恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比（内参）的应用作一综述。     

配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的风险与控制

阪崎肠杆菌是20世纪发现的一种对婴幼儿具有严重健康威胁的致病微生物,在婴幼儿配方奶粉的原料和生产过程中都有污染阪崎肠杆菌的风险。准确对配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的污染风险进行评价,并相应制定科学有效的风险控制措施,对于降低风险、提高产品品质、保障食品安全具有重要意义。本文综述了配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的存活规律、配方奶粉原料中可能存在的被阪崎肠杆菌污染的风险,以及通过环境、空气、设备以及制度操作等方面对阪崎肠杆菌风险进行控制的各种措施。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比(内参)的应用作一综述.     

奶粉中阪崎肠杆菌的分离与鉴定

目的了解某地区婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染情况,为我国制定婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的限量标准及为政府加强对婴儿配方奶粉的管理提供科学依据。方法常规生理生化鉴定法和实时荧光PCR法。结果检出2株阪崎肠杆菌。结论我国市售的婴儿配方奶粉中存在少量的阪崎肠杆菌污染。     

应用核酸层析技术快速检测奶粉中阪崎肠杆菌的研究

结合PCP与胶体金免疫层析试纸条技术建立了核酸层析检测技术用于奶粉中阪崎肠杆菌的快速检测.该技术根据寡-1,6-葡萄糖苷酶基因设计引物,并分别标记生物素和地高辛,通过试纸条上肉眼可见的红色条带对扩增结果进行判断.通过11株阪崎肠杆菌及27株常见致病菌的检测结果说明其特异性强,阪崎肠杆菌纯菌培养检测灵敏度达到103 mL-1,人工污染样品检测限达到0.08 g-1,检测奶粉样品时与传统方法(GB/T 4789.40-2010)相比,无显著性差异(x2=0,P＞0.05).该方法灵敏度高、快速、特异性强,可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定.     

利用环介导等温扩增技术对奶粉中阪崎肠杆菌进行检测

利用阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区(ITS)序列,在比较阪崎肠杆菌与其近源株ITS序列的基础上,设计了4条阪崎肠杆菌LAMP检测特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌LAMP检测方法.用15株阪崎肠杆菌,61株近源菌验证试验表明,所建立的LAMP方法准确且灵敏度高.加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为1.2 CFU/100 g.新建的LAMP方法与FDA BAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合.     

奶粉中阪崎肠杆菌的污染及快速检测方法的研究

目的：了解福建省市售婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染状况、污染途径并寻找快速准确的检测方法。方法：应用分离鉴定、PCR 和荧光PCR 等方法检测,分离鉴定采用阪崎肠杆菌显色培养基和全自动微生物生化仪。结果：阪崎肠杆菌在192 份市售婴幼儿配方奶粉中的检出率为1.56%,在60 份原料奶粉中的检出率为13.33%,30 份生产车间环境样本均未检出。结论：福建省市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌的安全隐患,某工厂奶粉中阪崎肠杆菌的污染主要来自原料奶粉。荧光PCR 和显色培养基可用于阪崎肠杆菌的快速筛选和分离。     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法的研究

建立了奶粉中可致婴幼儿高死亡率的阪崎肠杆菌的PCR和荧光PCR检测方法。利用细菌16S和23SrDNA的保守区设计通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列(ITS)进行扩增和测序,在比对阪崎肠杆菌ITS序列的基础上,设计了11条PCR和荧光PCR检测引物,组合成30对PCR引物,并筛选出一对种特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法。用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌株验证实验表明,本文所建立的PCR和荧光PCR方法特异性强;加菌实验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为(2.2～5.4)CFU/100g,灵敏度高;新建的PCR和荧光PCR方法与FDABAM(美国食品及药品管理局微生物分析手册)方法比对实验表明,三种方法的检测结果完全一致。由于PCR和荧光PCR检测方法快速、可靠,因此可替代传统检验方法。     

奶制品中分离的阪崎肠杆菌温度耐受性的研究

对从奶制品中分离的65株阪崎肠杆菌的培养特征、生化鉴定、温度耐受性等进行分析研究,比较来源不同的菌株在生物学特性方面是否存在差异,了解从奶制品中分离的阪崎肠杆菌的热耐受情况、60℃存活时间以及4℃低温的耐受情况。结果表明,阪崎肠杆菌热耐受性与菌落形态特征、表型存在一定的相关性,65株菌都表现较为耐热和能够耐受4℃低温3个月以上。     

环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌

利用环介导等温扩增方法的快速、简便等优点,建立一种检测乳中阪崎肠杆菌的方法。以阪崎肠杆菌的OmpA序列为靶基因,设计特异性引物。优化并建立LAMP检测乳中阪崎肠杆菌的方法。结果表明,LAMP检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度为3.7×101cfu/mL,其灵敏度是PCR方法的10倍。人工污染阪崎肠杆菌灭菌乳的检测限为4.3×101cfu/mL。对23株致病菌进行特异性实验,特异性良好。该方法具有特异性强、灵敏度高、设备简便、耗时短等优点,在食品检测中具有良好的应用前景。      

羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌分离鉴定及其毒力基因和药敏检测

目的:分析羊奶粉生产环节阪崎肠杆菌的污染状况,分离株毒力基因携带情况以及耐药性。方法:采自某羊奶粉加工厂空气过滤车间、液态奶车间、流化床车间、喷雾干燥车间和包装车间的生产样品及环境样品共180份,按国标GB4789.40-2010和PCR方法进行阪崎肠杆菌的分离鉴定;采用PCR方法检测cpa、hly、sip和omp X毒力基因;采用琼脂稀释法测定药敏性。结果:27个采样点中有14个阪崎肠杆菌阳性点,检出率为51.9%;180份样品中有29份检出阪崎肠杆菌,污染率为16.1%;阳性样品主要为粉状和棉签涂抹样品,污染率分别为23.5%和16.9%。毒力基因检出率为100%,毒力基因类型有cpa-omp X和cpa-hly-omp X,检出率分别为79.3%,20.7%。29株菌对利福平、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、头孢西丁钠、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药率依次为100%,75.9%,6.9%,3.4%和3.4%;对其它11种抗生素均敏感,多重耐药率为6.9%。结论:羊奶粉加工厂存在阪崎肠杆菌的污染。空气流动、粉尘污染、操作人员交叉污染及生产设备清洗消毒不彻底可能是加工过程中该菌的污染途径。分离株毒力基因携带率较高,对大多数供试抗生素敏感,出现多重耐药现象。     

液态奶中分离的阪崎肠杆菌生物学性状研究

对从巴氏消毒奶、高温灭菌奶中分离的阪崎肠杆菌菌株的培养特征、生化反应、耐热性、抗药性、毒力等生物学性状与标准株进行了比较研究,分析各生物学性状之间的相关性。     

Enterobacter sakazakii survives spray drying

Four strains of Enterobacter sakazakii were inoculated into 35% reconstituted skim milk at 10⁷ and 10² cfu/g dry wt. After spray-drying in a Buchi mini spray drier (inlet 160°C and outlet 90°C), the resulting powders were analysed for E. sakazakii by enrichment and enumeration. In all cases, E. sakazakii survived the spray drying process and were detected in the powders with a low inoculum and enumerated in all the powders with the high inoculum for at least 12 weeks. The results emphasize that the controls in place to prevent E. sakazakii from getting to the spray drier are essential.     

柳江县市售国产婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染监测分析

目的 了解市售国产婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染状况,为消费预警提供科学依据。方法 分别按2011、2012年版国家食源性致病菌监测工作手册对市场上11家国内生产的32份婴幼儿配方粉进行检测。结果 32份样品检出2株阪崎肠杆菌,检出率为6.25%。其中婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检出率4.35%(1/23);婴幼儿谷物食品中阪崎肠杆菌检出率11.11%(1/9)。结论 柳江县市售部分婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染,食用安全隐患不容忽视,应加强监测力度,预防和控制阪崎肠杆菌引起的食物中毒事件发生。