量增加而升高的趋势。结论小鼠接种rHB后,脾T淋巴细胞分泌IL-2及IFN-γ显著增加,并与接种剂量密切相关。     

细胞ELISA法的建立及应用

应用刀豆素蛋白A为结合剂将细胞结合于酶标板的细胞ELISA法(C-ELISA),检测几种抗细胞膜抗原单抗和筛选抗细胞膜抗原单抗,均显示具有较好的特异性和重复性。在筛选杂交瘤上清时,该法较间接免疫荧光法敏感、简便。     

酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量试剂盒的质量验证

目的验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量。方法选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的最佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性。结果天坛试剂盒的最佳检测区间为2.5~20ng/ml,试验间精密度分别为0.37%~9.79%、1.25%~5.57%和0.70%~5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20ng/ml3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.0518);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P<0.0001)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P<0.0001),直线回归方程为y=0.629x-13.77。结论天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测。     

氨基酸分析在重组蛋白类生物制品质量控制中的应用

氨基酸分析是蛋白质一级结构分析的有力工具,氨基酸分析在重组蛋白类生物制品的质量控制中发挥着重要作用,其应用主要包括:氨基酸含量及组成分析、蛋白精确定量及消光系数计算,为重组蛋白的结构确证及功能研究提供依据。本文就氨基酸分析在重组蛋白类生物制品质量控制中的应用作一综述。     

重组蛋白的体外复性技术研究进展

概要介绍了重组蛋白体外复性的意义,该技术的难点及现有复性方法的局限性.并重点阐述了色谱复性和分子伴侣体外复性技术的原理、特点及在基因工程药物生产过程中的应用,结果表明新型重组蛋白复性技术可将复性收率提高至80%-100%,有望解决基因工程产业化的关键技术.