d-Penicillamine2,5-enkephalin作为底物考察三明治大鼠原代肝细胞的转运体功能研究

目的: 通过液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)法测定d-Penicillamine2,5-enkephalin (DPDPE)在肝细胞和Hank's缓冲液中的浓度,研究DPDPE作为底物用于“三明治”培养大鼠原代肝细胞(SCRH)的转运体功能。方法: 将SCRH与溶于Hank's缓冲液的DPDPE共温孵,采用LC/MS/MS法测定细胞内蓄积的和外排到缓冲液中的DPDPE浓度,用于评价模型药物α-萘异硫氰酸酯(ANIT)对参与DPDPE摄取的Oatp和负责DPDPE外排的Mrp2的转运功能的影响。结果: 建立的样品处理和测定方法能够满足体外转运实验需要的灵敏度和线性范围,在Hank's缓冲液中线性范围为0.5~50 ng/mL(r²=0.9995),在细胞基质中线性范围为 0.1~5 ng/well(r²=0.9997),样品处理操作简便。日内日间精密度(RSD)均小于15%;提取回收率大于65%。ANIT可抑制DPDPE在SCRH胆管侧的外排及基底侧的摄取,对基底侧外排无显著影响。结论: 该分析方法选择性好,灵敏度高,操作简便,并成功地用于将DPDPE作为探针底物研究SCRH模型上转运体的功能。     

体外肝细胞三明治培养动态变化及其在药源性肝损伤中的应用

目的: 本文采用三明治构型培养原代大鼠肝细胞,综合观测其体外极性的动态形成过程,为体外药物肝毒性研究建立合适的评价模型。方法: 三明治构型培养Wistar大鼠肝细胞,选取不同培养时间细胞检测肝细胞分泌功能,同时采用PCR、免疫荧光及跨上皮细胞电阻实验观测肝细胞极性结构基础紧密连接的动态变化过程。结果: 肝细胞在“三明治夹层”中培养72 h后具有胆小管分泌功能,同时紧密连接处分子ZO-1与Occludin结构为促使极性形成,其mRNA表达与通透性均产生一个先升高后降低的变化趋势;ZO-1免疫荧光定位发现不同培养时间随着极性形成其结构分布也有所不同。结论: 肝细胞三维培养极性形成是一个动态变化的过程,了解这一动态变化过程对药物肝毒性检测及其毒性机制探讨具有重要的指导意义。     

类风湿关节炎下转运体表达及活性的变化

机体发生炎症时会释放大量的炎性细胞因子,并伴随药物转运体表达和活性的改变。转运体的表达和活性改变时,会影响药物的吸收、分布、消除,机体内血药浓度、蓄积情况、药物的治疗有效性等也会发生改变,甚至产生多药耐药、药物-药物相互作用等现象。类风湿关节炎是一种常见的炎症疾病,会释放大量的炎性细胞因子,伴随转运体表达和活性的改变,从而影响治疗效果,因此研究炎症状态下药物转运体表达和活性的改变至关重要。本文就类风湿关节炎下转运体的变化进行综述,以期为类风湿关节炎的治疗提供新的方向。     

新型三明治覆盖法提高球化剂中Mg的吸收率

对冲入法球化处理时,球化剂、孕育剂、覆盖剂的装包方法进行了介绍.合理称重后,采用分批分层,类似三明治形状的装包顺序,并采取逐层捣实、稍加覆盖的操作方法,可延缓球化反应起爆时间,延长球化反应时间,可使球化剂Mg的吸收率大幅度提高,球铁最终力学性能及金相组织均得到明显改善.     

葛根素对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4的影响

目的: 探讨葛根素对高糖高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达水平及其转位机制的影响。方法: 实验大鼠随机分为正常组、模型组和葛根素组,每组10只。模型组和葛根素组大鼠喂以高糖高脂饲料,4周后葛根素组大鼠予以葛根素100 mg·kg^-1·d^-1腹腔注射。以Western blot 法检测各组大鼠脂肪细胞GLUT4 的含量,定期检测实验大鼠的体质量、血甘油三酯和胆固醇、空腹血糖及血浆胰岛素水平,并计算胰岛素敏感指数。结果: 模型组大鼠脂肪细胞内膜GLUT4含量较正常组减少38.72 %(P<0.05),细胞外膜减少21.91 %(P<0.05)。给予葛根素治疗6周后,大鼠脂肪细胞内膜GLUT4 的含量与模型组相比无明显变化,而细胞外膜GLUT4含量增加21.46 %(P<0.05)。结论: 葛根素可提高胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞GLUT4蛋白表达水平,且能够改善其转位机制,从而加强葡萄糖的摄取和利用。     

考虑褶皱和三明治结构的蜻蜓翼自然频率及振型分析

为探究蜻蜓翼的优异结构进而对扑翼飞行器的设计提供技术借鉴,因此利用有限元法对蜻蜓翼二维模型、考虑褶皱和翅脉三明治结构的三维模型的自然频率及振型进行了分析。模态分析结果表明：褶皱结构可以显著提高蜻蜓翼的自然频率,翅脉的三明治结构会略微降低蜻蜓翼的抗弯、抗扭性能,考虑褶皱和三明治结构的蜻蜓翼一阶自然频率远大于蜻蜓的振翅频率,从而保证蜻蜓飞行不会发生共振现象。进一步分析了蜻蜓翼褶皱简化模型前三阶自然频率随起皱高度以及翅脉中蛋白质比例的变化曲线图,表明在一定范围内随起皱高度增大,模型各阶自然频率显著增加,但达到特定起皱高度后反而不利于模型的抗振性能。随着蛋白质层占比的增加,模型各阶频率呈递减的趋势,并以频率的下降快慢得到了蛋白质含量较佳的比例。本研究有助于解释蜻蜓翼的完美结构表现,并为扑翼设计提供借鉴。     

梯度三明治钎料钎焊过程组织演变及力学性能分析

三明治复合钎料是实现硬质合金与钢可靠钎焊连接的重要技术,复合层间及其与基体间的界面层组织形态对力学性能有着重要影响.系统分析了不同钎焊温度、时间条件下梯度三明治复合钎料钎缝组织演变规律,分析了影响力学性能的关键因素.试验结果表明,梯度三明治复合钎料与钢和硬质合金基体界面形成分为4个阶段：界面组织形成、长大、溶合、重排.梯度钎料中间CuMn₂层随着保温时间的延长,由初始连续状逐渐变为孤立的小岛,周围被低Mn铜固溶体包围;继续延长保温时间,CuMn₂层消失,整个钎缝由铜固溶体、银固溶体和银铜共晶组成.钎缝抗剪强度在780℃、保温2.5 min时达到最高285 MPa,Co,Ni元素此时发生长程扩散,聚集在中间层CuMn₂附近,提高了CuMn₂中间层强韧性,在断口韧窝的根部分布着Co基颗粒强化相;进一步延长保温时间,Co,Ni等钎缝强韧化元素开始分散,钎缝组织粗化,强度降低.     

三明治结构中T形焊接接头力学性能测试分析

提出双剪切试验模型和T形接头的弯矩试验模型,用于测定焊缝及接头在不同工作应力状态下的不均匀变形和失效过程,并利用有限元计算对接头中焊缝变形及应力状态进行分析.结果表明,金属三明治板在承受弯矩载荷时面板和芯板连接处的焊接接头主要承受平行于面板的剪应力和弯矩作用;随着加载,损伤起始于焊缝焊根处,并向纵深扩展.针对接头失效分析,试验与数值计算得到了较统一的结果.     

地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制

目的: 探讨地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制。方法: 取本院治疗并分娩的早产孕妇160例,随机分为对照组和地塞米松组,各80例。随机选取两组各10例胎盘组织样品,采用免疫组织化学检测胎盘生乳素（human placental lactogen,HPL）蛋白。选取人绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞株纳入机制研究,根据转染载体的不同分为4组,pcDNA3.1组：JEG-3细胞转染对照载体pcDNA3.1;pcDNA3.1-GRα组：JEG-3细胞转染GRα过表达载体pcDNA3.1-GRα;Control siRNA组：JEG-3细胞转染Control siRNA;GRα siRNA组：JEG-3细胞转染GRα siRNA。分别利用CCK-8法检测胎盘细胞增殖、TUNEL法检测细胞凋亡程度、检测线粒体膜电位、检测胎盘细胞葡萄糖摄取量、荧光分子探针测定胎盘细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）的含量及实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）检测糖皮质激素受体α（glucocorticoid receptor-α,GRα）、葡萄糖转运蛋白（glucose transporter,GLUT）的相对表达量。结果: 对照组的HPL强阳性细胞多于地塞米松组。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-GRα组的细胞增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量显著升高（P<0.05,P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显降低（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量显著上调（P<0.01）。与Control siRNA组比较,GRα siRNA组细胞的增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量明显下降（P<0.05, P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显升高（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量均显著下调（P<0.05）。 结论: 地塞米松能够抑制胎盘对葡萄糖的转运功能,并且极有可能通过ROS/AMPK路径实现这一调控。     

激光焊接三明治板T形接头弯曲变形及失效研究

针对低合金钢CCS－B为母材的I型三明治板T形接头,通过一种侧向弯曲加载试验装置进行了加载试验。采用微距摄像技术对T形接头的变形及失效过程进行跟踪拍摄,利用材料试验机记录整个加载动力学响应过程,并对T形接头弯曲过程进行模拟分析。卸载后,对接头断口进行SEM观察。结果表明,T形接头屈服强度及极限强度分别为337MPa,501MPa;接头裂纹起裂位置是位于芯板中性轴上端焊缝连接处间隙的外侧,并且随着加载进行,向焊缝中心扩展;当连接处屈服区域宽度超过连接处芯板宽度的1／3时,接头达到屈服强度;当其超过1／2时,接头达到承载极限并快速失效。     

丹红注射液对3种转运体的体外抑制作用研究

目的:初步研究丹红注射液对药物转运体Na+-牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）、有机阴离子转运多肽（OATP）和有机阳离子转运体1（OCT1）的体外抑制作用。方法:将新鲜的人原代肝细胞随机分为3组：实验组（7个不同含量的丹红注射液0.03%、0.06%、0.12%、0.25%、0.50%、1.00%和2.00%）,NTCP、OATP和OCT1分别对应的阳性药物（环孢素A溶液10 μmol/L、利福霉素200 μmol/L、维拉帕米溶液20 μmol/L）对照组和空白对照组（汉克斯平衡盐溶液）,分别取160 μL工作溶液置于人原代肝细胞体外孵育体系中预孵育15 min,再加入三合一底物40 μL（牛胆磺酸钠5 μmol/L、瑞舒伐他汀5 μmol/L和1-甲基4-苯基吡啶离子5 μmol/L）共同孵育。用液相色谱-串联质谱法测定细胞裂解液中代表转运体活性的底物含量,并计算其IC50值。 结果:在人原代肝细胞体外孵育体系中,0.12%,0.25%,0.50%,1.00%和2.00%的丹红注射液对OATP的抑制作用与空白对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。丹红注射液对药物转运体NTCP、OATP和OCT1的IC50值分别为≥2.00%、0.85%和＞2.00%,且对OATP的IC50值（0.85%）介于常用日剂量之间。 结论:丹红注射液在体外对人原代肝细胞NTCP和OCT1有较弱的抑制作用,不太可能导致与它们相关的药物相互作用;但是对OATP有较强的抑制作用,提示我们当丹红注射液与其他经OATP转运的药物联用时,要注意药物间的相互作用,避免可能产生的不良反应。     

UPLC法测定大鼠血浆中藤黄酸葡萄糖酯及其药代动力学研究

目的: 建立测定大鼠血浆中藤黄酸葡萄糖酯浓度的UPLC方法,并探讨其在大鼠体内的药代动力学。方法: 以新藤黄酸为内标,建立大鼠血浆中藤黄酸葡萄糖酯的UPLC测定方法。采用该方法测定大鼠单剂量静脉注射2、 4 、8 mg/kg 藤黄酸葡萄糖酯后,不同时间点大鼠血浆中的藤黄酸葡萄糖酯的浓度,对其血药浓度-时间采用DAS 2.1 软件拟合,计算药动学参数。结果: 血浆中藤黄酸葡萄糖酯在 0.05～14.0 mg/L 浓度范围内线性关系良好(r=0.9999) ,定量下限为 0.05 mg/L,提取回收率均大于87%,其日内日间RSD均小于10% ,藤黄酸葡萄糖酯按2、4和 8 mg/kg 静脉给药后,在大鼠体内的t_1/2分别为(16.66±1.56)、(16.81±2.21) 和(17.88±2.05) min,AUC_0-t 分别为(12.92±13.14)、(37.3±18.58) 和 (68.22±20.91) min·mg·L^-1。结论: 所建立的UPLC方法操作简便、快速、专属性强,能满足藤黄酸葡萄糖酯在大鼠体内的药代动力学研究。     

咖啡酸、阿魏酸和香草酸对酪氨酸酶活性的影响

目的:研究咖啡酸、阿魏酸和香草酸对酪氨酸酶活性的影响, 寻找酪氨酸酶抑制剂, 从而为治疗色素增加性皮肤病筛选药物。方法:酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定药物干预前后酪氨酸酶活性, 求出酪氨酸酶抑制率。采用Lineweaver-Burk 双倒数法制得酶动力学曲线, 推断抑制类型。结果:3 种试药中仅香草酸对酪氨酸酶具有抑制作用, 与氢醌比较无显著差异(P >0.05), 咖啡酸、阿魏酸对酪氨酸酶具有上调激活作用。结论:香草酸为良好的混合型酪氨酸酶抑制剂。     

依托咪酯、丙泊酚对2型糖尿病兔胰岛素抵抗的影响

目的: 观察依托咪酯、丙泊酚对2型糖尿病(T2DM)兔胰岛素抵抗(IR)的影响。方法: 18只造模成功的T2DM兔随机分成3组(n=6):对照组(C组)、依托咪酯组(E组)、1%丙泊酚组(P组)。C组输注 0.9%氯化钠,P组输注1%丙泊酚,E组输注依托咪酯。分别在给药开始前(T₁)、给药 2 h(T₂)、4 h(T₃)、6 h(T₄)后及给药结束后 24 h(T₅)抽耳缘静脉血检测空腹血糖(BG)、空腹血浆胰岛素(IN)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、皮质醇(Cor)含量,并用HOMA⁃IR公式计算胰岛素抵抗指数(IRI)=(BG×IN)/22.5。结果: 与C组比较,E组与P组均能明显降低血清BG浓度(P<0.05),且E组的作用更强更持久。E组与P组均能不同程度降低血清TNF⁃α浓度,二者间无统计学差异(P>0.05)。与C组比较,E组与P组在不同的时点明显降低血清IN浓度(P<0.05)。与C组比较,E组与P组均能明显降低血清Cor浓度(P<0.05),且E组的作用更强更持久。结论: 依托咪酯、丙泊酚均能使T2DM兔的胰岛素抵抗降低而提高胰岛素敏感性,依托咪酯较丙泊酚具有更持久的作用时间。依托咪酯、丙泊酚对胰岛素抵抗产生影响可能与二者抑制机体内在及外在的应激反应有关。     

芝麻素对代谢综合征大鼠血糖、血脂及主动脉血管细胞黏附分子-1 蛋白表达的影响

目的:探讨芝麻素对代谢综合征大鼠血糖、血脂及主动脉血管细胞黏附分子-1(VCAM-1) 蛋白表达的影响。方法:高脂高糖诱导大鼠代谢综合征24 周, 于诱导第9 周连续口服芝麻素(120 、60 、30 mg^。kg^{-1 。}d^-1 ) 16 周后, 称大鼠体重、腹部脂肪重量, 测血脂、血糖、血清总抗氧化能力和血清过氧化氢含量。HE 染色观察主动脉病理变化, 免疫组化法观察主动脉VCAM-1 蛋白表达。结果:芝麻素120 、60 mg/kg 组体重与腹部脂肪重量明显低于模型组(P <0.01), TG 、TC 、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 和血糖水平明显降低(P <0.01), 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 水平明显升高(P <0.01) ;主动脉VCAM-1 蛋白表达明显减少, 病理损伤明显减轻;血清与血管总抗氧化能力明显提高, 过氧化氢含量明显减少。结论:芝麻素可以降低代谢综合征大鼠血糖、血脂及主动脉VCAM-1表达, 减轻血管病理损伤, 具有防治动脉粥样硬化的作用。     

右美托咪定对脓毒症大鼠肾功能及血清炎症因子的影响

目的：探讨右美托咪定（Dex）对脓毒症大鼠肾功能及血清炎症因子的影响。方法：选取60只雄性SD大鼠为实验对象,采用随机数字法将其分为空白组、模型组以及Dex组（n=20）,空白组不采取任何措施,模型组及Dex组采用静脉注射脂多糖制备脓毒症大鼠模型。随后Dex组泵注右美托咪定注射液7 μg·kg-1·h-1,15 min后剂量降低至5 μg·kg-1·h-1,持续泵注30 min,模型组泵注等体积生理盐水。术后12 h、24 h、48 h,每组各取6只大鼠,取腹腔静脉血,应用比色法测定三组血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平,免疫酶联吸附实验（ELISA）测定三组血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平。取血后处死大鼠,取右侧肾脏,采用HE染色观察肾组织病理改变情况。结果：术后12 h、24 h、48 h,模型组、Dex组血清Scr、BUN水平均高于空白组（P<0.05）,Dex组低于模型组（P<0.05）;术后12 h、24 h、48 h,空白组Scr、BUN水平差异无统计学意义（P>0.05）,模型组及Dex组Scr、BUN水平依次增加（P<0.05）。术后12 h、24 h、48 h,模型组、Dex组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平均高于空白组（P<0.05）,Dex组低于模型组（P<0.05）;术后12 h、24 h、48 h,空白组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平差异无统计学意义（P>0.05）,模型组及Dex组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平依次增加（P<0.05）。术后12 h、24 h、48 h,HE染色病理切片显示,空白组未见肾脏组织异常改变,模型组与Dex组可见病理改变,且随着时间增加逐渐加重,Dex组各时间点病理改变均较模型组减轻。结论：右美托咪定保护脓毒症大鼠肾功能的作用可能与下调血清炎症因子表达水平有关。     

萘哌地尔衍生物BWYJ对大鼠血压及猫血流动力学的影响

目的: 观察萘哌地尔衍生物BWYJ对高血压模型和正常大鼠血压及猫血流动力学的影响。方法: 分别对高血压和正常大鼠静脉及灌胃给药,观察血压变化;利用麻醉开胸测定猫血流动力学的变化;采用侧脑室给药、猫在体瞬膜神经肌肉标本初步探讨降压机制。结果: BWYJ1.2及2.4mg·kg^-1iv,降低正常及高血压大鼠收缩压(SAP)和舒张压(DAP),且随剂量的增加效应增加,作用时间延长。BWYJ10、20及40mg·kg^-1灌胃给药,降低清醒正常大鼠SAP(最大效应分别下降4.6%、13.0%、16.8%)和DAP(分别下降7.1%、17.9%、20.5%),3h后恢复。BWYJ5、10及20mg·kg^-1灌胃清醒高血压大鼠,降低SAP(下降7.3%、16.5%、20.4%)和DAP(8.5%、14.8%、24.5%),强于正常大鼠且时间明显延长。麻醉猫十二直肠给药,BWYJ2.5mg·kg^-1仅DAP、LVWI降低,BWYJ5mg·kg^-1使SAP、DAP、TPR、±dpdtmax及LVWI明显降低,其他无明显变化。结论: BWYJ静脉或灌胃给药对正常和肾性高血压大鼠产生降压作用,降压作用与中枢、神经节无关。     

NIDDM 大鼠骨骼肌组织GLUT 4 mRNA表达及其与胰岛素分泌关系的实验研究

目的 观察非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)mRNA 表达及其与胰岛素分泌的关系。方法 制备NIDDM大鼠模型,用Northern blot方法测定骨骼肌组织中GLUT4mRNA表达量;放射免疫法测定血清胰岛素含量;免疫组化法观察胰岛胰岛素阳性β细胞。结果 NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达显著低下,仅为对照组的45%(P<0.01);其空腹基础胰岛素水平正常,但葡萄糖耐量试验胰岛素水平较对照组明显降低,2 h 胰岛素分泌有延迟现象;免疫组化实验NIDDM大鼠胰岛体积减少一半以上,胰岛素阳性β细胞数量明显减少。结论 NIDDM大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达量低下,该反应与体内胰岛素分泌水平呈现一定的正相关性。;     

鼠神经生长因子对坐骨神经痛大鼠背根神经节磷酸化p38MAPK表达的影响

目的:分析鼠神经生长因子对腰椎间盘突出致坐骨神经痛大鼠神经电生理及背根神经节（DRG）磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）表达的影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠90只,随机数字表法将其分为6组,正常组、模型组、阳性对照组、鼠神经生长因子低、中、高剂量组,每组各15只。除正常组外,其他各组大鼠制备腰椎间盘突出致坐骨神经痛模型。术后鼠神经生长因子低、中、高剂量组分别于硬膜外腔注射剂量为2.5 μL/100 g、5 μL/100 g及10 μL/100 g鼠神经生长因子,阳性对照组灌胃7.5 mg/kg的吲哚美辛药液,模型组和正常组大鼠注射等剂量生理盐水,1次/d,连续注射7 d。观察各组大鼠一般活动,机械缩足反应阈值（PWT）、热缩足反射潜伏期（PWL）、神经电生理、DRG内炎性因子、降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）含量及磷酸化p38MAPK表达状况。结果:与正常组相比,给药3、7 d后模型组大鼠PWL、PWT下降;与模型组相比,给药3、7 d后阳性对照组、鼠神经生长因子中、高剂量组大鼠PWL、PWT上升（P＜0.05）,且给药7 d效果优于给药3 d（P＜0.05）。与正常组相比,模型组大鼠DRG内SP、CGRP、TNF-α、IL-6及IL-1含量上升;与模型组相比,阳性对照组、鼠神经生长因子中、高剂量组大鼠DRG内SP、CFRP、TNF-α、IL-6及IL-1含量下降（P＜0.05）。与正常组相比,模型组大鼠DRG内p38MAPK表达上升;与模型组相比,阳性对照组、鼠神经生长因子中、高剂量组大鼠DRG内p38MAPK表达下降（P＜0.05）。结论:鼠神经生长因子可降低腰椎间盘突出致坐骨神经痛大鼠DRG神经元内磷酸化p38MAPK表达及炎性因子含量,改善神经传导功能。