慢生型大豆根瘤菌nfeC基因的克隆及序列分析

通过亚克隆,将重组质粒pGXN201中与nfeC基因同源的片段定位在4kbClaI XbaI片段上,序列分析表明该片段全长4038个碱基,该片段上含有一个完整的阅读框架,该阅读框架编码一个含275个氨基酸的多肽,与已报道的nfeC基因编码的蛋白质具有93%的同源性。     

植物抗病基因的克隆及其在作物遗传改良中的意义

介绍了植物抗病基因的克隆及序列分析的研究进展，阐述了植物抗病基因在作物遗传改良中的应用。     

小冰麦异附加系TAI-27中附加染色体上 NBS同源序列的扩增

植物对病虫害的抗性主要是由抗病基因（resistance gene,R)决定的。目前已经克隆了20多个R基因,大部分都属于NBS－LRR类,这类基因编码NBS（nucleotide binding site,NBS)和LRR(leucine-rich repeat,LRR)两个比较保守的结构域。植物的NBS有几个保守区,本文根据其中的P－loop和GLPL两个保守区设计了简并引物,通过PCR扩增NBS序列。在PCR扩增中使用的DNA模板是从小冰麦异附加系TAI－27中微分离的附加的单条染色体,这条染色体上携带BYDV（barley yellow dwarf virus,BYDV)抗性基因。PCR扩增产物主要有三条带,200bp,400bp和950bp,将其中的200bp(nbsA)和400bp(nbsB)克隆到pGEM T-vector上并分别测序。3个nbsA克隆的测序结果完全一致;对nbsB的60多个克隆的不同酶切分析,只发现了一个克隆的酶切特性与其他不同。所以说,以单条染色体为模板PCR扩增产物组成比较简单,省去了RFLP作图的许多工作,可以为克隆R基因提供特异性探针。本文的实验设计将染色体微切割和微克隆技术与基因克隆联系在一起,为克隆R基因提供了一条捷径。     

快生型大豆根瘤菌3.7Kb增效片段的亚克隆与序列分析

利用柯氏质粒ｐＬＡＦＲ１为载体构建了快生型大豆根瘤菌Ｂ５２菌株的基因文库，并通过植物结瘤试验筛选到一个３．７Ｋｂ增效片段，将其导入慢性型大豆根瘤菌２２１０，能提高其共后固氮效率。     

牛as1乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析

应用ＰＣＲ技术从国内小牛胸腺基因组ＤＮＡ中克隆了１．０ｋｂ牛ａｓ１酪蛋白基因的上游调控序列，并进行了序列分析，发现有少量的缺失或突变，其ＴＡＴＡ框和ＣＡＡＴ框均未发生变异，表明已成功克隆了其启动子序列，这为乳腺定位表达的研究奠定了基础。     

牛αsl乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析

应用ＰＣＲ技术从国内小牛胸腺基因组ＤＮＡ中克隆了１．０ｋｂ牛αｓｌ酪蛋白基因的上游调控序列，并进行了序列分析，发现有少量的缺失或突变，其ＴＡＴＡ框和ＣＡＡＴ框均未发生变异，表明已成功克隆了其启动子序列，这为乳腺定位表达的研究奠定了基础。     

应用荧光原位杂交技术定位水稻的端粒相关序列和BAC克隆

用ＰＣＲ扩增得到的水稻端粒相关序列（ＴＡＳ）Ｔａｓ３和一个ＢＡＣ克隆（ＢＡＣ）为探针，与间期核和中期细胞染色体进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），确定了在染色体上的位置。     

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探

从未成熟的大豆叶中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ（＋）ＳｍａＩ位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为９９．５％和９８．２％。由此，构建了大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体ｐＢｉｎＳＫＴＩ。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获     

斑马鱼ILF2基因的电子克隆分析

利用电子克隆方法,成功获得了ILF2基因在斑马鱼中的同源基因,为进一步研究斑马鱼ILF2基因功能奠定了基础.斑马鱼ILF2基因cDNA全长为1560bp,含有一个编码387个氨基酸的完整开放阅读框架.比较斑马鱼ILF2基因和人ILF2基因,显示两者编码氨基酸序列相似性为87%,核苷酸序列有72%相同.     

人高血压相关基因(HRG-1)编码蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

为了研究一个新的人高血压相关基因HRG－1的编码蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性,使用PCR的方法扩增人HRG－1基因ORF的编码序列,构建了原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达及进行体外活性鉴定,实验结果证明得到了具有生物学活性的人HRG－1原核表达蛋白,且人HRG－1原核表达蛋白具有真核表达蛋白一致的生物学活性。     

大豆蛋白胶黏剂及其胶合板防霉研究进展

目的 改进大豆蛋白胶易霉变、储存时间短,将其作为胶黏剂使用制备的板材性能低等缺点,提高胶合板的使用寿命,使板材的适用范围和领域得以拓宽。方法 通过综述大豆蛋白胶和胶合板易发霉原因,以及近年来国内外在针对大豆蛋白胶和胶合板防霉性能方面的研究进展,分析其改性原理以及仍存在的问题,介绍原子转移自由基聚合（ATRP）法目前在豆胶改性中的应用。结论 采用ATRP法对大豆蛋白胶黏剂进行防霉接枝改性,可在保证胶合强度的同时延长胶合板使用时间,为今后制备具有优良防霉性能的大豆蛋白胶合板以及工业化推广提供新思路。     

节旋藻FACHB341 Rubisco基因部分序列的克隆和分析

以节旋藻FACHB34l为材料，对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析，由此推导出相应的氨基酸序列，并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明：所克隆DNA片段包含Rubisco大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列，长度为2073bp，其中rbcL和rbcX基因之间存在两个转录茎环结构；大小亚基酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例分别为13．14％和14．51％，疏水氨基酸的比例为42．16％；rbcL核苷酸序列与集胞藻PCC6803、Prochlorothrix hallandica、聚球藻PCC630l、Agmenellum quadruplicatum和鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性分别为91．7％、79．9％、74．8％、77．2％和76．1％；rbcS核苷酸序列与鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性为67．6％，而与PCC630l和集胞藻PCC7002同源序列的相似性分别为30．1％和63．8％。     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离,并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果,且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定,以及对该序列的同源性分析后,设计出相应引物,用PCR方法扩增了该菌株的碱性蛋白酶基因AP。测序结果表明,该克隆基因全长1588bp,有一个全长1149bp的编码区序列,推测蛋白质序列长383个氨基酸残基,成熟肽分子量为27．8kD。推测的成熟蛋白酶N′-末端具有与DHAPN′-末端完全匹配的序列,说明克隆到的基因为脱毛蛋白酶基因。同源性分析表明,该基因序列与已报道的其他碱性蛋白酶基因有较高的同源性。     

嗜冷杆菌EastSeaG5-1415脂肪酶基因的克隆和序列测定

从东海深海底泥中筛选到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌EastSeaG5-1415,经鉴定为嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola。将其染色体DNA用Sau3AI部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2～10kb的。DNA片段,用Klenow大片段酶半补齐,与用Sal I酶切半补齐的质粒pUC19连接后,转化E．coli．JM109构建基因文库。用平板测活法从基因文库初步筛选到两株产碱性脂肪酶的阳性克隆,采用ELISA反应进一步鉴定。序列测定分析表明,两个重组质粒中都包含长度为951bp的碱性脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)和上游基因调控序列。此片段编码有317个氨基酸组成的酶,计算分子量为35000 Dal。通过Southem杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola EastSeaG5-1415基因细。     

纳米TiO2对四膜虫多药耐药基因和热激蛋白基因的影响

为探讨纳米TiO2在分子水平对生物的影响,运用RT—PCR半定量法研究不同浓度纳米TiO2对四膜虫多耐药（MDR1）和热激蛋白70（HSP70）基因表达活性的影响,结果表明,处理组中MDR1基因表达均高于对照组,且差异极显著（p〈0．01）;HSP70表现为高浓度抑制、低浓度诱导,表达量在低浓处理组中高于对照组,差异显著（p〈0．05）。随着纳米TiO2浓度的升高,处理组中HSP70表达量不断下降,当纳米TiO2浓度为100mg·L-1和500mg·L-1时,HSP70的表达量显著低于对照组中的表达量（p〈0．05）,因此,纳米TiO2颗粒可以从分子水平影响梨形四膜虫,但确切的毒理还需要进一步的研究探索及验证。     

Association between the Phenotypes and Genotypes of Antimicrobial Resistance in Haemophilus parasuis Isolates from Swine in Quang Binh and Thua Thien Hue Provinces,Vietnam

Haemophilus parasuis (H. parasuis) is one of the bacterial pathogens of great concern as it causes huge economic losses to the swine industry worldwide. One of the reasons why the control of H. parasuis has failed is the increase in antimicrobial resistance (AMR). The country of Vietnam has the second-largest pig production in Asia. However, there is still a lack of data about the AMR prevalence of H. parasuis in Vietnam. The purpose of this study is to investigate the prevalence of AMR and analyze the association between AMR and AMR genes (ARGs). The H. parasuis strains used in this research were isolated from swine in the Quang Binh and Thua Thien Hue Provinces, Central Vietnam, as reported in our previous study. All of the strains were tested for AMR against 25 antibacterial agents using the broth microdilution method and for the presence of ARGs using the polymerase chain reaction (PCR) method. The tested strains were shown to have a high frequency of resistance to trimethoprim/sulfamethoxazole (94.6%), followed by resistance to colistin, chloramphenicol, gentamicin, penicillin, lincomycin, and amoxicillin. The most prevalent ARGs in these strains were bla_TEM-1 (94.6%), int (76.8%), gyrA (58.9%), and rmtD (50.0%). Cefuroxime, chloramphenicol, and tobramycin resistances were strongly correlated with the presence of the ARGs bla_ROB-1 (odds ratio (OR) = 26.3, 95% confidence interval (CI) 2.7–255.7, p = 0.002), catl (OR = 25.1, 95% CI 2.4–258.9, p = 0.004), and strB (OR = 23.5, 95% CI 2.6–212.6, p = 0.001), respectively. This study reveals for the first time the current situation of H. parasuis AMR in Central Vietnam, which is helpful for the clinical control of this disease, as well as for the development of policies and clinical practice guidelines to reduce AMR in swine production in Central Vietnam.     

基因表达系列分析的研究进展及应用

简要概括了SAGE的基本原理和实验程序，侧重对该技术的程序修改和完善以及该方法最近在筛选候选新基因方面的应用进行综述报道。     

快速cDNA文库筛选和淀粉合成酶基因的分离与鉴定

建立了一种以PCR为基础的快速筛选cDNA文库的方法。该方法利用96孔板和一对特异的引物,逐级从cDNA文加筛选目标克隆,最终获得目标DNA片段。与同位素杂交筛选方法相比,该方法具有快速、简单、省时等优点,数日内即完成目标片段的克隆;同时,还可极大地降低实验费用,且无需使用同位素。本文利用这一方法从水稻南粳隆;同时,还可极大地降低实验费用,且无需使用同位素。本文利用这一方法从水稻南粳隆;同时,还可极大地降低实验费用,且无需使用同位素。本文利用这一方法从水稻南粳37未成熟种子的cDNA文加筛选出了完整的水稻可溶性淀偻合酶基因cDNA序列。我们认为此方法对于筛选其他类型文库同样有借鉴意义。     

高精密小电阻测量方法及测量结果的不确定度评定

在高精密小电阻的测量过程中,由于接触电阻、测量线电阻及测量条件等都会对其测量结果产生不可忽视的影响,因此,选择合适的测量方法对提高测量结果的置信度尤为重要。本文着重介绍了用恒流源和数字电压表间接测量高精密小电阻的具体方法,对其测量结果的不确定度进行了分析与评定。     

行走前后对地板抗滑性的主观评量分析

目的调查行走前后地板抗滑性主观评量的影响因素及二者之间的关系。方法设计了4因子实验。实验因子包含地板粗糙度、地板表面情况、鞋底材质和照明情况。被试在步道待试区对地板感知抗滑性给出1(非常滑)-5(不滑)的评分;待走过实验步道后,再次对地板感知抗滑性给出评分,并对自觉滑动感(PSOS)做出评分。运用SAS分析软件对得到数据进行统计分析。结果地板粗糙度、地板表面情况和照明水平对实验前主观抗滑性存在显着的影响(P0.0001);鞋底材质、地板粗糙度和地板表面情况对实验后主观抗滑性及自觉滑动感(PSOS)存在显着的影响;地板粗糙度与实验前(r=0.38,P0.0001)与实验后(r=0.52,P0.0001)的主观抗滑性均为正相关;实验后的主观抗滑性与自觉滑动感为高度负相关(r=-0.84,P0.0001)。结论行走前地板主观抗滑性显著的受地板粗糙度、地板表面情况、照明水平的影响;行走后地板主观抗滑性显著的受鞋底材质、地板粗糙度和地板表面情况的影响。